腸孢子蟲：白對(duì)蝦生長緩慢的元兇

圖為患微孢子蟲的對(duì)蝦，俗稱“棉花蝦”，發(fā)病蝦肌肉白濁

對(duì)蝦腸孢子蟲起源

對(duì)蝦腸孢子蟲（enterocytozoon hepatopenaei，EHP，中國黃海水產(chǎn)研究所有提到過該病，縮寫ECZ）是由一種微孢子蟲寄生引起的，因2009年在泰國斑節(jié)對(duì)蝦（P. monodon）上表現(xiàn)出來的癥狀而命名。它是在生長緩慢的蝦身上發(fā)現(xiàn)的，那時(shí)還沒有生長緩慢的相關(guān)統(tǒng)計(jì)。EHP只局限于對(duì)蝦肝胰腺（HP），其形態(tài)類似于2001年澳大利亞報(bào)道的在日本對(duì)蝦（P. japonicas）肝胰腺中發(fā)現(xiàn)但未命名的微孢子蟲。同時(shí)，這些研究表明EHP對(duì)澳大利亞來說不是一個(gè)外來病原體，而是澳大利亞特有的。后來，人們發(fā)現(xiàn)EHP也能夠感染亞洲進(jìn)口養(yǎng)殖的南美白對(duì)蝦（P. vannamei），而且蝦與蝦之間的直接傳播方式可能是經(jīng)口傳播。與以前報(bào)道的常見微孢子蟲導(dǎo)致棉花蝦不同的是，腸孢子蟲的傳播需要一個(gè)中間宿主-魚，這就意味著從生產(chǎn)系統(tǒng)中排出魚能中斷傳播。

為什么說EHP應(yīng)引起重視？

盡管EHP還沒有引起對(duì)蝦死亡，但從蝦農(nóng)那里得到的信息表明EHP與南美白對(duì)蝦生長緩慢密切相關(guān)。因此，我們2009年后就開始提醒亞洲蝦農(nóng)和育苗場(chǎng)在南美白對(duì)蝦和斑節(jié)對(duì)蝦幼體（PL）期和養(yǎng)殖過程中加強(qiáng)對(duì)EHP的監(jiān)控。然而這些提醒并沒有引起足夠的重視，因?yàn)榇蠹业囊暰€都集中在早死綜合癥（EMS）和急性肝胰腺壞死癥（AHPND）。我們擔(dān)心在缺乏關(guān)注的情況下，EHP在生產(chǎn)系統(tǒng)中發(fā)展壯大，并在EMS/AHPND的掩蓋下傳播。我們擔(dān)心EMS/AHPND問題的解決可能會(huì)導(dǎo)致生長緩慢成為隨后廣泛傳播的另一個(gè)問題。實(shí)際上，這個(gè)問題已經(jīng)在過去一年左右的時(shí)間里發(fā)生了，我們現(xiàn)在得到的信息顯示EHP疫情正在中國、印尼、馬來西亞和泰國廣泛發(fā)生。最近，我們也收到了來自印度的生長緩慢的樣品，該樣品EHP的PCR檢測(cè)為陽性。因此，EHP是一個(gè)新興的問題，迫切需要控制。

如何控制EHP在國際上傳播？

巢式PCR檢測(cè)方法和LAMP檢測(cè)方法檢查親蝦糞便和幼體來確定EHP是否存在是可行的。病原體也可以通過光學(xué)顯微鏡100倍鏡下觀察肝胰腺組織切片或肝胰腺涂片觀察到，不過該方法是基于找到典型的孢子，孢子個(gè)體極?。ㄩL度小于一微米），而且有時(shí)即使在感染嚴(yán)重的標(biāo)本中產(chǎn)生的數(shù)量也很少。因此，PCR是優(yōu)先考慮的檢測(cè)方法。

我們手頭的數(shù)據(jù)顯示：泰國大多數(shù)進(jìn)口的南美白對(duì)蝦SPF種苗是沒有EHP的，但因?yàn)榭共×^弱，蝦苗很容易受到孵化設(shè)施和孵化場(chǎng)污染。盡管我們不斷反對(duì)，大家仍廣泛使用當(dāng)?shù)鼗蜻M(jìn)口的活餌料（如：多毛類、蛤等）喂養(yǎng)親蝦，這是生物安全的一個(gè)嚴(yán)重缺陷。我們有很確切的數(shù)據(jù)表明，一些活的當(dāng)?shù)睾蛠喼捱M(jìn)口的多毛類進(jìn)行AHPND/EHP的PCR檢測(cè)結(jié)果顯示為陽性。還有一種可能性，一些擁有SPF標(biāo)簽的進(jìn)口南美白對(duì)蝦苗的EHP檢測(cè)也可能是陽性，因?yàn)镋HP并不在多數(shù)SPF供應(yīng)商或檢疫機(jī)構(gòu)認(rèn)定的世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列表。這個(gè)問題可以通過將EHP加入供應(yīng)商和檢疫機(jī)構(gòu)的SPF列表來解決。親蝦糞便可以通過巢式PCR檢測(cè)EHP是否存在。

為育苗和孵化場(chǎng)避免EHP的最好方法是不要使用活餌料（多毛類、蛤、牡蠣等）喂養(yǎng)親蝦。如果這個(gè)建議被忽略，最低限度也應(yīng)該在使用前先冷凍，這樣至少可以殺死AHPND病原菌和EHP。最好是使用巴氏滅菌法（70℃加熱十分鐘），可以殺滅大部分蝦類病毒（冷凍做不到）。還有一種方法是利用γ射線（伽馬射線）輻照冷凍飼料。

如何控制孵化場(chǎng)的EHP？

中國、越南和泰國的親蝦中都有發(fā)現(xiàn)EHP和AHPND病原菌，這兩個(gè)病原在喂養(yǎng)親蝦的活多毛綱樣本中也有報(bào)道。如果從任何育苗場(chǎng)拿的幼蝦生長均慢于預(yù)期，這就要懷疑是EHP作怪。

因此，首先要解決的問題就是確保親蝦培育池和育苗池設(shè)施是干凈的。為達(dá)到這個(gè)目標(biāo)，所有蝦必須從育苗池轉(zhuǎn)移，然后用2.5%的氫氧化鈉（每升水中加入25克氫氧化鈉）溶液清洗池子，3個(gè)小時(shí)后洗掉。用上述方法處理所有的設(shè)備、過濾器、水池和管道，用氫氧化鈉清洗過的育苗池應(yīng)干燥7天，然后再用酸化氯（pH<4.5，有效氯含量200ppm）沖洗。

接下來的問題就是親蝦，正如上面提到的，一些SPF親蝦EHP的PCR檢測(cè)為陽性，但并沒有檢測(cè)到AHPND病原菌。因此，所謂的SPF親蝦在進(jìn)入培育池和孵化場(chǎng)之前應(yīng)該檢疫是否攜帶EHP。我們?cè)谔﹪墓ぷ鞅砻?，進(jìn)口SPF蝦最初雖沒有攜帶EHP，但進(jìn)入到當(dāng)?shù)爻靥琉B(yǎng)殖后表現(xiàn)出非常高的EHP患病率。如上所述，可以通過巢式PCR技術(shù)從糞便中提取DNA模板，用來檢測(cè)親蝦糞便的EHP。

如何控制養(yǎng)殖中的EHP？

對(duì)蝦農(nóng)來說，有兩個(gè)主要的問題需要處理。第一個(gè)問題是確保放養(yǎng)的蝦苗沒有被EHP感染，這點(diǎn)通過PCR檢測(cè)可以很容易做到。如果檢測(cè)幼體AHPND病原菌的DNA已經(jīng)被提取，相同DNA的一部分即可以用來檢測(cè)EHP。蝦農(nóng)不應(yīng)該使用攜帶任何一種病原體的幼體進(jìn)行養(yǎng)殖。

第二個(gè)蝦農(nóng)需要注意的問題是，養(yǎng)殖間隔期間應(yīng)適當(dāng)?shù)奶幚沓靥?，特別是上一造養(yǎng)殖期間感染了EHP的池塘。EHP的孢子有很厚的細(xì)胞壁，而且不容易滅活，即使很高濃度的氯也沒效果。此外，潛在的環(huán)境載體也是未知的。在收獲后，AHPND和EHP的病原體可能仍然存在池塘中，所以在開始下造養(yǎng)殖前將病原菌殺滅非常重要。

殺滅池塘底泥中EHP孢子，可以采用氧化鈣（生石灰），用量為6噸/公頃（400公斤/畝）。將氧化鈣放置在池塘沉積物10-12厘米深處，放置一星期后曬干或進(jìn)水。使用氧化鈣之后，土壤的pH值會(huì)升到12或者更高，但幾天后氧化鈣吸收二氧化碳變成碳酸鈣，pH就會(huì)降回到正常范圍內(nèi)。