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各種免疫刺激劑的特性及其用法

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免疫刺激劑(immunologic stimulant)是指能夠調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫系統(tǒng)并激活免疫機(jī)能,增強(qiáng)機(jī)體對(duì)細(xì)菌和病毒等傳染性病原體抵抗力的一類物質(zhì)。多年來,國(guó)內(nèi)、外均開展了將免疫刺激劑用于養(yǎng)殖水生動(dòng)物傳染性疾病預(yù)防的研究,其主要目的是為了將免疫刺激劑用于預(yù)防使用化學(xué)藥物難于奏效的養(yǎng)殖水生動(dòng)物的病毒和細(xì)菌性疾病。

1 免疫刺激劑的種類與特性

大量研究結(jié)果已經(jīng)證明,對(duì)動(dòng)物免疫系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)和激活作用的物質(zhì)很多種,能激活魚、蝦類免疫系統(tǒng)的物質(zhì)也有很多種。根據(jù)其來源,大致可以分為來自細(xì)菌的肽聚糖和LPS、放線菌的短肽、酵母菌和海藻的β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖和來自甲殼動(dòng)物外殼的甲殼質(zhì)、殼多糖等具有免疫刺激活性的物質(zhì)。

將上述各種具有免疫刺激活性物質(zhì)投與魚類時(shí),可以提高魚類體內(nèi)溶菌酶和補(bǔ)體的活性,增加魚體中補(bǔ)體的C3成分活性;不僅可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞的吞噬活性,而且還可以提高這些細(xì)胞的殺菌活性;激活自然殺傷細(xì)胞(NK),增強(qiáng)其殺傷異物細(xì)胞的活性外,還能促進(jìn)巨噬細(xì)胞白細(xì)胞介素-2(IL-2)。除了能增強(qiáng)魚類的非特異性免疫機(jī)能外,還具有增強(qiáng)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體的功能。對(duì)養(yǎng)殖蝦類投與免疫刺激劑,首先是能提高蝦體內(nèi)大、小顆粒細(xì)胞的吞噬和殺菌活性,促進(jìn)其血細(xì)胞趨化因子的釋放;提高proPO活化系統(tǒng)的活性,從而增強(qiáng)其機(jī)體對(duì)各種傳染性病原的抵抗力。

1.1 革蘭氏陽性菌與菌體肽聚糖

革蘭氏陽性菌的滅活菌體具有激活動(dòng)物免疫機(jī)能的作用,其作用的主效成分是菌體細(xì)胞壁中的肽聚糖類物質(zhì)。并非所有的革蘭氏陽性菌均具有這種功能,而只有特定的菌種和特定的菌株具有對(duì)動(dòng)物免疫系統(tǒng)的免疫刺激功能。

將革蘭氏陽性菌嗜熱雙歧桿菌(Bifidobacterium thermophilum)細(xì)胞壁中提取的肽聚糖定量投喂養(yǎng)殖魚類后,在提高魚體的巨噬細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞的吞噬能力與過氧化物酶活性的同時(shí),還能增強(qiáng)魚體體液中溶菌酶的活性。對(duì)養(yǎng)殖對(duì)蝦投與這類物質(zhì)可以提高其粒細(xì)胞的吞噬活性并增加細(xì)胞中超氧化歧化酶的生成量,同時(shí)提高酚氧化酶的活性。由于這類免疫刺激劑能激活養(yǎng)殖水生動(dòng)物的免疫機(jī)能,已經(jīng)有試驗(yàn)結(jié)果證明,定量給予這類物質(zhì)可以提高虹鱒(Oncorhynchus mykiss)對(duì)弧菌病、五條鰤(Seriola quinqueradiata)對(duì)鏈球菌病和日本對(duì)蝦(Penaeus japonicus)對(duì)弧菌病與病毒性血癥的抵抗力。

1.2 革蘭氏陰性菌與菌體脂多糖

將革蘭氏陰性菌及其細(xì)胞壁中脂多糖(LPS)投與魚類后,可以增加魚類血液中白細(xì)胞的數(shù)量和提高其吞噬活性。增強(qiáng)日本鰻鱺(Anguilla japonica)對(duì)愛德華菌病的抵抗力。用滅活的殺對(duì)蝦弧菌(Vibrio penaeicida)的菌體注射、浸泡和投喂日本對(duì)蝦,可以促進(jìn)供試對(duì)蝦體內(nèi)產(chǎn)生血細(xì)胞趨化因子和提高血細(xì)胞的吞噬活性,增強(qiáng)日本對(duì)蝦對(duì)弧菌病的抵抗力。

1.3 放線菌的短肽

從放線菌橄欖灰鏈霉菌(Streptomyces olivogriseus)的培養(yǎng)液中提取的短肽類物質(zhì),定量投與魚類后可以提高供試魚的巨噬細(xì)胞的吞噬活性和殺菌能力,能增強(qiáng)虹鱒對(duì)腎臟病等傳染性疾病的抗病力。

1.4 酵母菌與菌體多糖

酵母菌的細(xì)胞壁中存在大量的β-1,3-萄聚糖、β-1,6-萄聚糖和甘露聚糖(mannan)等多糖類物質(zhì),尤其是含有較多的β-1,3-萄聚糖。將從酵母菌中提取的β-1,3-萄聚糖投與魚體,可以提高魚體內(nèi)巨噬細(xì)胞及其其它白細(xì)胞的吞噬和殺菌活性,同時(shí)還可以提高IL-2和補(bǔ)體的活性。將啤酒酵母菌細(xì)胞壁成分投與對(duì)蝦,也可以提高血細(xì)胞的吞噬活性、酚氧化酶和超氧化歧化酶的產(chǎn)生能力。通過激活免疫機(jī)能,可以使斑鮰(Ictalurus punctatus)對(duì)遲緩愛德華菌(Edwardsiella tarda)病、鮭科魚類對(duì)腎臟病和弧菌病的抗病力。安琪酵母股份有限公司生產(chǎn)的酵母免疫多糖(其中主要含有β-葡聚糖≥20%,α-甘露聚糖肽≥20%,肽類及蛋白質(zhì)≥30%,幾丁質(zhì)≥2.0%等),經(jīng)過對(duì)南美白對(duì)蝦(Penaeus vannawei)、克氏原螯蝦(Procamgbarus clarkii)、中華絨螯蟹(Eriocheri sinensis)、黃鱔(Monopterus albus)、日本鰻鱺(Anguilla japanica)、異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)和中華鱉(Pelodiscus sinensis)等養(yǎng)殖水生動(dòng)物的大量試驗(yàn)研究證明,該產(chǎn)品對(duì)多種養(yǎng)殖水生動(dòng)物的免疫系統(tǒng)有良好的刺激作用,是一種優(yōu)質(zhì)免疫刺激劑。

1.5 真菌與真菌多糖

將從蘑菇中提取的β-1,3-萄聚糖投與魚類后,可以增強(qiáng)供試魚白細(xì)胞吞噬活性,提高補(bǔ)體和溶菌酶的活性,促進(jìn)特異性抗體的生成。將這種β-1,3-萄聚糖投與對(duì)蝦后,也可以增強(qiáng)血細(xì)胞的吞噬活性和提高酚氧化酶的活性。由于免疫刺激劑激活了免疫機(jī)能,可以有效地預(yù)防鯉(Cyprinus carpio)的氣單胞菌病、五條鰤的鏈球菌病和日本對(duì)蝦的弧菌病與病毒性血癥。

1.6 海藻與海藻多糖

將從海帶中提取的β-1,3-萄聚糖添加在培養(yǎng)液中,可以刺激鮭(Salmo salar)的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生超氧化歧化酶。此外,髓藻屬的多種海藻、蘇薩海帶、帕納普海帶和裙帶菜屬的一些種類中的熱提取物,投與魚類后,利用在實(shí)驗(yàn)室條件下的攻毒試驗(yàn),證明日本鰻鱺對(duì)E. tarda,五條鰤對(duì)鏈球菌的抵抗力明顯上升。

1.7 甲殼質(zhì)與殼多糖

從甲殼類和昆蟲的外殼中提取的甲殼質(zhì)與殼多糖,投與魚類后,可以增強(qiáng)供試魚的白細(xì)胞吞噬活性和殺菌能力,提高體內(nèi)溶菌酶活性和對(duì)各種傳染病的抵抗力。

1.8 其它免疫刺激劑

如左旋咪唑等化學(xué)合成物質(zhì),本來是作為殺蟲劑使用的,現(xiàn)在已經(jīng)研究結(jié)果證明這種物質(zhì)還具有增強(qiáng)魚類白細(xì)胞的吞噬活性和殺菌活性,使溶菌酶的活性上升,提高虹鱒對(duì)弧菌病的抵抗力。從中草藥中提取的許多成分,如干草素、莨菪堿等也已經(jīng)被初步的試驗(yàn)研究結(jié)果證明,是很有開發(fā)前景的水產(chǎn)用免疫刺激劑。

2 養(yǎng)殖魚、蝦類的免疫機(jī)制

養(yǎng)殖水生動(dòng)物的免疫機(jī)制可以分為特異性和非特異性免疫。所謂非特異性免疫就是機(jī)體對(duì)非特定的病原體的防御機(jī)制。其中分布在魚類體表粘液,血液和腎臟等器官中的溶菌酶(lysozyme),就是一種在補(bǔ)體(complement)的協(xié)同作用下,可以將細(xì)菌溶解而殺死的酶。補(bǔ)體是存在于魚類粘液和血液中的一組蛋白質(zhì),其活化途徑有2條:一是能被抗原抗體復(fù)合物激活的經(jīng)典激活途徑,二是能被與抗體無關(guān)的細(xì)菌LPS和肽聚糖等激活的替代途徑。無論哪種途徑活化的補(bǔ)體都能將菌體溶解。魚類的補(bǔ)體與哺乳動(dòng)物的相比,后者通過替代途徑發(fā)揮的作用更大。在細(xì)胞性防御因子方面,由吞噬細(xì)胞將進(jìn)入機(jī)體內(nèi)的病原體吞噬后,依靠存在于巨噬細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞中的過氧化物酶等將病原體殺死、消化,同時(shí)還包括能對(duì)異體細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞具有殺傷活性的天然殺傷細(xì)胞(NK)。所謂特異性免疫機(jī)制,是針對(duì)特異性病原的由T淋巴細(xì)胞和與T細(xì)胞相關(guān)聯(lián)的能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞所發(fā)生的體液性免疫組成的。

蝦類雖然沒有產(chǎn)生抗體的機(jī)能,但是,也是依靠細(xì)胞性和體液性防御因子完成機(jī)體的免疫防御過程。細(xì)胞性防御因子主要包括血細(xì)胞和淋巴樣器官等固著性細(xì)胞。血細(xì)胞又可以分為大顆粒細(xì)胞,小顆粒細(xì)胞和無顆粒細(xì)胞等3種類型。其中大、小顆粒細(xì)胞已被確認(rèn)具有較強(qiáng)的吞噬活性。對(duì)于大型病原體及進(jìn)入機(jī)體內(nèi)的大量細(xì)菌,當(dāng)血細(xì)胞無法吞噬時(shí),即可能形成血細(xì)胞層而將其包圍,在組織細(xì)胞的協(xié)助下形成球狀物,將異物與周圍的細(xì)胞隔開。淋巴樣器官是位于中腸腺前方的小組織,是能捕捉進(jìn)入體內(nèi)的異物而保護(hù)機(jī)體的主要器官。液性防御因子主要包括酚氧化酶前體(proPO)活化系統(tǒng),植物凝血素和殺菌素等。所謂proPO活化系統(tǒng),就是蝦類血細(xì)胞中存在的proPO被細(xì)菌的LPS,霉菌的β-1,3-葡聚糖等激活,經(jīng)過絲氨酸蛋白酶而形成酚過氧化物酶,將魚蝦類體內(nèi)的酪氨酸和二羥基苯丙氨酸等酚系物質(zhì)氧化,最終生成黑色素的一系列反應(yīng)。作為這個(gè)串聯(lián)反應(yīng)中間產(chǎn)物的苯醌和最終產(chǎn)物的黑色素,可以起到包圍進(jìn)入機(jī)體的異物而將其殺滅的作用。

3 免疫刺激劑的正確使用方法

每一種免疫刺激劑的有效劑量都存在使用上限和下限,我們完成的大量試驗(yàn)結(jié)果證明,對(duì)養(yǎng)殖水生動(dòng)物采用間隔一定時(shí)間定期投與免疫刺激劑較長(zhǎng)期連續(xù)投的效果更好,而且只有在投與量和方法正確的前提下,免疫刺激劑才能正常地發(fā)揮作用。從B. thermophilum菌中提取的肽聚糖,每天按0.2mg/kg體重的劑量投與,對(duì)魚、蝦是適宜的劑量,如果每天按該劑量的10倍投與,供試魚、蝦的免疫系統(tǒng)的機(jī)能就會(huì)趨于與未使用免疫刺激劑的對(duì)照組相同。此外,用該物質(zhì)作為魚、蝦的免疫刺激劑時(shí),采用連續(xù)投喂4d停用3d或者連續(xù)投喂7d停用7d的投與方式,其效果較連續(xù)投喂好。

關(guān)于免疫刺激劑投與的時(shí)間與期間,如果能做到在養(yǎng)殖水生動(dòng)物傳染性疾病的發(fā)生季節(jié)來臨之前投喂一段時(shí)間為好。其理由是在免疫刺激劑的實(shí)際使用時(shí),投與的免疫刺激劑刺激養(yǎng)殖水生動(dòng)物免疫防疫機(jī)能上升到比較高的水平,但是其免疫機(jī)能長(zhǎng)期維持在高水平時(shí),可能會(huì)導(dǎo)致免疫機(jī)能的疲勞與麻痹,直接導(dǎo)致免疫刺激劑作用逐漸消失。如采用安琪酵母股份有限公司生產(chǎn)的酵母免疫多糖作為養(yǎng)殖水生動(dòng)物的免疫刺激劑時(shí),在各種傳染性疾病的流行高峰來臨之前,可以采用連續(xù)投與的方式,而在一般養(yǎng)殖時(shí)期則可以采用連續(xù)投與3周,間隔數(shù)周后再進(jìn)行第2個(gè)投喂周期的方式進(jìn)行。

需要特別注意的是免疫刺激劑是通過激活養(yǎng)殖水生動(dòng)物的免疫系統(tǒng)而發(fā)揮抗傳染病的功能的,如果養(yǎng)殖水生動(dòng)物的免疫系統(tǒng)已經(jīng)衰弱至不能激活的狀態(tài),免疫刺激劑也就難以發(fā)揮其作用了。所以,從改善養(yǎng)殖水生動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境、加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)和飼養(yǎng)管理入手,盡量減少抑制養(yǎng)殖水生動(dòng)物免疫系統(tǒng)的環(huán)境因素,是提高免疫刺激劑使用效果的重要途徑。(參考文獻(xiàn)略)


     來源:《當(dāng)代水產(chǎn)》雜志社

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