對蝦工廠化養(yǎng)殖：白斑綜合征病毒的傳染癥狀及防控措施

南美白對蝦工廠化養(yǎng)殖中白斑綜合征病毒的傳染癥狀及防控措施

對 蝦 白 斑 綜 合 征 病 毒（WSSV）具有很強(qiáng)的侵染性和復(fù)制能力。對蝦主要通過攝食攜帶WSSV的媒介生物或浸泡含有WSSV的水體感染病毒。感染W(wǎng)SSV的對蝦，在水質(zhì)惡化、水溫升高、pH晝夜相差大、養(yǎng)殖密度過高等不良環(huán)境因子的脅迫下，體質(zhì)變?nèi)酰《敬罅糠敝尺M(jìn)而發(fā)展為對蝦白斑綜合征。隨著對蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和人們對環(huán)境保護(hù)的重視，室內(nèi)循環(huán)水工廠化對蝦養(yǎng)殖模式將成為主流對蝦養(yǎng)殖模式。本文將針對循環(huán)水工廠化對蝦養(yǎng)殖的特點(diǎn)，對對蝦WSSV的傳染機(jī)制和防控措施進(jìn)行初步的分析探討。

一、對蝦WSSV的感染、發(fā)病、診斷

（一）WSSV的感染機(jī)制

對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）是迄今危害最嚴(yán)重的甲殼類病毒，具有傳播迅速、致病力強(qiáng)、宿主范圍廣等特點(diǎn)。感染了WSSV的南美白對蝦受到不良環(huán)境因子脅迫時(shí)容易發(fā)病，在10天內(nèi)死亡率可達(dá)80%～100%，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重阻礙了南美白對蝦的可持續(xù)發(fā)展。工廠化養(yǎng)殖系統(tǒng)中對蝦WSSV的傳播途徑有種蝦—蝦苗垂直傳播、經(jīng)口攝食傳播、水源水輸入傳播、共用未消毒工具交叉感染傳播、養(yǎng)殖區(qū)域動物活動傳播這五種。

（二）WSSV的發(fā)病機(jī)制和癥狀

對蝦感染W(wǎng)SSV和發(fā)病在時(shí)間上并非完全一致，即對蝦感染了WSSV不一定馬上發(fā)病。在水質(zhì)良好、對蝦體質(zhì)健壯的情況下，對蝦不發(fā)病或者發(fā)病相對緩慢。但當(dāng)水質(zhì)環(huán)境惡化（如高氨氮、高亞硝酸鹽、低溶解氧等），水質(zhì)因子突變時(shí)（如溫度突變、pH突變、倒藻等），均可誘發(fā)對蝦體內(nèi)病毒粒子大量復(fù)制，進(jìn)而導(dǎo)致對蝦發(fā)病。對蝦體質(zhì)強(qiáng)弱也是決定對蝦是否發(fā)病的關(guān)鍵因素之一。當(dāng)對蝦受種蝦種質(zhì)退化、環(huán)境因子脅迫、搬運(yùn)損傷等不利因素影響時(shí)體質(zhì)變差，感染W(wǎng)SSV后很容易發(fā)展成對蝦白斑病毒綜合征。

對蝦感染W(wǎng)SSV的初期表現(xiàn)為攝食活躍，攝食量增加。少數(shù)對蝦表現(xiàn)為趴邊、水面獨(dú)游、行動遲緩的活動癥狀。感染后期對蝦發(fā)展成白斑病毒綜合征，表現(xiàn)為蝦體變軟、紅體、空腸空胃、肝胰腺腫大發(fā)紅，頭胸甲易與真皮層分離剝落，且有大量肉眼清晰可見的白斑。感染后期的對蝦大量死亡，嚴(yán)重時(shí)排塘。

（三）對蝦病毒性白斑、細(xì)菌性白斑和非病原性白斑

對蝦養(yǎng)殖過程中，可能受到病毒、細(xì)菌或者某些化學(xué)藥品的影響，頭胸甲均可出現(xiàn)肉眼可見或僅顯微鏡下可見的白斑。根據(jù)白斑形成的機(jī)制不同，可將對蝦頭胸甲白斑分為病毒性白斑、細(xì)菌性白斑、非病原性白斑。

1.對蝦病毒性白斑

對蝦病毒性白斑是由對蝦WWSV引起，感染后期的對蝦頭胸甲肉眼可見大量不規(guī)則的白斑，頭胸甲表現(xiàn)為易與真皮層分離剝落。顯微鏡100倍鏡鏡檢下可發(fā)現(xiàn)頭胸甲有大量邊緣不規(guī)則的白斑狀結(jié)構(gòu)物，外觀呈花骨朵、多層魚鱗重疊狀，如圖1、2所示。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，白斑沉積物實(shí)際上是對蝦鈣鹽代謝異常導(dǎo)致碳酸鈣在頭胸甲沉積，但導(dǎo)致鈣鹽代謝異常的機(jī)制尚不清楚。病蝦組織做白斑病毒PCR檢測結(jié)果為陽性。病毒性白斑發(fā)病迅猛，對蝦在一個(gè)星期內(nèi)爆發(fā)性死亡很可能是由對蝦WWSV引起的。

圖1 對蝦病毒性白斑鏡檢-花骨朵狀

圖2 對蝦病毒性白斑鏡檢-多層魚鱗重疊狀

2.對蝦細(xì)菌性白斑

對蝦病毒性白斑往往還伴生對蝦細(xì)菌性白斑。對蝦細(xì)菌性白斑多數(shù)是由弧菌引起，感染的對蝦頭胸甲無肉眼可見白斑，外觀完好且不易與真皮層分離。顯微鏡100倍鏡鏡檢下可發(fā)現(xiàn)頭胸甲有許多呈中心輻射狀的白斑，邊緣相對規(guī)則，中心有黑點(diǎn)，如圖3、4所示。病蝦組織做白斑病毒PCR檢測結(jié)果為陰性，細(xì)菌培養(yǎng)可檢測到大量弧菌。細(xì)菌性白斑致死率沒有病毒性白斑高，通過換水、消毒、增強(qiáng)對蝦營養(yǎng)可緩解癥狀。

圖3 對蝦細(xì)菌性白斑-中心輻射狀

圖4 對蝦細(xì)菌性白斑—中心輻射狀

3.對蝦非病原性白斑

對蝦非病原性白斑通常是指的過多的鈣離子在對蝦頭胸甲沉積形成的白斑。這類對蝦通常會表現(xiàn)為白腸白便，極端情況下蝦身和蝦肢也會覆蓋白色的碳酸鈣沉淀。非病原性白斑在100倍鏡下外觀多呈不規(guī)則狀，邊緣部分有多支狀碳酸鈣結(jié)晶，如圖5（該圖來源于中國水產(chǎn)頻道）所示。病蝦組織做白斑病毒PCR檢測結(jié)果為陰性。與病毒性白斑不同，病毒性白斑是由對蝦鈣鹽代謝異常導(dǎo)致碳酸鈣在頭胸甲沉積形成，而非病原性白斑是由水體中過高的鈣離子沉積在對蝦頭胸甲造成的。非病原性白斑可通過蓄水池充分曝氣、潑灑EDTA鈉鹽等來緩解病癥。

圖5 對蝦非病原性白斑-邊緣多支結(jié)晶狀

（四）檢測方法

WSSV的主要宿主為蝦蟹類、鹵蟲、橈足類。藤壺不是WSSV的自然宿主，但WSSV可以在藤壺體內(nèi)復(fù)制。在海水、養(yǎng)殖水體中也存在游離的WSSV病毒粒子。對于不同的宿主和載體，WSSV的檢測方法也不同。在生產(chǎn)實(shí)踐中，成蝦和蝦苗通常使用對蝦白斑病毒PCR試劑盒進(jìn)行檢測，鹵蟲一類的生物餌料推薦使用靈敏度更高的巢氏PCR法檢測提高陽性檢測率。對于養(yǎng)殖水體和水源水的檢測需要通過聚乙二醇濃縮發(fā)、超濾離心管法進(jìn)行濃縮，提高單位體積病毒顆粒的密度，便于檢測。

二、工廠化養(yǎng)殖WSSV的防控措施

（一）選擇優(yōu)質(zhì)無特定病原攜帶的對蝦蝦苗是關(guān)鍵

研究中發(fā)現(xiàn)，南美白對蝦蝦苗WSSV陽性檢出率雖然低于池塘放養(yǎng)蝦，但這些攜帶WSSV的蝦苗流向養(yǎng)殖場后有一部分會發(fā)展為白斑綜合征的病蝦。當(dāng)病蝦死亡后，健康對蝦通過攝食病蝦而感染W(wǎng)SSV，進(jìn)而發(fā)生串聯(lián)式感染，在封閉、高水溫的工廠化養(yǎng)殖環(huán)境下，這種病毒傳播速度非常迅速。生產(chǎn)不規(guī)范的種苗場所培育的蝦苗受親蝦垂直傳播和培育環(huán)境的影響往往帶有WSSV。即使是使用了SPF種蝦的苗場，若操作不規(guī)范將導(dǎo)致培育環(huán)境帶有WSSV，進(jìn)而生產(chǎn)出感染W(wǎng)SSV的蝦苗。通常情況下攜帶病毒的蝦苗在工廠化養(yǎng)殖前期不表現(xiàn)出病癥，但后期隨著投喂量的增加，水質(zhì)控制難度增加，當(dāng)控制不當(dāng)時(shí)就會突然發(fā)病，大量死亡，嚴(yán)重時(shí)排塘。因此工廠化養(yǎng)殖應(yīng)選擇優(yōu)質(zhì)的SPF蝦苗，并進(jìn)行抽樣檢測以確保蝦苗不攜帶病原，從源頭上杜絕WSSV的傳播。

（二）做好水源水的消毒和養(yǎng)殖尾水、養(yǎng)殖廢棄物的處理

在對蝦養(yǎng)殖集中的養(yǎng)殖區(qū)，多數(shù)養(yǎng)殖戶沒有經(jīng)過消毒處理就將含有大量病原、死亡養(yǎng)殖動物的養(yǎng)殖廢水排放到自然水域中。由于自然水域的自凈能力有限，水體中常常帶有各種病原體，包括WSSV?？墒褂闷追?、強(qiáng)氯精、二氧化氯等含氯制劑，高錳酸鉀等消毒劑對養(yǎng)殖水體進(jìn)行處理，殺滅水體中游離病毒以及橈足類、枝角類等有可能攜帶WSSV的浮游生物，使WSSV的囊膜蛋白失活從而切斷水源傳播途徑。此外，通過實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，水源水經(jīng)過30m以上深度的沙井過濾可大大減少水體中弧菌和病毒等病原體以及有害浮游生物的數(shù)量，因此沙井過濾水可作為良好的養(yǎng)殖水源水。

現(xiàn)有的工廠化養(yǎng)殖技術(shù)尚達(dá)不到零排放，養(yǎng)殖廢水可通過沉淀、消毒、檢測合格后再進(jìn)行排放。病蝦、死蝦應(yīng)做無公害處理，加生石灰深埋處理，避免病死蝦排放到自然水域污染水源水。

（三）做好生物餌料的病原檢測和消毒

當(dāng)前的工廠化養(yǎng)殖主要為兩段法養(yǎng)殖，即中間培育和成蝦養(yǎng)殖。通常中間培育時(shí)會使用生物餌料，如豐年蟲、輪蟲、橈足類等。研究中發(fā)現(xiàn)橈足類有可能攜帶WSSV，而在生產(chǎn)實(shí)踐中也檢測到商品鹵蟲、橈足類休眠卵攜帶WSSV。因此應(yīng)加強(qiáng)生物餌料WSSV的檢測工作。

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，50ppm的高錳酸鉀處理5min即可破壞病毒幾乎所有的結(jié)構(gòu)蛋白和DNA結(jié)構(gòu)，從而使病毒顆粒失去感染活性。規(guī)范化的生物餌料培育，對卵的處理、孵化、擴(kuò)大培養(yǎng)、餌料的收集都應(yīng)做好消毒處理。此外還應(yīng)加強(qiáng)對購買的商品生物餌料的消毒處理。消毒后的生物餌料還需要進(jìn)行WSSV檢測，確保合格再投入使用。

（四）良好的水質(zhì)管理

王年斌等認(rèn)為氨氮、硝酸氮、亞硝酸氮、化學(xué)耗氧量、鹽度和水溫等因子是決定對蝦疾病爆發(fā)的關(guān)鍵因子。因此良好的水質(zhì)對減少疾病的發(fā)生率有著重要的影響。夏季工廠化養(yǎng)殖車間溫度很高，藻類繁殖旺盛，微生物分解殘餌、糞便的速度加快，容易形成pH波動大，氨氮、亞硝酸急劇升高的不良環(huán)境?？赏ㄟ^改良通風(fēng)條件、降低養(yǎng)殖水體透明度、使用優(yōu)質(zhì)藻種肥水、合理投喂餌料、增加光合細(xì)菌、乳酸菌、硝化細(xì)菌一類的益生菌的使用量、加強(qiáng)底部增氧、優(yōu)化生物處理池等措施改善水質(zhì)，必要時(shí)可適量換水。

工廠化養(yǎng)殖車間的生物處理池是水質(zhì)管理的重要環(huán)節(jié)。生物處理池中含有大量有益微生物，可以通過分解養(yǎng)殖用水中的有機(jī)廢物、轉(zhuǎn)化氨氮和亞硝酸等途徑改良水質(zhì)。但生物處理池的承載力是有限的，當(dāng)生物處理池處理過載時(shí)，可通過添加生物濾料來增大微生物附著總面積、提高養(yǎng)殖廢水的碳氮比（20:1）、延長處理時(shí)間等方法提高處理池的處理能力，從而改善水質(zhì)。

（五）控制合理的養(yǎng)殖密度，加強(qiáng)免疫

南美白對蝦在室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖密度較傳統(tǒng)要高，生產(chǎn)實(shí)踐中一般在375尾/m 2 ～600尾/m 2 （<8cm的標(biāo)粗蝦苗）。在供水充足的情況下，可適當(dāng)提高放養(yǎng)密度。但在南方高溫季節(jié)可適當(dāng)降低放養(yǎng)密度，生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，控制放養(yǎng)密度在300尾/m 2 ～375尾/m 2 可有效避免病害的大規(guī)模爆發(fā)。

提高對蝦免疫力有助于對蝦抵抗病害感染。在對蝦病害流行季節(jié)，可通過在飼料中添加營養(yǎng)增強(qiáng)劑、中草藥、解毒護(hù)肝劑、加強(qiáng)消化吸收劑來提高對蝦的免疫力。研究表明，在飼料中添加中草藥或者復(fù)方中草藥可顯著提高受到WSSV脅迫的南美白對蝦免疫性能和抗WSSV能力。在飼料中添加肽聚糖、葡聚糖等多糖類制劑亦可提高南美白對蝦的抗菌和抗病毒能力，有效的幫助對蝦抵抗WWSV的感染。

（六）建立并嚴(yán)格執(zhí)行工廠化對蝦養(yǎng)殖的生物安保技術(shù)體系

養(yǎng)殖的生物安保技術(shù)體系對蝦工廠化健康養(yǎng)殖離不開良好的種苗、水質(zhì)、餌料和優(yōu)秀的管理。黃倢認(rèn)為，良好管理的核心在于建立工廠化養(yǎng)殖生物安保體系，保證養(yǎng)殖系統(tǒng)中沒有病原。所謂生物安保，即以動物病原風(fēng)險(xiǎn)分析為指導(dǎo)，通過在養(yǎng)殖設(shè)施、技術(shù)、管理上多方位實(shí)施病害防控措施，達(dá)到降低養(yǎng)殖系統(tǒng)中病原侵入、存留、傳播的風(fēng)險(xiǎn)的目的，提高養(yǎng)殖系統(tǒng)中動物安全的整體水平。工廠化對蝦養(yǎng)殖的生物安保技術(shù)體系包括對蝦病原監(jiān)測計(jì)劃的制定、對蝦病原風(fēng)險(xiǎn)的評估、病原風(fēng)險(xiǎn)的管理和建立可追溯的系統(tǒng)。

1.對蝦病原監(jiān)測計(jì)劃的制定

在對蝦病害流行的季節(jié)，應(yīng)制定對蝦病原監(jiān)測計(jì)劃，充分發(fā)揮檢驗(yàn)檢疫在對蝦工廠化養(yǎng)殖中的安保作用。通過對技術(shù)人員的培訓(xùn)，讓他們對病原的感染機(jī)制、傳播途徑、發(fā)病機(jī)制、發(fā)病癥狀有清晰而全面的了解。監(jiān)測對象包括進(jìn)排水、進(jìn)水渠道、鮮活餌料及冰鮮餌料、餌料休眠卵、幼蝦、成蝦、糞便、車間入侵動物。采樣方法應(yīng)遵循隨機(jī)采樣、不限個(gè)體、多次采樣的原則，采樣頻率可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整，建議一周一次。樣品可送第三方檢測也可以采用巢氏PCR法自行檢測。

2.對蝦病原風(fēng)險(xiǎn)的評估

對可能攜帶對蝦病原的餌料、水體、受精卵、無節(jié)幼體、糞便、對蝦親體、幼蝦、成蝦以及可能將對蝦病原引入到養(yǎng)殖體系的生產(chǎn)操作如交叉使用生產(chǎn)工具、投餌、換水、捕撈等行為、車間內(nèi)入侵動物如老鼠、藤壺進(jìn)行全方位的風(fēng)險(xiǎn)等級評級，越是風(fēng)險(xiǎn)等級高的越應(yīng)重視，對各部門的技術(shù)人員進(jìn)行培訓(xùn)，加強(qiáng)對對蝦病原風(fēng)險(xiǎn)的認(rèn)識，并確定病原的檢測技術(shù)。

3.對蝦病原風(fēng)險(xiǎn)的管理

建立全方位的消毒計(jì)劃，包括養(yǎng)殖場地與生產(chǎn)工具的消毒、水源水與進(jìn)水渠道的消毒、養(yǎng)殖尾水的消毒和養(yǎng)殖廢棄物的無公害處理、活餌料及冰鮮餌料的消毒，對于不同的消毒對象制定不同的消毒方案，并接受第三方檢疫機(jī)構(gòu)的檢查、評估，以確保消毒有效、徹底，做到養(yǎng)殖區(qū)域無疫。

4.建立可追溯的系統(tǒng)

制定工廠化對蝦健康養(yǎng)殖的標(biāo)準(zhǔn)操作流程，包括標(biāo)粗車間和養(yǎng)成車間的標(biāo)準(zhǔn)操作流程。標(biāo)準(zhǔn)操作流程應(yīng)全方位覆蓋，包括生產(chǎn)場地消毒、進(jìn)排水、衛(wèi)生管理、餌料投喂、搬蝦收蝦、日常巡邏、水質(zhì)檢測、樣品送檢，并完善生產(chǎn)管理記錄，構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)化的養(yǎng)殖場的全人員全過程的生產(chǎn)管理記錄和可追溯系統(tǒng)，以加強(qiáng)對蝦生物安保計(jì)劃的實(shí)施。

(來源：中國水產(chǎn)，2019年9期)
(作者：謝妙，冉春麗，劉永奎)

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