光合細(xì)菌菌種分離與保藏

注重水產(chǎn)適用技術(shù)，奉獻(xiàn)實(shí)用養(yǎng)魚信息！

隨著健康養(yǎng)殖漁業(yè)的發(fā)展，光合細(xì)菌越來越受到養(yǎng)殖者的青睞。光合細(xì)菌廣泛分布于生物圈的各個(gè)角落，在凈化水質(zhì)、防治疾病和促生長方面效果明顯，可作為魚、蝦、貝的餌料、餌料添加劑及浮游動(dòng)物餌料。

光合細(xì)菌的培養(yǎng)首先要有菌種，菌種是從它生活環(huán)境中的微生物群中分離出來的。筆者現(xiàn)以水產(chǎn)養(yǎng)殖和水質(zhì)凈化中常用的紅螺菌種為例，簡單介紹其分離和保藏技術(shù)，以供生產(chǎn)者參考。

菌種的分離

采樣

紅螺菌種的種類在自然界中有有機(jī)污染的地方廣泛存在。樣品可以從河底、湖底、海底以及水田、池塘、溝渠等有污水進(jìn)入的地方，以及食品工業(yè)污水排放處的橙黃色、粉紅色泥土中獲得?？梢杂帽硬杉倭磕嗤?，連水放入廣口瓶或用采水器、采泥器取樣。

為了獲得密度較高的樣品，也可以采取淡水池塘、池沼及海邊的污泥，置入廣口瓶中蓋緊，分別加入幾片海帶或其它一些海藻，裝滿淡水或海水，置入日光下培養(yǎng)。大約一個(gè)月以后，瓶底就可以見到光合細(xì)菌的沉淀物。經(jīng)過這樣的簡單培養(yǎng)后，可以直接對(duì)此菌作分離后進(jìn)行純培養(yǎng)。

富集

富集培養(yǎng)時(shí)，將采集的樣品裝入玻璃圓筒或大型試管或具塞磨口玻璃瓶，再倒入配制好的培養(yǎng)液，充分?jǐn)嚢琛樵斐蓞挌猸h(huán)境，在玻璃瓶或試管中加入液體石蠟以隔絕空氣；磨口瓶只需將培養(yǎng)液加滿加塞，以排除其中空氣，瓶外再用塑料薄膜裹住扎牢，以減少水分蒸發(fā)。

培養(yǎng)溫度為5℃～35℃。光照可以利用陽光，夜晚時(shí)則利用人工光源，光照強(qiáng)度的適宜范圍為5000Lux～10000Lux。在這樣的培養(yǎng)條件下，大約經(jīng)過2周～8周的培養(yǎng)，在玻璃瓶壁上會(huì)出現(xiàn)光合細(xì)菌的菌落，或者整個(gè)培養(yǎng)液長成紅色。如果是培養(yǎng)海水的光合細(xì)菌，因其生長緩慢，需要更長的富集培養(yǎng)時(shí)間。

富集操作可以重復(fù)進(jìn)行，方法是將初步富集的光合細(xì)菌的菌液或泥土移入磨口玻璃瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，反復(fù)多次，光合細(xì)菌占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)時(shí)可確認(rèn)富集成功。

為了避免在培養(yǎng)液中藻類和綠桿菌科的細(xì)菌的發(fā)展，可采用濾光片，使波長800納米或更長波長的光透過，這樣可以更有效地達(dá)到富集紫色非硫細(xì)菌的目的。另外，采用含有氯化物的培養(yǎng)基效果比采用硫酸鹽培養(yǎng)基好，可以阻礙紫色硫細(xì)菌生長。

分離

一旦富集培養(yǎng)成功，就可以緊接著進(jìn)行分離培養(yǎng)。以紫色非硫細(xì)菌為例，其生長速度較快，大約在一周左右移植比較合適。若是海水生長的紫色非硫細(xì)菌則生長緩慢，約需3周。移植時(shí)先配制固體培養(yǎng)基，滅菌后澆成平板。將菌液做適當(dāng)稀釋后，用劃線法或涂布法進(jìn)行接種，然后置入?yún)挌飧椎热萜髦性趨挌?、光照條件下培養(yǎng)。在溫度25℃～35℃，光照2000Lux～3000Lux的條件下培養(yǎng)2天～3天至7天左右，就能長出光合細(xì)菌菌落。仔細(xì)挑取單菌落，繼續(xù)分離培養(yǎng)，反復(fù)多次，便能得到紫色非硫光合細(xì)菌的純培養(yǎng)物。

在富集培養(yǎng)和分離培養(yǎng)時(shí)，不同的種類可以根據(jù)其不同的生態(tài)要求選擇不同的培養(yǎng)條件。如莢膜紅假單胞菌的純分離，可在分離紫色非硫細(xì)菌所用的培養(yǎng)基中加入0.15%的丙酸鈉，在光照條件下進(jìn)行厭氣培養(yǎng)，反復(fù)數(shù)次，以達(dá)到富集的目的。此外，把碳源基質(zhì)改成葡萄糖，以0.1%～0.3%的量加入培養(yǎng)基中，經(jīng)過反復(fù)幾次培養(yǎng)，培養(yǎng)物中的莢膜紅假單胞菌一般會(huì)占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。但其中厭氣的異養(yǎng)細(xì)菌的生長可能也受到促進(jìn)，所以有必要再一次以丙酸鈉作為基質(zhì)，進(jìn)行分離培養(yǎng)。紅螺菌屬的種類可利用紅螺菌屬細(xì)菌具有快速運(yùn)動(dòng)能力的特點(diǎn)來分離，最后通過鑒定加以確證。

菌種保藏

紫色非硫細(xì)菌的純培養(yǎng)物，可以保持在不同的培養(yǎng)基上，但一般使用分離時(shí)的培養(yǎng)基，或根據(jù)分離菌株的特殊要求而另行配制。

將分離后的菌株的純培養(yǎng)物，穿刺接種于裝有其所需的固體培養(yǎng)基的試管內(nèi)，置于厭氧缸中，在光照的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，待長好后取出，在試管中加入無菌的液體石蠟，以隔斷空氣，便可保存較長時(shí)間。也可以將保存用的菌株試管，放入大型試管中，在其底部加吸氧劑，大試管用塞子塞緊并抽氣減壓進(jìn)行培養(yǎng)。

在此條件下，大約1年中移植1次，可保存具有強(qiáng)活力的菌株。

（張文革）

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