水產(chǎn)品中殘留孔雀石綠的毒性與檢測(cè)方法

在養(yǎng)殖過程中，我國(guó)曾以孔雀石綠作為清塘殺菌劑，同時(shí)，也常將孔雀石綠使用在存放池內(nèi)和運(yùn)輸過程中，它們?cè)隰~體內(nèi)可分別代謝為無(wú)色結(jié)晶紫與無(wú)色孔雀石綠，因?yàn)槠淠阁w化合物與代謝物質(zhì)存在較大的副作用，極易致突變、致畸、致癌,至此多數(shù)國(guó)家已經(jīng)在20世紀(jì)90年代將孔雀石綠列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥用。但是現(xiàn)階段仍有一些漁民在違規(guī)使用，主要是因?yàn)榭兹甘G價(jià)格便宜，抗菌效果較好，所以有效監(jiān)測(cè)孔雀石綠殘留物質(zhì)是至關(guān)重要的。

1孔雀石綠的分布與代謝情況

進(jìn)入機(jī)體后的孔雀石綠通常會(huì)經(jīng)過生物轉(zhuǎn)化，變成無(wú)色孔雀石綠,屬于脂溶性的衍生物，極易殘留在組織中。一些業(yè)界人士發(fā)現(xiàn)，在魚體內(nèi)殘留的孔雀石綠物質(zhì)比水體中孔雀石綠的濃度明顯要高,主要分布在內(nèi)臟器官、皮膚、肌肉、肝臟、腎臟以及血漿中，同時(shí)體內(nèi)也會(huì)蓄積孔雀石綠，特別是含有較多脂肪的組織中濃度水平更高。在清除體內(nèi)的孔雀石綠過程中，除脂肪含量影響與自身解毒能力外，還會(huì)受到環(huán)境因素的影響，如PH值和溫度等。

在體內(nèi)孔雀石綠的代謝方式有兩條:首先，在還原酶的催化作用下，孔雀石綠可降解成無(wú)色孔雀石綠;其次,經(jīng)N-脫甲基作用,在細(xì)胞色素催化下，生成次級(jí)或初級(jí)代謝產(chǎn)物芳香胺。另外，無(wú)色孔雀石綠也有兩條代謝方式:首先，,基于氧化酶作用下，無(wú)色孔雀石綠會(huì)被重新氧化成孔雀石綠;其次,無(wú)色孔雀石綠經(jīng)N-脫甲基作用，在催化作用下，酯化后與DNA形成DNA加合物。

2孔雀石綠的毒性與致毒機(jī)制

據(jù)大量研究證實(shí)，在水產(chǎn)品中，孔雀石綠對(duì)動(dòng)物的毒性較強(qiáng)，導(dǎo)致魚皮膚和鰓上皮細(xì)胞輕度炎癥,擴(kuò)大腎小管壁細(xì)胞的胞核，使腎管腔有輕度擴(kuò)張，甚至?xí)绊戶~的生長(zhǎng)與攝食,減少魚腸中酶的分泌量。組織病理學(xué)研究表明，魚的腦垂體促性腺發(fā)育細(xì)胞以及生殖腺、消化道、腎臟、肝臟、鰓等都會(huì)受到孔雀石綠的損害，嚴(yán)重的鰓上皮細(xì)胞壞死，腎臟近曲小管上皮細(xì)胞增生，肝細(xì)胞壞死，細(xì)胞核異常，損害線粒體。在處理不同濃度孔雀石綠后，在倒置顯微鏡下的細(xì)胞均可見貼壁率下降與細(xì)胞變形的情況，細(xì)胞懸浮現(xiàn)象在較高的孔雀石綠濃度下越為嚴(yán)重甚至有碎片現(xiàn)象出現(xiàn)在培養(yǎng)液中。這三種細(xì)胞存活率在孔雀石綠濃度的增加下也會(huì)隨之下降。分析血液生化參數(shù)得知,孔雀石綠能在定程度上降低魚體血清中的蛋白質(zhì)與鈣，提升膽固醇量，同時(shí)除低血漿中的鈣與磷，增加自細(xì)胞數(shù)量與血紅蛋白濃度。

3孔雀石綠的檢測(cè)方法

對(duì)水產(chǎn)品中的孔雀石綠殘留量使用液相色譜法予以測(cè)定，國(guó)家規(guī)定不可超過0.5μgkg;而對(duì)于無(wú)色孔雀石綠與孔雀石綠體用高效液相色譜法予以測(cè)定不可超過2μg/kg,較為嚴(yán)格。

3.1樣品前處理

現(xiàn)階段環(huán)境分析化學(xué)的瓶頸就是樣品采集與前處理，其不僅是測(cè)定誤差的主要來(lái)源，還制約著環(huán)境分析化學(xué)的發(fā)展。至此，現(xiàn)階段環(huán)境分析化學(xué)研究亟需解決的疑難問題就是樣品前處理技術(shù)。一般來(lái)說，會(huì)采用固相萃取或液液萃等進(jìn)行孔雀石綠樣品前處理。固相萃取樣品前處理方法，主要是基于液相色譜分享機(jī)制，將液體樣品中的目標(biāo)化合物通過固體吸附劑吸附，分離樣品中的干擾化合物與基體，再用洗脫液洗脫，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)化合物的分離與凈化。通常而言,分離模式包括吸附SPE、離子交換SPE、反相SPE以及正相SPE。SPE具有較多特點(diǎn),高效、安全便捷以及有機(jī)溶劑用量少，在預(yù)處理孔雀石綠樣品中，已經(jīng)被國(guó)內(nèi)外專家廣泛應(yīng)用。

3.2測(cè)定方法

免疫學(xué)檢測(cè)法與理化檢測(cè)法就是檢測(cè)孔雀石綠主要采用的方法。理化檢測(cè)包括氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜串聯(lián)檢測(cè)法、高效液相色譜法、氣相色譜法、分光光度法以及薄層層析法;而免疫學(xué)檢測(cè)通常采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)法。由于自動(dòng)化強(qiáng)、高靈敏度、高效以及快速等色譜法所具有的優(yōu)點(diǎn)，已成為測(cè)定孔雀石綠的主要手段。

4結(jié)語(yǔ)

綜上所述,為了給人們提供更加安全的飲食環(huán)境，檢測(cè)水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留物質(zhì)是非常有必要的。在實(shí)際檢測(cè)過程中,大批量樣品初篩適用免疫分析法;色譜法具有定量定性準(zhǔn)確以及靈敏度高等特點(diǎn)。未來(lái)在檢測(cè)水產(chǎn)品孔雀石綠過程中，檢測(cè)技術(shù)將朝著智能化、便捷式精準(zhǔn)、快速以及簡(jiǎn)便的方式前進(jìn),新型傳感器、納米技術(shù)以及量子點(diǎn)等將成為主要發(fā)展趨勢(shì)。