丁香酚對(duì)“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚運(yùn)輸水質(zhì)及其血液、肌肉生理指標(biāo)的影響

丁香酚對(duì)“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚運(yùn)輸水質(zhì)及其血液、肌肉生理指標(biāo)的影響

唐忠林 張佳佳 周國(guó)勤 陳樹橋 徐鋼春 徐跑 強(qiáng)俊 王佩佩

(1 南京市水產(chǎn)科學(xué)研究所，江蘇南京 210036；2 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，江蘇無(wú)錫 214000)

大口黑鱸“優(yōu)鱸3號(hào)”(GS-01-001-2018)是2019年全國(guó)水產(chǎn)原種和良種審定委員會(huì)審定通過(guò)的新品種之一[1]，是以“優(yōu)鱸1號(hào)”(GS01-004-2010)和從美國(guó)引進(jìn)的北方亞種為基礎(chǔ)選育種群，經(jīng)連續(xù)4代選育而獲得的。相比“優(yōu)鱸1號(hào)”和未選育群體，“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚和成魚生長(zhǎng)速度更快，一般養(yǎng)殖5～7個(gè)月即可達(dá)到上市規(guī)格，適合在我國(guó)淡水水域采用配合飼料進(jìn)行養(yǎng)殖[2-3]。但目前我國(guó)鱸魚養(yǎng)殖主要集中在廣東、江蘇、浙江和四川等地，呈現(xiàn)出分布不均(沿海多內(nèi)地少、鄉(xiāng)村多城市少)的局面，導(dǎo)致產(chǎn)區(qū)賣魚難、銷區(qū)吃魚難，同種水產(chǎn)品在不同地區(qū)價(jià)格差異較大[4-5]。同時(shí)，鮮活魚和冰鮮魚的售價(jià)相差近1倍，鮮活魚和冷凍魚的價(jià)差甚至達(dá)幾倍、十幾倍，價(jià)格相差懸殊。因此，亟待研究安全有效的大口黑鱸活魚運(yùn)輸技術(shù)。

麻醉運(yùn)輸是一種較為常見的中長(zhǎng)途運(yùn)輸方式[6]，而丁香油(主要成分為丁香酚)作為天然藥物，被稱為是最有效的麻醉劑。丁香酚具有溶解性高、麻醉效果好、價(jià)格低、使用安全、易于管控等優(yōu)點(diǎn)[7]，目前已被應(yīng)用在鯔魚(Mugilcephalus)[8]、暗紋東方鲀(Takifuguobscurus)[9]、日本黃姑魚(Argyrosomusjaponicus)[10]等品種的生產(chǎn)運(yùn)輸上。

日本、澳大利亞、新西蘭等國(guó)已明確規(guī)定丁香酚可作為合法的漁用麻醉劑[7]，我國(guó)目前尚未出臺(tái)相關(guān)的規(guī)章制度。日本規(guī)定丁香酚藥浴劑量為50～200 μg/mL，休藥期為7 d，最高殘留量(MRL)為50 ng/mL[11]。聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)(JECFA)規(guī)定，丁香酚的每日允許攝入量(ADI)為0～2.5 mg/(kg·bw)[12]?？紤]到丁香酚在使用的過(guò)程中會(huì)在魚的肌肉和肝臟中富集，可能會(huì)帶來(lái)食品安全等問(wèn)題，已有學(xué)者進(jìn)行了相關(guān)的研究。王鵬等[13]抽檢了石斑魚、鱖魚和羅非魚，所檢樣品中異丁香酚殘留均小于6 mg/kg；王彩霞等[14]的研究結(jié)果也表明，經(jīng)過(guò)48 h復(fù)蘇后，加州鱸肝臟中的丁香酚可以完全代謝；經(jīng)7 d暫養(yǎng)后，魚肌肉中的丁香酚可完全代謝?？傮w上看，丁香酚類麻醉劑殘留對(duì)人體健康未構(gòu)成風(fēng)險(xiǎn)。

本研究以“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚為對(duì)象，開展靜態(tài)麻醉和麻醉運(yùn)輸試驗(yàn)，探索丁香酚最優(yōu)麻醉質(zhì)量濃度，并檢測(cè)麻醉運(yùn)輸過(guò)程中幼魚血液和肌肉生理指標(biāo)的變化，為丁香酚在“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚運(yùn)輸中的應(yīng)用提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚[體質(zhì)量(19.17±1.32) g，體長(zhǎng)(11.14±0.26) cm]來(lái)自江蘇南京帥豐飼料有限公司。試驗(yàn)魚暫養(yǎng)在有生物過(guò)濾循環(huán)處理系統(tǒng)的恒溫水族箱中，循環(huán)水流速為5 L/min，光照為14 h/d。暫養(yǎng)期間每天投喂2次(8:00—9:00和20:00—21:00)江蘇南京帥豐飼料有限公司生產(chǎn)的大口黑鱸配合飼料。整個(gè)暫養(yǎng)和試驗(yàn)期間水體溶解氧高于5 mg/L，氨氮和亞硝酸鹽質(zhì)量濃度均低于0.01 mg/L。試驗(yàn)前24 h停止飼喂，試驗(yàn)期間不投飼。

丁香酚購(gòu)自上海醫(yī)療器械有限公司。用乙醇作為溶劑制成10 g/L的母液，母液在使用當(dāng)天制備，并保存于深色玻璃瓶中。

1.2 靜水麻醉試驗(yàn)

麻醉試驗(yàn)在容量為10 L的水族箱中進(jìn)行，試驗(yàn)水溫為25 ℃。按丁香酚的質(zhì)量濃度設(shè)置9個(gè)梯度組(3、6、9、12、15、18、21、24和27 mg/L)，每個(gè)梯度組重復(fù)6尾魚，每尾魚單獨(dú)觀察并只使用1次，每重復(fù)3尾魚更換新鮮溶液。參照Cooke等[15]以及王文豪等[16]的分類標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的實(shí)際情況，將麻醉誘導(dǎo)過(guò)程分為5個(gè)階段，完全復(fù)蘇標(biāo)準(zhǔn)為行為完全恢復(fù)(見表1)。最終得出適宜的靜水麻醉劑質(zhì)量濃度范圍。再綜合運(yùn)輸需求、存活率和殘留代謝，選擇合適的運(yùn)輸麻醉劑質(zhì)量濃度。

表1 麻醉與復(fù)蘇階段“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的行為特征

1.3 模擬麻醉運(yùn)輸試驗(yàn)

設(shè)置5種運(yùn)輸密度(30、50、70、90、110、130 g/L)，每個(gè)密度組設(shè)3個(gè)平行，不添加麻醉劑模擬運(yùn)輸10 h，恢復(fù)24 h后統(tǒng)計(jì)存活率，得出適合 “優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的運(yùn)輸密度。

以上述合適的麻醉劑濃度和運(yùn)輸密度，模擬運(yùn)輸10 h，檢測(cè)運(yùn)輸過(guò)程中和運(yùn)輸后的水質(zhì)變化以及幼魚血液和肌肉相關(guān)指標(biāo)的變化。試驗(yàn)設(shè)置2個(gè)處理組：試驗(yàn)組(麻醉+運(yùn)輸)和對(duì)照組(無(wú)麻醉+運(yùn)輸)，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)水溫為25.0 ℃，用氣石微充氣，將整理箱固定于恒溫振蕩器中，以轉(zhuǎn)速70 r/min模擬運(yùn)輸10 h。分別在運(yùn)輸0、2、4、6、8、10 h的時(shí)間點(diǎn)取樣。

1.4 水質(zhì)檢測(cè)

試驗(yàn)結(jié)束后，立即采集運(yùn)輸水質(zhì)于50 mL的聚乙烯離心管中，加蓋密封。同時(shí)，用便攜式氨氮測(cè)定儀測(cè)定水體的酸堿度(pH)和氨氮(NH4+-N)質(zhì)量濃度。

1.5 血清指標(biāo)測(cè)定

每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取3尾魚，無(wú)抗凝劑尾靜脈取血，合并為1個(gè)混合樣，每個(gè)處理組共3個(gè)血液樣本。全血樣品在4 ℃下靜置12 h，待血液分層后以3 000 r/min離心10 min，收集血清于2 mL離心管中。測(cè)定皮質(zhì)醇、乳酸、尿素氮的含量和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性，所用試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.6 肌肉指標(biāo)測(cè)定

每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取3尾魚，取肌肉組織0.1 g，加入0.9 mL的生理鹽水，冰水浴勻漿，以2 500 r/min離心10 min，取上清液測(cè)定蛋白質(zhì)濃度和乳酸含量。稱取5 g去骨去皮的魚肉，加雙蒸水勻漿2 min，定容至100 mL，轉(zhuǎn)入離心管中，以5 000 r/min 離心10 min，過(guò)濾，取上清液測(cè)定pH。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均用(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)的方式表示，所有數(shù)據(jù)均用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。利用單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan’s多重比較檢驗(yàn)法對(duì)同一試驗(yàn)組不同時(shí)間點(diǎn)以及不同試驗(yàn)組同一時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和檢驗(yàn)分析，設(shè)顯著性水平為0.05。用Origin 8.6軟件繪圖。

2 結(jié)果

2.1 丁香酚對(duì)“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的靜水麻醉及復(fù)蘇效果

不同質(zhì)量濃度丁香酚對(duì)“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的麻醉及復(fù)蘇效果見表2。由表2可知，質(zhì)量濃度為3～27 mg/L的丁香酚均能使“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚進(jìn)入鎮(zhèn)靜期，并且復(fù)蘇率均為100%，質(zhì)量濃度在21～27 mg/L，幼魚進(jìn)入A1(輕度鎮(zhèn)靜期)的時(shí)間無(wú)顯著性差異(P>0.05)；質(zhì)量濃度6 mg/L的丁香酚能使“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚進(jìn)入輕度麻醉期；質(zhì)量濃度9～27 mg/L的丁香酚均能使其進(jìn)入深度麻醉期，且隨著丁香酚濃度的增加，“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚進(jìn)入相同麻醉時(shí)期的時(shí)長(zhǎng)縮短，同時(shí)完全復(fù)蘇的時(shí)間也隨之延長(zhǎng)。復(fù)蘇24 h內(nèi)，丁香酚質(zhì)量濃度為24 mg/L和27 mg/L的組“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚出現(xiàn)死亡，且死亡率隨著麻醉劑濃度的增加而提高。綜合考慮運(yùn)輸實(shí)際需求、成活率和殘留代謝等因素，選擇在“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚模擬運(yùn)輸試驗(yàn)中麻醉劑的質(zhì)量濃度為6 mg/L。

表2 不同質(zhì)量濃度丁香酚對(duì)“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的麻醉及復(fù)蘇效果

2.2 “優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚在不同運(yùn)輸密度下的存活率

不同密度模擬運(yùn)輸后“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的存活率情況見圖1。試驗(yàn)魚經(jīng)10 h模擬運(yùn)輸后，30～90 g/L密度組的存活率和復(fù)蘇后24 h成活率均為100%；當(dāng)密度達(dá)到110 g/L時(shí)，試驗(yàn)魚出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，且恢復(fù)24 h期間也出現(xiàn)死亡，因此，選擇90 g/L為“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚最適宜運(yùn)輸密度。

圖1 不同密度運(yùn)輸后“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的存活率

2.3 模擬麻醉運(yùn)輸中水質(zhì)指標(biāo)的變化

由圖2-a可知，模擬麻醉運(yùn)輸開始時(shí)運(yùn)輸箱內(nèi)水體pH約為7.5，前2 h內(nèi)試驗(yàn)組水體pH的變化不顯著(P>0.05)。隨著運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)的增加，試驗(yàn)組和對(duì)照組的pH均顯著降低(P<0.05)。模擬運(yùn)輸試驗(yàn)過(guò)程中，試驗(yàn)組的pH一直高于對(duì)照組。運(yùn)輸10 h時(shí)對(duì)照組的pH最低約為6.6。

由圖2-b可知，在模擬運(yùn)輸開始時(shí)水體中氨氮的質(zhì)量濃度均低于0.1 mg/L。隨著運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)增加，對(duì)照組和試驗(yàn)組水體的氨氮質(zhì)量濃度均顯著上升(P<0.05)，但與對(duì)照組相比，麻醉組相同運(yùn)輸時(shí)間的氨氮含量有明顯降低 (P<0.05)。

注：不同字母表示同組不同運(yùn)輸時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)；*表示與對(duì)照組同一時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)。圖2 “優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚模擬麻醉運(yùn)輸時(shí)水質(zhì)變化情況

2.4 模擬麻醉運(yùn)輸過(guò)程中血清指標(biāo)變化

由圖3-a可以看出，隨著運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)的增加，“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚血清中的皮質(zhì)醇含量(COR)總體呈先上升再下降的趨勢(shì)，其中對(duì)照組在運(yùn)輸6 h時(shí)達(dá)到峰值，隨后下降，但在運(yùn)輸模擬結(jié)束時(shí)依舊顯著高于運(yùn)輸開始時(shí)(P<0.05)；麻醉組在運(yùn)輸2 h時(shí)即達(dá)到最高值，隨后開始下降，但在運(yùn)輸模擬結(jié)束時(shí)依舊顯著高于運(yùn)輸開始時(shí)(P<0.05)。在整個(gè)模擬運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中，除運(yùn)輸4 h時(shí)兩個(gè)組COR含量無(wú)顯著差異外，其余時(shí)間點(diǎn)均存在顯著差異(P<0.05)。其中，運(yùn)輸2 h時(shí)麻醉組高于對(duì)照組。

由圖3-b可以看出，隨著運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)，“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性總體呈上升趨勢(shì)，模擬運(yùn)輸結(jié)束時(shí)對(duì)照組AST活性與運(yùn)輸起始相比提高了4.57倍，麻醉組則提高了3.88倍。在模擬運(yùn)輸?shù)?—6 h，麻醉組AST活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，模擬運(yùn)輸8—10 h，麻醉組AST活性低于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)。

由圖3-c可以看出，隨著運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)，“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚血清中尿素氮(BUN)的含量有所增加，但是在運(yùn)輸?shù)那? h變化不是非常顯著。模擬運(yùn)輸結(jié)束時(shí)對(duì)照組的BUN含量與運(yùn)輸起始相比增加了0.74倍，麻醉組增加了0.37倍。在整個(gè)模擬運(yùn)輸試驗(yàn)過(guò)程中麻醉組BUN含量均低于對(duì)照組，且在運(yùn)輸?shù)?—10 h顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

由圖3-d可以看出，隨著運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)，“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚血清中的乳酸(LD)含量顯著增加(P<0.05)。在模擬運(yùn)輸2 h時(shí)，對(duì)照組LD含量沒(méi)有明顯變化(P>0.05)，而麻醉組LD含量顯著增加了(P<0.05)。模擬運(yùn)輸試驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)照組LD含量與運(yùn)輸起始相比增加了3.27倍，麻醉組增加了2.48倍。在整個(gè)模擬運(yùn)輸試驗(yàn)過(guò)程中，麻醉組的LD含量均低于對(duì)照組，且在運(yùn)輸?shù)?—10 h顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

2.5 模擬麻醉運(yùn)輸過(guò)程中肌肉指標(biāo)變化

“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚在麻醉模擬運(yùn)輸中肌肉指標(biāo)的變化見圖4?？梢钥闯觯皟?yōu)鱸3號(hào)”幼魚在運(yùn)輸過(guò)程中肌肉乳酸、pH均發(fā)生了一定程度的變化，二者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。其中對(duì)照組乳酸的含量隨著運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)顯著升高(P<0.05)，在運(yùn)輸10 h時(shí)達(dá)到1.95 mmol/(g·prot)，為運(yùn)輸起始時(shí)的3.09倍；麻醉組在運(yùn)輸4 h時(shí)顯著升高(P<0.05)，直至運(yùn)輸10 h時(shí)肌肉乳酸的含量達(dá)到1.36 mmol/(g·prot)，相對(duì)初始時(shí)升高了1.15倍。模擬運(yùn)輸過(guò)程中麻醉組乳酸的積累量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。肌肉pH的變化與乳酸相反，總體呈下降趨勢(shì)，且變化顯著(P<0.05)。對(duì)照組由最初的7.02下降至6.59，降低了6.21%。麻醉試驗(yàn)組由起始的7.02下降至6.73，降低了4.19%。運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中麻醉組pH均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

注：不同字母表示同組不同運(yùn)輸時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)；*表示與對(duì)照組同一時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)有顯著性差異(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)。圖3 “優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚在麻醉模擬運(yùn)輸中血液指標(biāo)的變化

3 討論

3.1 丁香酚對(duì)“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的麻醉效果

丁香酚作為天然的麻醉劑，自1972年被發(fā)現(xiàn)對(duì)魚類有麻醉作用后，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已對(duì)多種魚類進(jìn)行了麻醉試驗(yàn)，如革胡子鯰(Clariasgariepinus)[17]、斑點(diǎn)叉尾魚回(IetalurusPunetaus)[18]等，均獲得了較好的麻醉效果。從本試驗(yàn)結(jié)果看，丁香酚能快速達(dá)到麻醉和復(fù)蘇效果，具有較高的時(shí)效性。但是麻醉劑量的選擇也是麻醉運(yùn)輸中重要的一環(huán)，麻醉劑濃度過(guò)高可能會(huì)使魚體出現(xiàn)窒息死亡，降低成活率，例如質(zhì)量濃度66 mg/L的丁香酚使得大西洋鮭死亡率高達(dá)90%[19]；而麻醉劑濃度過(guò)低則不能使魚在運(yùn)輸過(guò)程中處于鎮(zhèn)靜狀態(tài)。本試驗(yàn)中，當(dāng)丁香酚質(zhì)量濃度在6～27 mg/L時(shí)，“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚均能進(jìn)入深度鎮(zhèn)靜和麻醉期。但當(dāng)丁香酚的濃度高于24 mg/L時(shí)，幼魚出現(xiàn)死亡。原因可能是丁香酚麻醉濃度過(guò)高，過(guò)量的丁香酚聚積在魚的肝臟，使得魚類死亡[20]，也可能是過(guò)度麻醉降低了魚體的呼吸頻率，導(dǎo)致其動(dòng)脈中氧分壓降低，呼吸不暢，加上血氧降低、二氧化碳升高，因而魚的血壓和心率發(fā)生變化[21]。另外，王文豪等[16]發(fā)現(xiàn)，16 mg/L的丁香酚能引起體質(zhì)量為130 g的大口黑鱸死亡，這一結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果稍有差異，原因可能是相較于普通大口黑鱸，“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚對(duì)丁香酚的耐受性有所增強(qiáng)，同時(shí)也可能與魚體大小、溫度等因素有關(guān)[14]。相似的結(jié)果也在對(duì)白魚(Coregonuslavaretus)[22]和大西洋鮭[18]的麻醉試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)。Marking等[23]認(rèn)為，理想的麻醉劑濃度是3 min內(nèi)能夠使魚麻醉，5 min內(nèi)能夠令其蘇醒。按照此標(biāo)準(zhǔn)，12～18 mg/L的丁香酚麻醉液是“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚靜水麻醉的理想麻醉劑濃度。但是，在實(shí)際運(yùn)輸生產(chǎn)中還應(yīng)該綜合考慮運(yùn)輸時(shí)間、成活率、殘留代謝等因素，因此，在模擬麻醉運(yùn)輸試驗(yàn)時(shí)選取的麻醉劑質(zhì)量濃度為6 mg/L。

圖4 “優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚麻醉模擬運(yùn)輸中肌肉指標(biāo)的變化

3.2 運(yùn)輸密度

高密度運(yùn)輸可以有效降低運(yùn)輸?shù)某杀?，但是密度過(guò)高會(huì)使魚苗相互擠壓，從而導(dǎo)致魚受傷甚至死亡。同時(shí)高密度運(yùn)輸會(huì)引起水體中氨氮、溶解氧和pH的顯著變化，不良的水質(zhì)也會(huì)使魚受到傷害，或在運(yùn)輸后出現(xiàn)免疫力降低，發(fā)生病害甚至死亡，這都不利于養(yǎng)殖生產(chǎn)[24-25]。陳旭等[26]研究發(fā)現(xiàn)，隨著尖吻鱸(Latescalcarifer)運(yùn)輸密度的提高，運(yùn)輸水體中氨氮、亞硝酸鹽濃度顯著升高，溶解氧和pH顯著降低。張偉等[27]對(duì)大黃魚(Larimichthyscrocea)的運(yùn)輸試驗(yàn)也得出了類似的結(jié)論，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨著運(yùn)輸密度的增加，幼魚的死亡率也顯著升高，當(dāng)運(yùn)輸密度為8 g/L時(shí)，魚的死亡率接近50%。由此可以看出，選擇合適的運(yùn)輸密度在實(shí)際生產(chǎn)運(yùn)輸中尤為關(guān)鍵。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的密度高于110 g/L時(shí)，幼魚出現(xiàn)死亡，且恢復(fù)24 h后仍然出現(xiàn)死亡；王文豪等[16]以130 g/L的密度進(jìn)行大口黑鱸運(yùn)輸，運(yùn)輸后魚的死亡率為80%，恢復(fù)24 h死亡率為60%。綜上，本試驗(yàn)選取“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚的模擬運(yùn)輸密度為90 g/L。

3.3 麻醉運(yùn)輸對(duì)水質(zhì)的影響

水體是魚類進(jìn)行氣體交換和離子交換的主要媒介，同時(shí)也是代謝魚體廢物的凈化劑。但在魚類的運(yùn)輸中，由于運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)、容器、運(yùn)輸密度等客觀因素的影響，運(yùn)輸水體的水質(zhì)會(huì)劇烈變化，從而影響運(yùn)輸效率和成活率[28-29]。本試驗(yàn)以90 g/L的運(yùn)輸密度，在25 ℃的運(yùn)輸溫度下，隨著運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)，運(yùn)輸水體逐漸變得混濁，氨氮含量顯著升高，pH顯著降低。相似的結(jié)果也在翹嘴鲌(Culteralburnus)[29]、倒刺鲃(Spinibarbusdenticulatus)[30]等運(yùn)輸中發(fā)現(xiàn)。原因可能是運(yùn)輸震動(dòng)、擠壓等脅迫使得魚類代謝速率加快，繼而耗氧率增加，CO2和氨氮等代謝廢物的排泄量也增加。而CO2溶于水中又會(huì)導(dǎo)致水體pH降低[26]，當(dāng)pH偏低時(shí)，水體中亞硝酸鹽、硫化氫的毒性增強(qiáng)。同時(shí)，CO2在血漿中富集會(huì)導(dǎo)致血漿酸化，降低血液的攜氧能力和血紅蛋白對(duì)氧氣的親和力[31]。另一方面，當(dāng)水體中氨氮含量過(guò)高時(shí)，還會(huì)抑制魚體向外排氨，從而導(dǎo)致魚體血液中氨氮含量顯著升高，血液的載氧能力降低，使魚體缺氧而死[32]。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)添加丁香酚的麻醉組水體中氨氮含量顯著低于對(duì)照組，pH顯著高于對(duì)照組，原因可能是丁香酚使幼魚處于鎮(zhèn)靜狀態(tài)。在這種狀態(tài)下，幼魚活動(dòng)量減少，相互之間的摩擦擠壓會(huì)減少，同時(shí)呼吸頻率有所減弱，CO2和氨氮等代謝廢物的排泄速率也會(huì)隨之減弱。值得一提的是，王利娟[33]在用丁香油麻醉運(yùn)輸大口黑鱸的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，隨著運(yùn)輸時(shí)間的增加，因而水體pH不斷升高，這與本試驗(yàn)的結(jié)果不一致。原因可能是水體中氨氮的含量還沒(méi)有達(dá)到抑制魚體氨氮排放的濃度，魚體仍然可以持續(xù)排氨，因而水體pH持續(xù)升高；也可能是運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)的原因。有研究表明，隨著運(yùn)輸時(shí)間的增加，魚體氨的排泄速率會(huì)明顯上升[23]。

3.4 麻醉運(yùn)輸對(duì)幼魚血液指標(biāo)的影響

運(yùn)輸過(guò)程中的長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)震蕩搖晃，會(huì)造成魚類機(jī)體較大程度的應(yīng)激和其他繼發(fā)損傷，這些首先會(huì)表現(xiàn)在生理指標(biāo)的變化上。皮質(zhì)醇(COR)、尿素氮(BUN)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和乳酸(LD)是最直接的指標(biāo)，被廣泛用于評(píng)價(jià)魚體健康狀況及對(duì)環(huán)境的適應(yīng)情況[24，34]。

皮質(zhì)醇(COR)是腎上腺在應(yīng)激反應(yīng)中產(chǎn)生的類激素，作為激素反應(yīng)鏈的最后一項(xiàng)激素，其變化可以作為生物體應(yīng)激狀態(tài)的重要指標(biāo)[23]。大量的研究表明，在溫度、鹽度及運(yùn)輸擠壓等各種脅迫應(yīng)激下，都會(huì)引起COR的升高，且COR隨著應(yīng)激強(qiáng)度的增加而上升[35-36]。例如，褐牙鲆在鹽度為3的條件下脅迫1 d后,其血漿COR顯著升高[35]；以8 g/L的密度運(yùn)輸大黃魚幼魚，運(yùn)輸后COR的含量為運(yùn)輸前的4倍多[27]；以質(zhì)量濃度5 mg/L的丁香酚麻醉卵形鯧鲹魚苗，魚苗的血清COR顯著升高[37]。本試驗(yàn)中，麻醉組和對(duì)照組的COR含量均顯著升高，這說(shuō)明在運(yùn)輸過(guò)程中魚體因?yàn)檎饎?dòng)搖晃產(chǎn)生了應(yīng)激。值得關(guān)注的是，麻醉組COR達(dá)到峰值的時(shí)間要早于對(duì)照組，原因可能是丁香酚對(duì)魚體有一定的刺激作用，但是隨著運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)，COR均有所下降，可能是魚體適應(yīng)了麻醉劑的刺激，同時(shí)麻醉劑降低了魚體對(duì)外界的應(yīng)激。

谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)主要存在于肝臟組織中，是肝臟中連接糖、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)代謝的重要酶。正常情況下，機(jī)體血清中AST活性較低且相對(duì)穩(wěn)定，但當(dāng)組織器官受損時(shí)，AST就會(huì)大量釋放到血液中，使血清AST活性增強(qiáng)，因此AST可以作為肝臟受損的指標(biāo)[34,38]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在開始運(yùn)輸?shù)?—6 h，麻醉組的AST活性顯著高于對(duì)照組，這與王文豪等[16]采用50 mg/L MS-222和10 mg/L丁香酚麻醉運(yùn)輸大口黑鱸幼魚的結(jié)果類似，推測(cè)可能是丁香酚會(huì)引起肝臟方面的問(wèn)題[20]。本試驗(yàn)運(yùn)輸結(jié)束時(shí)，對(duì)照組和麻醉組的AST活性均顯著升高，相似的結(jié)果也在斑點(diǎn)叉尾魚回[39]、鯽魚[40]的?；钸\(yùn)輸中發(fā)現(xiàn)。原因可能是麻醉劑對(duì)幼魚的肝臟產(chǎn)生了影響，幼魚為了應(yīng)對(duì)丁香酚麻醉的脅迫，體內(nèi)合成釋放更多的酶，從而導(dǎo)致AST活性升高，也可能是運(yùn)輸水體中氨氮濃度升高，對(duì)魚的肝臟結(jié)構(gòu)損傷較大。

尿素氮(BUN)是反映腎功能代謝的重要指標(biāo)[14]。本試驗(yàn)中，運(yùn)輸前期對(duì)照組和麻醉組BUN含量的變化并不顯著，這與大口黑鱸[14,33]的運(yùn)輸結(jié)果相似，表明在短途運(yùn)輸時(shí)，魚體會(huì)自我調(diào)節(jié)，應(yīng)對(duì)運(yùn)輸過(guò)程的各種脅迫。但是隨著運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)，BUN的含量顯著升高。原因可能是魚體新陳代謝使得水體中氨氮濃度過(guò)高，從而抑制了魚類排氨，導(dǎo)致魚體內(nèi)BUN升高；也可能是長(zhǎng)時(shí)間的震動(dòng)刺激導(dǎo)致魚體的蛋白質(zhì)代謝異常，其腎功能出現(xiàn)障礙或受損部分[33]。

乳酸(LD)是魚體肌肉無(wú)氧代謝產(chǎn)物，對(duì)機(jī)體有一定危害。在本試驗(yàn)中，運(yùn)輸開始2 h時(shí)對(duì)照組LD含量無(wú)明顯變化，而麻醉組的LD含量顯著增加(P<0.05)，原因可能是丁香酚對(duì)其產(chǎn)生了一定的刺激[41]，導(dǎo)致魚體血漿乳酸濃度升高。運(yùn)輸結(jié)束時(shí)對(duì)照組和麻醉組血清和肌肉中的LD含量都顯著升高，但麻醉組的LD含量低于對(duì)照組，可能是震動(dòng)等因素導(dǎo)致魚體肌肉無(wú)氧代謝顯著增加。如銀鯧[42]在經(jīng)過(guò)12 h運(yùn)輸后，其血清和肌肉中的乳酸含量在運(yùn)輸脅迫后均顯著升高。

3.5 麻醉運(yùn)輸對(duì)幼魚肌肉指標(biāo)的影響

大量的研究表明，不論是無(wú)水?；钸\(yùn)輸還是有水保活運(yùn)輸均會(huì)導(dǎo)致魚類肌肉pH降低[34,43]。本試驗(yàn)結(jié)果也顯示，對(duì)照組和麻醉組肌肉的pH均隨著運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，乳酸含量則增加了，這與王彩霞等[14]、王利娟[33]對(duì)大口黑鱸的研究結(jié)果一致。引起肌肉pH下降的主要原因是無(wú)氧代謝增加，肌肉組織中的糖原發(fā)生無(wú)氧酵解而生成大量乳酸，同時(shí)水體中氨氮脅迫也使肌肉pH下降。隨著pH下降，魚體就會(huì)出現(xiàn)肌肉硬度降低、肉質(zhì)松散等問(wèn)題。但是王彩霞等[14]發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的暫養(yǎng)，魚體肌肉可恢復(fù)到正常水平，原因可能是魚體內(nèi)的乳酸被乳酸脫氫酶催化轉(zhuǎn)化代謝掉了。也有研究認(rèn)為，在低溫條件下進(jìn)行運(yùn)輸，魚體呼吸強(qiáng)度降低，不會(huì)積累大量乳酸而引起pH快速下降[34]。因此，在活魚運(yùn)輸中要盡可能降低運(yùn)輸溫度。同時(shí)在運(yùn)輸結(jié)束后可暫養(yǎng)幾天，待魚體恢復(fù)后再上市，這樣可以保證魚肉的品質(zhì)，同時(shí)也使丁香酚的殘留物盡可能代謝掉，保障食品安全。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)中，隨著丁香酚質(zhì)量濃度的升高，幼魚進(jìn)入麻醉期的時(shí)間縮短，復(fù)蘇時(shí)間延長(zhǎng)，12～18 mg/L的丁香酚是“優(yōu)鱸3號(hào)”幼魚理想的靜水麻醉液。但綜合考慮運(yùn)輸需求、魚的存活率和殘留代謝等因素，模擬麻醉運(yùn)輸中采用的丁香酚麻醉液的質(zhì)量濃度以6 mg/L為宜。在90 g/L的運(yùn)輸密度下模擬麻醉運(yùn)輸10 h，運(yùn)輸水質(zhì)會(huì)惡化，也會(huì)使魚體產(chǎn)生一定的應(yīng)激反應(yīng)，血液中皮質(zhì)醇(COR)、尿素氮(BUN)和乳酸(LD)含量以及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性升高，肌肉中pH降低，乳酸(LD)升高。但是使用丁香酚麻醉液可以使相關(guān)指標(biāo)的變化程度減弱，有利于減輕“優(yōu)鱸3號(hào)”的應(yīng)激反應(yīng)。