中國小龍蝦白斑綜合征的研究進(jìn)展及防控對策

中國小龍蝦白斑綜合征的研究進(jìn)展及防控對策

溫周瑞  湖北省水產(chǎn)科學(xué)研究所，武漢  430071

摘要：綜述了小龍蝦白斑綜合征在中國的流行情況、研究進(jìn)展，包括在小龍蝦白斑綜合征流行病學(xué)、病理學(xué)、檢測技術(shù)及免疫預(yù)防等方面的研究工作，提出了綜合防控對策。

關(guān)鍵詞：小龍蝦；白斑綜合征；進(jìn)展；對策

近年來，中國小龍蝦（即克氏原螯蝦）的人工養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展很快，2014年全國養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)到66萬t，湖北省養(yǎng)殖產(chǎn)量39.3萬t，約占全國小龍蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量的60％。2015年湖北省稻田養(yǎng)蝦面積18.65萬hm2，池塘養(yǎng)殖面積6.79萬hm2，各類水體養(yǎng)殖小龍蝦總面積超過26.67萬hm2，小龍蝦產(chǎn)量43.3萬t，同比增加10.2％；湖北省小龍蝦養(yǎng)殖、加工、流通、餐飲綜合產(chǎn)值603.1億元，同比增幅達(dá)23.79％。

隨著小龍蝦養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，養(yǎng)殖規(guī)模迅猛擴大，苗種與產(chǎn)品流通空間拓展，養(yǎng)殖過程中小龍蝦疾病的危害日益嚴(yán)重，特別是白斑綜合征時有發(fā)生，造成較大的經(jīng)濟損失，嚴(yán)重威脅著小龍蝦養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展。本文旨在對當(dāng)前中國小龍蝦白斑綜合征的發(fā)生流行情況及其研究進(jìn)展進(jìn)行全面分析，并對防治措施進(jìn)行探討。

1  白斑綜合征概述

白斑綜合征（WSD）俗稱白斑病，是由白斑綜合征病毒（WSSV）引起的嚴(yán)重傳染性疾病，20世紀(jì)90年代以來一直嚴(yán)重威脅著全世界對蝦的養(yǎng)殖安全。白斑綜合征病毒屬線頭病毒科白斑病毒屬。白斑綜合征的特點是發(fā)病急、死亡率高，死亡速度快。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）、亞太地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展網(wǎng)絡(luò)中心（NACA）將其列為強制通報的疫病。2008年被農(nóng)業(yè)部定為一類疫病。

2  小龍蝦白斑綜合征在中國的流行情況

小龍蝦在中國的人工養(yǎng)殖歷史不長，養(yǎng)殖初期由于集約化程度不高等原因幾乎未見發(fā)病，最近幾年小龍蝦的疾病逐漸增多，小龍蝦白斑綜合征在部分省份開始流行。最早于2006年5月在浙江省舟山市發(fā)生，2007年5月江蘇省首次在省內(nèi)發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖小龍蝦發(fā)生白斑綜合征，2008年江蘇省白斑綜合征發(fā)病面積近6667hm2，占整個養(yǎng)殖面積的20％。2008年5月中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所、中國科學(xué)院武漢病毒研究所在湖北檢測到白斑綜合征病毒。2009年5月安徽省某養(yǎng)殖場發(fā)現(xiàn)。現(xiàn)在已成為威脅小龍蝦產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的一種主要病害。

3  小龍蝦白斑綜合征的研究進(jìn)展

中國學(xué)者開展小龍蝦白斑綜合征的研究始于20世紀(jì)90年代，魏靜等用小龍蝦作為動物模型培養(yǎng)增殖白斑綜合征病毒（WSSV）。隨后關(guān)于WSSV在小龍蝦中的研究主要集中在利用WSSV在小龍蝦體內(nèi)增殖和感染的特性，研究將其用于對蝦病毒增殖、藥物篩選和免疫反應(yīng)等方面的實驗動物模型等。最近關(guān)于小龍蝦白斑綜合征的研究較多，主要集中在以下幾個方面。

3.1  流行病學(xué)的研究

3.1.1  病原的確定  王忠發(fā)等對浙江省舟山市一口小龍蝦養(yǎng)殖池的發(fā)病小龍蝦進(jìn)行實驗室病原學(xué)檢測與病原回歸健康小龍蝦，證實引起蝦病暴發(fā)的病原體為對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）。丁正峰等對揚州邵伯湖、淮安白馬湖、南京祿口、盱眙等地的發(fā)病小龍蝦采集了100余只樣品，從患病小龍蝦體內(nèi)檢測出大量WSSV，并證明該病毒即為引起小龍蝦病害的病原。2008年長江水產(chǎn)研究所魚病研究室首次在湖北荊州養(yǎng)殖小龍蝦中檢出對蝦白斑綜合征病毒。張叔勇等在湖北省境內(nèi)的養(yǎng)殖小龍蝦的樣品中也分離到WSSV。陳昌福等證明患病小龍蝦組織中存在致病性病毒和細(xì)菌。潘子豪等證實安徽某地養(yǎng)殖的小龍蝦近年暴發(fā)的疫病病原為WSSV。洪徐鵬對取自南京市農(nóng)貿(mào)市場，產(chǎn)地分別為南京市六合區(qū)的養(yǎng)殖池塘、江蘇高淳縣的石臼湖和固城湖、江蘇丹陽市的長江水域以及江西鄱陽湖的小龍蝦樣本（平均體重20g），經(jīng)過PCR檢測后發(fā)現(xiàn)，江西鄱陽湖、江蘇高淳縣的石臼湖和固城湖的小龍蝦不攜帶WSSV，其余各采樣組均不同程度攜帶WSSV。

3.1.2  發(fā)病癥狀  小龍蝦白斑綜合征的癥狀主要有以下幾點：①病蝦活力低下，附肢無力，無法支撐身體，應(yīng)激能力較弱，大多分布于池塘邊；②病蝦體色較健康蝦灰暗，無光澤，部分蝦頭胸甲處有黃白色斑點；③蝦體解剖后可見頭胸甲內(nèi)側(cè)有一層薄膜，疑是蛻殼困難；胃腸道空而無食或充滿水，部分病蝦有黑腮癥狀；④部分蝦尾部肌肉發(fā)紅或者呈現(xiàn)白濁樣；⑤死亡過程是先死大規(guī)格蝦，再死中規(guī)格蝦，最后小規(guī)格蝦也陸續(xù)死亡；⑥解剖后可見患病蝦肝胰臟腫大，其顏色較正常蝦深，部分患病蝦的肝胰臟有壞死現(xiàn)象，腸道的顏色有明顯分節(jié)的現(xiàn)象；⑦血淋巴不易凝固，頭胸甲易剝離。死亡率為30％～50％。

3.1.3  流行季節(jié)  小龍蝦白斑綜合征發(fā)病季節(jié)一般在3月底至7月。江蘇省2008年監(jiān)測到的最早發(fā)病塘口為4月16日，較2007年提前近一個月。朱建中等研究表明，接種WSSV的螯蝦，22～25℃時，一般于2～7d內(nèi)死亡；30～32℃時，平均死亡時間2～6d；15～19℃時，平均2～10d內(nèi)死亡；8～10℃時，平均死亡時間3～13d。試驗結(jié)果顯示，較高的溫度季節(jié)感染強度較大。

3.1.4  感染途徑  潘子豪等認(rèn)為冷凍餌料魚是導(dǎo)致小龍蝦感染WSSV并暴發(fā)流行的原因之一。因為小龍蝦養(yǎng)殖有的使用冷凍海水飼料魚，混雜海蝦等甲殼類，促進(jìn)了WSSV向內(nèi)陸地區(qū)的“遷移”。養(yǎng)殖水體的排放或者實驗室垃圾處理不善導(dǎo)致帶有WSSV的病蝦或寄主進(jìn)入長江，從而被長江中的小龍蝦攝食導(dǎo)致感染WSSV。內(nèi)地從沿海地區(qū)引進(jìn)小龍蝦、南美白對蝦等苗種也增加了引進(jìn)白斑綜合征病毒的風(fēng)險。

試驗表明，注射和口服均能使小龍蝦感染發(fā)病，而浸泡方式不能使小龍蝦發(fā)病。在水體中，WSSV可能不以離體傳播為主要方式，病毒以存在于組織內(nèi)的形式，通過食物鏈來完成從一個宿主到另一個宿主的傳播。因此，在養(yǎng)殖過程中應(yīng)認(rèn)真處理好發(fā)病死亡的蝦，如在遠(yuǎn)離養(yǎng)殖塘處掩埋等，以杜絕病毒的進(jìn)一步擴散。

3.2  有關(guān)病理學(xué)研究

人工感染試驗表明，被感染的小龍蝦胃、鰓等的上皮組織以及結(jié)締組織的細(xì)胞核明顯腫大和嗜伊紅染色；電鏡觀察發(fā)現(xiàn)胃部、鰓部組織的細(xì)胞核內(nèi)有大量的桿狀病毒樣病毒粒子。在受感染瀕死螯蝦的胃、中腸和循環(huán)血淋巴中觀察到大量病毒粒子；在肝胰腺組織的細(xì)胞中觀察到少量病毒粒子。感染WSSV后螯蝦血細(xì)胞密度呈現(xiàn)先升后降的趨勢，至感染后第6天血細(xì)胞密度僅為對照組的21.3％；被感染血細(xì)胞內(nèi)的病毒量始終呈上升趨勢，達(dá)到最高感染率時螯蝦處于瀕死狀態(tài)。黃樺等的試驗結(jié)果顯示，受感染的小龍蝦體內(nèi)病毒含量與其死亡呈正相關(guān)；健康的小龍蝦和感染病毒的小龍蝦體內(nèi)的ATPase活性分別為7.337U／mgprot和4.212U／mgprot，有極顯著的差異。小蝦對WSSV敏感性比較高，感染后易死亡；中等蝦對WSSV敏感性比小蝦低，感染后不易死亡；大蝦對WSSV敏感性最低，感染后最不易死亡。

3.3  WSSV檢測技術(shù)

在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，快速準(zhǔn)確地檢測出白斑綜合征病毒，對正確診斷、科學(xué)防治至關(guān)重要。不少學(xué)者開展了WSSV檢測技術(shù)研究。徐進(jìn)等對傳統(tǒng)對蝦白斑綜合征病毒的PCR檢測方法中的病毒模板DNA的提取方法加以改進(jìn)，建立了一種快速檢測小龍蝦WSSV的PCR方法。王軼南等應(yīng)用抗WSSV的混合單克隆抗體標(biāo)記螯蝦血細(xì)胞內(nèi)的病毒，進(jìn)而通過流式細(xì)胞術(shù)對血細(xì)胞的病毒感染強度進(jìn)行了初步定量分析，其結(jié)果對闡明WSSV在螯蝦血細(xì)胞內(nèi)的增殖規(guī)律及進(jìn)一步研究WSSV的感染機制奠定了基礎(chǔ)。李文杰等建立的巢式PCR方法適宜于WSSV的檢測，特別是對小龍蝦感染早期和中期的檢測，同時該方法可以應(yīng)用于小龍蝦親本、苗種的檢測篩選，以及在小龍蝦養(yǎng)殖過程中的WSSV動態(tài)監(jiān)測。環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）法可以快速、靈敏、特異性地檢測小龍蝦WSSV，其靈敏度與巢式PCR相比，高出約500倍，且不需要專用的PCR儀，是檢測WSSV的一種理想方法。張玲等利用建立的WSSV實時熒光定量PCR技術(shù)檢測感染了WSSV后小龍蝦組織內(nèi)病毒數(shù)量的時序動態(tài)變化。

3.4  免疫預(yù)防研究

有些學(xué)者進(jìn)行了有關(guān)小龍蝦白斑綜合征免疫研究。袁軍法等利用原核表達(dá)的對蝦白斑綜合征病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP28口服免疫小龍蝦，結(jié)果表明VP28能有效激起機體的免疫反應(yīng)。用家蠶－桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在蠶蛹體內(nèi)表達(dá)的重組病毒囊膜蛋白rVp28制成的疫苗口服免疫小龍蝦，觀察了其對白斑綜合征病毒人工感染的保護作用。結(jié)果表明，重組囊膜蛋白rVp28免疫后，對口服感染具有顯著的保護作用，對注射感染有一定的保護作用。Jha等認(rèn)為用在酵母細(xì)胞中表達(dá)的病毒囊膜蛋白VP19與VP28重組蛋白制成的疫苗對小龍蝦免疫預(yù)防白斑綜合征是可行的。也有人嘗試?yán)弥胁菟幪岣咝↓埼r的免疫力。郝忱等在基礎(chǔ)日糧中添加中草藥復(fù)合添加劑（0.3％大黃＋0.3％淫羊藿＋0.2％黃芪＋0.2％板藍(lán)根）可以促進(jìn)小龍蝦的生長，提高機體的非特異性免疫力以及抵抗白斑病綜合征病毒的能力。洪徐鵬等發(fā)現(xiàn)，添加0.8％的黃芪多糖可提高小龍蝦26.67％的存活率，對提高小龍蝦抗WSSV感染有很好的效果。

4  防控對策

隨著小龍蝦養(yǎng)殖規(guī)模進(jìn)一步擴大，未來幾年小龍蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量將繼續(xù)上升。因此小龍蝦白斑綜合征的防控工作十分重要。2014年農(nóng)業(yè)部辦公廳就小龍蝦白斑綜合征防控下發(fā)文件，2015年開始把湖北省等內(nèi)陸省份小龍蝦白斑綜合征納入國家水生動物疫病監(jiān)測計劃。為全面做好小龍蝦白斑綜合征防控工作，提出以下對策。

4.1  深化小龍蝦白斑綜合征的研究

在短短的10幾年間，小龍蝦從一個基本未開發(fā)利用的野生種，迅速發(fā)展成年產(chǎn)量數(shù)十萬噸的養(yǎng)殖對象。因環(huán)境脅迫變大，流通頻繁，受病原威脅加大，種質(zhì)退化等因素，導(dǎo)致小龍蝦養(yǎng)殖過程中發(fā)生白斑綜合征。迄今對小龍蝦白斑綜合征的研究十分薄弱，亟需開展小龍蝦白斑綜合征病原學(xué)、流行病學(xué)、快速檢測診斷和防治技術(shù)研究。

4.2  加強疫病監(jiān)測報告

加強小龍蝦白斑綜合征監(jiān)測，及時全面掌握發(fā)病情況，一旦發(fā)現(xiàn)疫情，按照《動物防疫法》規(guī)定的疫病報告制度報告。利用省級水生動物疫病監(jiān)控中心和縣級水生動物疫病防治站，建設(shè)全省的小龍蝦病害預(yù)警體系和防控網(wǎng)絡(luò)。

4.3  實施苗種產(chǎn)地檢疫制度

苗種帶毒是WSSV蔓延的重要原因。嚴(yán)控疫區(qū)苗種流出，嚴(yán)格實施苗種產(chǎn)地檢疫，建立引種的檢疫隔離區(qū)，試點建立無白斑綜合癥苗種場。對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。根據(jù)水域和流域的自然隔離情況劃區(qū)，并實施劃區(qū)管理。

4.4  積極開展技術(shù)服務(wù)

水產(chǎn)科研和技術(shù)推廣機構(gòu)加強對養(yǎng)殖生產(chǎn)者的指導(dǎo)和技術(shù)培訓(xùn)，指導(dǎo)他們嚴(yán)格按照相關(guān)養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范組織開展生產(chǎn)。

4.5  強化養(yǎng)殖生產(chǎn)管理

推廣健康養(yǎng)殖技術(shù)，加強水源管理，防止水源帶毒；選擇健康無病毒苗種，把好苗種質(zhì)量關(guān)；控制合理養(yǎng)殖密度，調(diào)控好水質(zhì)，保持良好的養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境；使用優(yōu)質(zhì)飼料，減少養(yǎng)殖自身污染；捕撈成蝦時，要盡量小心操作減少人為干擾，避免留塘蝦產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。

4.6  嚴(yán)格控制疫病擴散

發(fā)現(xiàn)并確定疫情后，要采取緊急的強制控制、撲滅等措施，并及時發(fā)出通報，嚴(yán)控疫區(qū)小龍蝦流出。及時撈出病死蝦，避免因小龍蝦自相殘食引起病原迅速擴散；對病死蝦要采取焚毀、掩埋、高溫等方法進(jìn)行無害化處理；對發(fā)病池塘水體、接觸疫病水體的工具、器皿等其他物品必須消毒殺菌處理，發(fā)病池塘水體未經(jīng)處理嚴(yán)禁排放，切斷病原傳播途徑。