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斑點叉尾鮰傳染性套腸癥防治

發(fā)表時間:2022/06/15 19:54:37  來源:科學養(yǎng)魚  瀏覽次數(shù):4840  
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斑點叉尾鮰傳染性套腸癥是近年來在我國發(fā)生的一種斑點叉尾鮰的新型細菌性傳染病,危害很大,已經連續(xù)幾年造成了大批的斑點叉尾鮰發(fā)病死亡,嚴重地威脅著斑點叉尾鲴養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前初步認為該病是由嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌引起的斑點叉尾鮰的急性致死性傳染病,以發(fā)生嚴重的腸炎、腸套疊和脫肛為特征,在短時間內即可引起大批的斑點叉尾鮰死亡,我們稱此病為斑點叉尾鮰傳染性套腸癥。由于該病具發(fā)病突然,來勢兇猛,傳染快,呈流行性,死亡快,發(fā)病率和死亡率均高等特點,故初期又稱其為斑點叉尾鮰急性流行性傳染病。該病的致病病原和病理變化特征都是在水生動物疾病中罕見的,在此之前,國內外都還未見該菌感染斑點叉尾鮰致病的報道。

一、流行情況

該病最早發(fā)現(xiàn)于2004年3月下旬,首先在四川省成都市郊的龍泉湖網箱養(yǎng)殖的斑點叉尾鮰發(fā)生了一種前所未見的新型暴發(fā)性傳染病,該病來勢兇猛,具有發(fā)病突然、傳染快、死亡率高等特點,在出現(xiàn)癥狀后的1~2天即發(fā)生大規(guī)模死亡,死亡率一般在90%以上,有的網箱幾乎達100%。我們通過仔細的病理剖解和觀察,發(fā)現(xiàn)了一種在魚類非常罕見的特征性病理變化即腸套疊,而且這種腸套疊的出現(xiàn)率很高,可達60%~95%,病魚一旦出現(xiàn)腸套疊后即不吃食,并很快就發(fā)生死亡。相隔一周左右,本病又相繼在四川的三臺縣魯班湖、中江縣繼光水庫、仁壽縣黑龍灘水庫和簡陽縣三岔湖等地網箱和大邑、崇州、新津、眉山等縣市的池塘養(yǎng)殖的斑點叉尾鮰中發(fā)生大規(guī)模暴發(fā)與流行。2005年和2006年3月,該病又連續(xù)發(fā)生并繼續(xù)蔓延擴散,不但在四川許多養(yǎng)殖斑點叉尾鮰的地區(qū)紛紛發(fā)生該病,并在重慶、貴州、云南和湖;比等省也出現(xiàn)該病流行,有些地區(qū)甚至對斑點叉尾鮰的養(yǎng)殖產生毀滅性的打擊,魚整池、整箱死亡。估計這幾年的直接經濟損失達億元。

自然情況下主要感染斑點叉尾鮰,魚苗、魚種和成魚均可感染,其他鮰科魚類也可感染,但在相同養(yǎng)殖條件下的有鱗魚未見感染發(fā)病季節(jié)主要在春夏,3~9月是其發(fā)病的時期,但以3~5月高發(fā),一般是每年的3月下旬或4月初開始發(fā)病,發(fā)病水溫多在16℃以上,并隨水溫的升高病程縮短。發(fā)病急,死亡快,病程短,一般病程在2~5天,發(fā)病率在90%以上,死亡率90%以上,嚴重的達100%。

二、病原

該病的病原初步認為是斑點叉尾鮰源嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌屬于非發(fā)酵型,專性需氧不形成芽孢的革蘭氏陰性菌,廣泛分布于各種水源、土壤和植物根系等,可引起動物發(fā)生敗血癥、心內膜炎、肺炎、結膜炎、腦炎、尿道、消化道感染和傷口感染等。

我們于2004年從發(fā)病的四川省成都市的龍泉湖、三臺縣魯班湖、仁壽縣黑龍灘水庫和簡陽縣三岔湖等地網箱養(yǎng)殖的斑點叉尾鮰病魚的體內(肝、腎)分離到一株病原菌。該菌株為革蘭氏陰性桿菌,極生多鞭毛,無莢膜,無芽孢,鞭毛數(shù)≥2。在普通營養(yǎng)瓊脂菌落呈灰白色,圓形,表面光滑,邊緣整齊的半透明菌落;在TSA平板上形成圓形,表面光滑,邊緣整齊,直徑為0.8~1.2毫米的透明的無色菌落;在兔血平板上出現(xiàn)明顯的β溶血環(huán)。為非發(fā)酵型,嚴格需氧,生長溫度范圍為15~41℃,最適生長溫度為25~30℃,在含鹽量5%以下的培養(yǎng)基上能生長,生長的pH范圍為5.0~9.0,最適pH6.0~7.0,對除麥芽糖和甘露糖以外的多種糖類不利用產酸,氧化酶陰性,DNA酶、蛋白酶、脲酶、賴氨酸脫羧酶陽性,MR、VP陰性,H2S陰性,凍化牛奶,液化明膠。根據該菌的形態(tài)學特征和生理生化特性初步確定為嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌,再結合16SrDNA序列分析進行準確的鑒定,在系統(tǒng)發(fā)育樹上與其他的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌菌株聚在一簇,其同源性在99.4%~99.6%之間,從而在分子生物學水平確切鑒定該菌為嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌。

我們通過對斑點叉尾鮰傳染性套腸癥的病原嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的一些致病因子進行研究,發(fā)現(xiàn)該菌胞外產物具有溶血活性、Veto細胞毒性、腸毒性、蛋白酶活性、脂酶活性、DNA酶活性和動物致死性,該菌胞外產物接種健康斑點叉尾鮰后,也出現(xiàn)體表的褪色斑、腹水、腸炎、腸套疊和肝、脾、腎腫大等病變,這與該活菌感染發(fā)病的病變相似,表明嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌胞外產物在其致病機制中有著重要的作用。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌能產生一種分子量為20.76KD多肽的外毒素。該外毒素接種斑點叉尾鮰,出現(xiàn)與嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌感染的相似癥狀與病變。

三、癥狀與病理變化

發(fā)病初期病魚表現(xiàn)為游動緩慢,靠邊或離群獨游,食欲減退或喪失,鰭條基部、下頜及腹部充血、出血。隨病程的發(fā)展病魚腹部膨大,體表出現(xiàn)大小不等的、色素減退的圓形或橢圓形的褪色斑,大的褪色斑塊直徑3厘米,以后在褪色斑的基礎上發(fā)生潰瘍。小的潰瘍灶直徑0.3~0.5毫米,大的潰瘍灶直徑達3厘米;部分魚垂死時出現(xiàn)頭向上、尾向下、垂直懸掛于水體中的特殊姿勢,最后病魚沉入水底死亡,當提拉網箱檢查時才發(fā)現(xiàn)箱底沉有大量的死魚。發(fā)病率90%左右,死亡率80%以上。病死魚的解剖變化主要表現(xiàn)為腹部膨大,肛門紅肌外突,有的魚甚至出現(xiàn)脫肛現(xiàn)象,后腸段的一部分脫出到肛門外,剖開體腔,腹腔內充滿大量清亮或淡黃色或含血的腹水,胃腸道內沒有食物,胃底部和幽門部粘膜充血、出血;腸道充血,出血,腸壁變薄,腸腔內充有大量含血的粘液,腸道發(fā)生痙攣或異常蠕動,常于后腸出現(xiàn)1~2個腸套疊,套疊的長度為0.5~2.5厘米,發(fā)生套疊和脫肛的腸道明顯充血、出血和壞死,部分魚還見前腸回縮進入胃內的現(xiàn)象。肝腫大,顏色變淡發(fā)白或呈土黃色,部分魚可見出血斑,質地變脆,膽囊擴張,膽汁充盈;脾、腎腫大,淤血,呈紫黑色;部分病魚可見鰾和脂肪充血和出血。

組織病理學上,主要病理損傷是全身廣泛性水腫、細胞腫脹、變性、壞死和炎癥細胞浸潤,特別是肝、腎、胃腸道和骨骼肌的損傷較為嚴重,為其損傷的靶器官。在細胞病理學上,病魚肝腎脾腸等器官的細胞均有較為嚴重的損傷,細胞腫脹,超微結構破壞,特別是線粒體和細胞核的損傷很明顯。線粒體表現(xiàn)為腫脹,嵴斷裂,或溶解消失,呈空囊狀;細胞核變形、染色質溶解或發(fā)生濃縮、裂解、邊移,甚至形成類似凋亡小體的結構。

四、診斷

1,根據本病的癥狀與病理變化,本病主要表現(xiàn)為體表(特別是腹部和下頜)充血、出血和褪色斑,腹部膨大,腹腔內充有淡黃色或帶血的腹水,胃腸道粘膜充血、出血,腸道發(fā)生,甚至腸脫,腸腔內充滿淡黃色或含血的粘液,特別是腸套疊是本病的特征性變化,而且這種腸套疊的出現(xiàn)率很高,可達60%~95%。這種特征性的損傷具有重要的證病意義。

2.對本病的確診須從靶組織內分離到的革蘭氏陰性嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌。病魚肝臟和腎臟是最佳病原菌分離器官,血液也是分離病原菌的良好病料。該菌株為革蘭氏陰性桿菌,極生多鞭毛,無莢膜,無芽孢,在普通營養(yǎng)瓊脂菌落呈灰白色、圓形、表面光滑、邊沿整齊的半透明菌落;在兔血平板上出現(xiàn)明顯的β溶血環(huán)。為非發(fā)酵型,嚴格需氧,生長溫度范圍為15~41℃,最適生長溫度為25~30℃,根據該菌的形態(tài)學特征和生理生化特性,再結合16SrDNA序列分析進行準確的鑒定。

3.一旦懷疑發(fā)生本病應盡快采樣送有關實驗室診斷。采取癥狀明顯、具有代表性的斑點叉尾鮰病魚。采樣要取活體或瀕臨死亡的斑點叉尾鮰病魚,采樣時間越早越好。采集病魚整體時,一般根據大小采取10~20尾即可。活魚用充氧袋封裝,保證氧氣充足,使之成活。用泡沫箱封裝,先在箱底鋪一層冰,頭腹向上,層魚層冰,加封頂冰,使魚體溫度保持在0~5℃。有條件的單位可在清潔、無污染的條件下,對發(fā)病斑點叉尾鮰的血液、肝和腎進行無菌操作采樣送檢。采血應在發(fā)病期、并未經藥物治療期間進行,血液應脫纖或加肝素鈉抗凝劑,但不可加入抗生素,用經滅菌消毒的帶蓋塑料離心管盛裝,密封后,貼上標簽,用泡沫箱封裝,并在離心管周圍加冰塊,使血液病料溫度保持在0~4℃。若不能及時運送,須置4℃冰箱內作暫時保存,但時間不宜過久,以免溶血。組織樣品,應新鮮并以無菌技術采集,采集的組織分別放入滅菌的容器或滅菌的塑料袋內,貼上標簽,用泡沫箱封裝,并在樣品周圍加冰塊,使病料溫度保持在0~4℃。也可作暫時凍結,用泡沫箱封裝,并在樣品周圍加冰塊,但凍結時間不宜過長。

4.由于本病發(fā)生的歷史較短,在對該病快速準確的診斷方法研究上還較少,今后將應加強研究,加強檢疫和對本病的監(jiān)測,尤其是研制本菌毒素檢測試劑盒。

五、防治

由于該病具有發(fā)病突然,傳染快,流行廣,死亡率高,一旦發(fā)病后很難控制等特點,因此對該病的防治應根據發(fā)病特點及病原的特性有針對性地采取防控措施。當發(fā)生該病時,應盡早診斷,盡早治療。

(一)預防

1.要加強飼養(yǎng)管理,尤其是水質、氣候突變的時候要注意防病,改善水體環(huán)境條件,科學飼喂,盡量減少低溶氧和惡劣的水環(huán)境等應激因子的刺激,特別是高密度會增加本病發(fā)生的機會,故放養(yǎng)密度不宜過大,并經常加注新水。

2.育健壯無病的優(yōu)良斑點叉尾鮰苗種,魚種盡量就地培養(yǎng),減少搬運,并注意下塘或進箱前進行魚體消毒??捎?~10毫克/升的高錳酸鉀水溶液藥浴5~15分鐘。發(fā)病魚池或網箱用過的工具要進行消毒,病死魚要及時撈出深埋,而不能到處亂扔。

3.本病是在開春后(一般是每年的3月下旬或4月初)開始發(fā)病,發(fā)病水溫多在16℃以上,因此要及早預防,在飼料中添加一些免疫增強劑(如酵母多糖、黃芪多糖等)以提高魚體的免疹力和抗病力,或投喂病原菌敏感的藥物,預防該病的發(fā)生。

4.免疫預防是本病最有效最關鍵的預防措施。因此研制出有效的免疫疫苗將對該病的預防控制起著重要作用。用超聲粉碎菌體疫苗和用福爾馬林滅活疫苗都可刺激魚體產生抗體,產生保護免疫,凝集抗體可持續(xù)120天以上。我們對斑點叉尾鮰源嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌進行了初步疫苗的研制,以強毒株制成全菌體的滅活疫苗,采用腹腔注射、浸泡和口服法對健康斑點叉尾鮰進行了免疫接種,其中浸泡和口服法還分別進行了加強免疫,實驗魚對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的血清凝集抗體效價及其對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的抵抗力均顯著提高。

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