斑馬魚食物過敏反應

斑馬魚是重要的脊椎動物模型，廣泛用于研究領(lǐng)域，例如發(fā)育生物學，遺傳學，毒理學和腫瘤學。它是與鼠，果蠅和線蟲一起進行生物學研究的四種模式生物之一。近年來，斑馬魚在免疫學領(lǐng)域的應用逐漸受到重視。斑馬魚具有個體小，易繁殖以及生長周期短，其系統(tǒng)發(fā)育和器官組成與哺乳動物具有很大的相似性等優(yōu)點。斑馬魚僅在生命的第一周具有先天免疫功能，并且特定的體液和細胞免疫反應直到受精后4-6周才發(fā)展。變態(tài)反應性疾病研究多采用小鼠、大鼠等動物模型，斑馬魚模型仍較少見因此，斑馬魚是闡明先天免疫和適應性免疫的理想動物模型。

斑馬魚飼養(yǎng)條件

儀器為愛生斑馬魚飼養(yǎng)系統(tǒng)，進水處水質(zhì)采用紫外線24小時不間斷式消毒，水溫為28~30℃，pH為7.0~7.8，電阻率約為20Ω，光照周期為光照14 h，黑暗10 h。隨機分為３組，每缸30尾。3組斑馬魚投喂相同飼料（脫殼豐年蝦卵），每日喂食兩次，上午10-11時，下午16-17時。使用平底魚缸進行養(yǎng)殖，水溫為25-29℃；PH為7.0-7.8；使用定時開關(guān)建立光照周期為光照14h，黑暗10h；溶氧為5-8mg/Ｌ。每日更換新鮮除氯增氧水，每次更換水缸量的1/3，若有斑馬魚死亡，則需全部更換。使用溫度計、PH值、亞硝酸鹽、氨 氯、溶解氧測定試劑盒對水質(zhì)狀態(tài)進行監(jiān)測，并進行記錄。

斑馬魚食物過敏流程

為消除斑馬魚運輸過程的影響，將斑馬魚至斑馬魚養(yǎng)殖系統(tǒng)中預養(yǎng)一周，預養(yǎng)期間，使用普通飼料進行喂養(yǎng)，每日喂養(yǎng)兩次；在第7天時進行斑馬魚的喂養(yǎng)實驗，連續(xù)14天進行對照組和實驗組的喂養(yǎng)方案，對照組喂養(yǎng)普通飼料，各實驗組按照每 20 尾 0.5mg的過敏原刺激量進行喂養(yǎng)，對照組和實驗組均每日喂養(yǎng)兩次，分別是上午10時和下午16時；激發(fā)階段時間為3日，對照組喂養(yǎng)方案不變，實驗組各過敏原的量增加至3倍刺激量進行喂養(yǎng)，在第21天進行空腹取樣操作。

斑馬魚食物過敏方案

斑馬魚過敏癥狀評分標準表

得分&癥狀

• 0 無任何組織病變，腸絨毛排列整齊；

• 1 腸絨毛排列紊亂，腸道完整性被破壞，局部水腫；

• 2 腸黏膜肌層變厚，固有層松散；

• 3 腸絨毛局部輕微脫落，炎癥細胞浸潤；

• 4 腸絨毛大量脫落，腸腔局部出現(xiàn)潰瘍；

• 5 腸絨毛基本脫落至腸腔，腸腔中分散著腸絨毛碎片。

過敏反應是一種Ⅰ型變態(tài)反應，其發(fā)生分為致敏階段和激發(fā)階段，當致敏階段相同的抗原再次刺激機體時，誘發(fā)肥大細胞及嗜堿性粒細胞脫顆粒，釋放生物活性物質(zhì)會造成平滑肌收縮、腺體分泌增加、毛細血管擴張、通透性增加等一系列效應。對斑馬魚脾臟、肝臟和腸道三個器官篩選斑馬魚食物過敏模型的生物標志物從而建立斑馬魚食物過敏模型。通過觀察斑馬魚前腸、中腸和后腸的病理結(jié)構(gòu)，杯狀細胞和肥大細胞的聚集情況分析斑馬魚受蛋白刺激情況。

參考文獻

1、BOYCE J A , ASSA A A , BURKS A W , et al. Guidelines for the diagnosis and management of food allergy in the United States: Summary of the NIAID-Sponsored Expert Panel Report[J]. Nutrition, 2011, 27(2):253-267.

2、KIPS J C, ANDERSON G P, FREDBERG J J, et al. Murine models of asthma[J].European Respiratory Journal, 2003, 22(2):374.

3、ZHOU C , LUDMILA T , SUN N , et al. BALB/c mice can be used to evaluate allergenicity of different food protein extracts[J]. Food and Agricultural Immunology,2016:1-15.

4、李夢潔,劉娜,張曼.斑馬魚變態(tài)反應模型的建立與評價[J].標記免疫分析與臨床,2022,29(05):841-846.