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鏡檢，即顯微鏡檢查是診斷魚病的重要方法之一。有些魚類病原體肉眼看不清或根本看不見，必須借助于顯微鏡、解剖鏡或放大鏡來診斷。如白頭白嘴病是由細(xì)菌引起的，其癥狀是頭、嘴發(fā)白，但又往往與車輪蟲病并發(fā)。而患車輪蟲病的病魚中，有時(shí)也會(huì)有個(gè)別病魚頭部或嘴部出現(xiàn)輕微的灰白現(xiàn)象，容易被誤認(rèn)為是白頭白嘴病。通過鏡檢，就能作出正確的診斷。
顯微鏡是由一個(gè)透鏡或幾個(gè)透鏡的組合構(gòu)成的一種光學(xué)儀器。是人類進(jìn)入原子時(shí)代的標(biāo)志。用于放大微小物體成為人的肉眼所能看到的儀器。顯微鏡的種類有很多，常見的有：光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡、探針顯微鏡等。我們普通人平常用的大多是光學(xué)顯微鏡。
一、顯微鏡的構(gòu)造
1.物鏡
該鏡頭下端接近被檢物體，為顯微鏡上的主要裝置。由多塊透鏡組成。一般顯微鏡具有3個(gè)-4個(gè)物鏡，分成干燥系和油鏡兩組，干燥系又按放大倍數(shù)分為低倍鏡和高倍鏡。各物鏡放大率由其外形辨認(rèn)，鏡頭長度越大，鏡片口徑越小，放大倍數(shù)愈大；反之，放大倍數(shù)小。油鏡頭的下緣，一般刻有一圈黑線。此外，各物鏡上都刻有放大倍數(shù)、孔徑數(shù)等標(biāo)志
2.目鏡
目鏡和鏡檢者的眼睛接近。目鏡由兩塊透鏡組成，其上刻有倍數(shù)。為便于指出物象，常在鏡中裝黑色細(xì)絲一條，作為指針。
3.聚光器
聚光器位于載物臺(tái)下方的次臺(tái)上，由數(shù)個(gè)透鏡組成。能上下移動(dòng)，調(diào)節(jié)并集聚由光源提供的光線，使集中于載物玻片上。
4.光源
光源提供觀察所需光線，裝在顯微鏡的最下方。
5.鏡臂
鏡臂在鏡筒后面，便于顯微鏡搬移，并作為將鏡筒傾斜時(shí)的握持部。
6.底座
顯微鏡的底座用以支持全鏡，呈馬蹄形。
7.載物臺(tái)
在物鏡下方，呈方形或圓形，用以載放被檢物體。中央有孔，可以透光。臺(tái)上裝有一彈簧夾，鏡檢時(shí)可以固定標(biāo)本片。有的載物臺(tái)上裝有載物臺(tái)調(diào)解旋鈕，捻轉(zhuǎn)旋鈕，能使標(biāo)本前后左右移動(dòng)。
8.光圈
在聚光器下方，可以任意開閉，用以調(diào)節(jié)射入集光線的多寡。
9.電源和亮度調(diào)節(jié)旋鈕
用于開啟光源和調(diào)節(jié)光源的亮度。
10.粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋
粗準(zhǔn)焦螺旋可使載物臺(tái)較大距離地升降。細(xì)準(zhǔn)焦螺旋可以精確地調(diào)節(jié)距離。
二、顯微鏡的使用方法
（一)調(diào)光
(1)鏡檢時(shí)身體要正對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)，采取端正的姿態(tài)，調(diào)整兩個(gè)目鏡之間的距離與觀測(cè)者瞳距相符，兩眼自然睜開，同時(shí)左手調(diào)節(jié)焦距，使物像清晰并移動(dòng)標(biāo)本視野，右手記錄、繪圖。將低倍物鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方與鏡筒成一直線。鏡檢時(shí)載物臺(tái)不可傾斜，因?yàn)楫?dāng)載物臺(tái)傾斜時(shí)，液體或油易流出，既損壞了標(biāo)本，又污染載物臺(tái)，也影響檢查結(jié)果。
(2)利用自然光源鏡檢時(shí)，最好用朝北的光源，不宜采用直射陽光；利用人工光源時(shí)，用日光燈的光源。轉(zhuǎn)動(dòng)底部光源或撥動(dòng)反光鏡，調(diào)節(jié)視野亮度。反光鏡有平、凹兩面，光源強(qiáng)時(shí)用平面，較暗時(shí)用凹面，需要強(qiáng)光時(shí)，將聚光器提高，光圈放大；需要弱光時(shí)，將聚光器降低，或光圈適當(dāng)縮小。
(3)將待觀察的標(biāo)本置載物臺(tái)上，載物臺(tái)上有固定的裝置固定標(biāo)本。通過載物臺(tái)調(diào)節(jié)旋鈕將標(biāo)本移至鏡筒下方。轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋使鏡筒下降至物鏡 鏡接近標(biāo)本。于轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋的同時(shí)，需俯身在鏡旁仔細(xì)觀察物鏡與標(biāo)本之間的距離。
(4)調(diào)節(jié)目鏡之間距離，雙眼分別于左、右目鏡中觀察，待雙眼視野重合，同時(shí)左手轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒徐徐上升以調(diào)節(jié)焦距，使視野內(nèi)的物像看到時(shí)即停，再調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，至標(biāo)本清晰為止。
(二)物鏡的使用
顯微鏡一般具有三個(gè)物鏡，即低倍、高倍及油鏡，固定于物鏡轉(zhuǎn)換盤孔中。觀察標(biāo)本時(shí)，使用低倍物鏡，此時(shí)，視野較大，標(biāo)本較易查出，但放大倍數(shù)較小(一般放大100倍)，較小的物體不易觀察其結(jié)構(gòu)。高倍物鏡放大的倍數(shù)較大(一般放大400倍)，能觀察微小的物體或結(jié)構(gòu)。油鏡放大倍數(shù)可達(dá)1000倍，用來觀察細(xì)菌。普通人使用低倍物鏡即可。
(三)低倍、高倍、油鏡頭的識(shí)別
(1)標(biāo)明放大倍數(shù)10×、40 ×、100 x，或10/0.25、40/0.65、 100/1.30。
(2)低倍鏡最短，高倍鏡較長，油鏡最長。
(3)鏡頭前面的鏡孔低倍鏡最大，高倍鏡較大，油鏡最小。
(4)油鏡頭上?？逃泻谏h(huán)圈，或“Oil"或“油”字
(四)低倍鏡換高倍鏡的使用方法
(1)光線調(diào)好后，捻轉(zhuǎn)載物臺(tái)調(diào)節(jié)旋鈕尋找需要觀察的標(biāo)本。
(2)如標(biāo)本的體積較小，不能清楚查看其構(gòu)造因而不能確認(rèn)時(shí)，則將標(biāo)本移至視野中央，再旋轉(zhuǎn)高倍物鏡于鏡筒下方。
(3)旋轉(zhuǎn)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋至物象清晰為止。
(4)調(diào)節(jié)聚光器及光圈，使視野內(nèi)的物象達(dá)到最清晰的程度。
(五)油鏡的使用方法
(1)將光線調(diào)至最強(qiáng)程度(聚光器提高，光圈全部開放，亮度調(diào)節(jié)旋鈕或光源放至最大）。
(2)將標(biāo)本固定在載物臺(tái)上，先把低倍鏡調(diào)至視野最亮，并找到標(biāo)本視野的適當(dāng)位置，然后才能換用油鏡。
(3)轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋使鏡筒上升，滴香柏油1小滴(不要過多，不要涂開)于物鏡正下方標(biāo)本上。
(4)轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換盤，使油鏡頭于鏡筒下方。
(5)俯身鏡旁側(cè)面，在肉眼的觀察下，轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋使油鏡頭徐徐下降浸入香柏油內(nèi)，輕輕接觸玻片為止。但勿使兩者相碰，防止損傷鏡頭或玻片。
(6)慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使油鏡頭徐徐上升至見到標(biāo)本的物象為止。
(7)轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使視野物象達(dá)到最清晰的程度。
(8)左手徐徐移動(dòng)載物臺(tái)調(diào)節(jié)旋鈕，并轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋以觀察標(biāo)本。
(9)標(biāo)本觀察完畢后，轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋將鏡筒升起，取下標(biāo)本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈，再用干凈的擦鏡紙蘸少許二甲苯擦拭鏡頭，最后用干凈的擦鏡紙將鏡頭上的二甲苯擦去。注意在擦鏡紙擦拭時(shí)，要求順著一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)擦拭，不能兩個(gè)方向來回擦。
(六)觀察
初學(xué)者應(yīng)先用低倍鏡觀察，這是因?yàn)?/span>低倍鏡視野的實(shí)際范圍最大，易于發(fā)現(xiàn)目的物，將標(biāo)本玻片放在載物臺(tái)上(注意標(biāo)本朝上)，并使標(biāo)本位于物鏡的正下方，轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，同時(shí)從側(cè)面觀察，待物鏡下降到標(biāo)本約0.5厘米時(shí)，開始由目鏡觀察，同時(shí)用粗準(zhǔn)焦螺旋升起鏡筒，直到出現(xiàn)物象后，改用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，上下微微轉(zhuǎn)動(dòng)，仔細(xì)調(diào)節(jié)焦距，直至最后獲得清晰的物象為止。如此時(shí)視野里所觀察到的部位不理想時(shí)，可利用載物臺(tái)調(diào)節(jié)旋鈕將最適合的部位移動(dòng)到視野中央。
由低倍鏡轉(zhuǎn)換到高倍鏡時(shí)，一定要從側(cè)面注視，以防低倍鏡未對(duì)好焦距而造成鏡頭與玻片相撞，另外要用手指捏住轉(zhuǎn)換器下面的金屬盤使之旋轉(zhuǎn)，而不得用手指捏住物鏡來轉(zhuǎn)動(dòng)，否則長期使用后，會(huì)使光軸歪斜。調(diào)節(jié)光圈和聚光鏡，使亮度適中，再仔細(xì)轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，調(diào)節(jié)焦距，獲得清晰物象。
細(xì)菌或其他標(biāo)本的細(xì)微結(jié)構(gòu)，都需要用油鏡觀察，由于油鏡的工作距離很短(0.19毫米左右)，故使用時(shí)必須特別小心。在低倍鏡找到要觀察的部位以后，將鏡筒升高，在標(biāo)本上加一滴香柏油，轉(zhuǎn)換鏡頭，從側(cè)面注視，用粗準(zhǔn)焦螺旋將鏡筒小心下降，使油鏡浸入油滴，直到幾乎與標(biāo)本接觸為止(注意切勿壓在標(biāo)本上，以免壓碎玻片，甚至損壞油鏡鏡頭)。從目鏡觀察，先用粗準(zhǔn)焦螺旋徐徐升起(只準(zhǔn)上升鏡筒，不能向下調(diào)節(jié))，當(dāng)視野中有模糊的標(biāo)本物象時(shí)，改用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié)，直到標(biāo)本物象清晰為止，如轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋已使鏡頭離開油鏡，應(yīng)重新調(diào)節(jié)，直至調(diào)到看清物象為止。
三、魚體鏡檢的正確操作
用顯微鏡、解剖鏡、放大鏡對(duì)魚病進(jìn)行檢查，簡(jiǎn)稱鏡檢。鏡檢是在魚病情況比較復(fù)雜，僅憑肉眼檢查原則上是不能作出正確診斷時(shí)而開展的更進(jìn)一步的檢查工作。在一般情況下，魚病往往錯(cuò)綜復(fù)雜，很多病原體十分細(xì)小，有必要進(jìn)行鏡檢。
鏡檢的方法是將從病變部位取少量的組織或粘液置于載玻片上，如是體表和鰓的組織或粘液，應(yīng)加上少量普通潔凈水或生理鹽水；是內(nèi)臟組織則用生理鹽水或潔凈水，然后蓋上蓋玻片，并稍加壓平，于顯微鏡下進(jìn)行觀察，先用低倍鏡檢查，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有蟲體構(gòu)造看不準(zhǔn)時(shí)，再換中倍鏡或高倍鏡檢查。
玻片從左到右，移下一小格，再從右往左，自上而下周而復(fù)始地移動(dòng)，直至整個(gè)玻片看完，記下寄生蟲的種類和數(shù)量。少量寄生蟲并不引起魚病，但若隨意在一個(gè)玻片上觀察3個(gè)視野記數(shù)，平均每個(gè)視野有20個(gè)左右，就應(yīng)引起注意。
總之，在整個(gè)檢查過程中，應(yīng)把檢查到的情況，結(jié)合魚病流行季節(jié)、各階段發(fā)病規(guī)律進(jìn)行分析比較，找出其原因，作出診斷，然后根據(jù)各種病的防治方法，對(duì)癥下藥，及時(shí)總結(jié)。
四、檢查時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)：
1.用活的病魚或剛死的病魚。迅速送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查。因時(shí)間稍長，魚體腐爛就很難正確論斷。
2.取樣時(shí)要保持魚體濕潤。因魚體干燥后，病魚的癥狀也會(huì)變得不明顯。因此，應(yīng)將病魚裝在帶有原飼養(yǎng)水的桶或盆里拿出檢查。
五、檢查方法
（1）載玻片法
取下一小塊病灶組織或一小滴內(nèi)含物，放在干凈的載玻片上，滴入一小滴清水或鹽水，蓋上蓋玻片，輕輕地壓平，先在低倍顯微鏡下檢查，分辨不清或可疑的可再用高倍鏡檢查。
（2）玻片壓縮法
用兩片厚度約為3～4毫米，大小約6×12厘米的玻片，先將要檢查的組織或者是器官的一部分以及粘液等，放在其中一片玻片上，滴上適量的清水或生理鹽水，用另一片玻片將其壓成透明的薄層，即可放到解剖鏡或低倍顯微鏡下檢查。
六、鏡檢應(yīng)該重點(diǎn)檢查的組織器官
魚的各個(gè)組織器官、血液都可能有病原體存在，但在生產(chǎn)實(shí)踐中，特別應(yīng)該重點(diǎn)檢查的部位是粘液、鰭條、鰓、腸胃、肝臟等部位。
（1）粘液
在魚的體表粘液中，往往有許多肉眼看不見的病原體，如顫動(dòng)隱鞭蟲、口絲蟲、車輪蟲以及吸蟲囊蚴等，粘孢子蟲和小瓜蟲的孢囊肉眼也不易區(qū)分。在檢查時(shí)，先用解剖刀刮取魚體表的粘液，然后按照鏡檢方法將粘液放到顯微鏡或解剖鏡下觀察。
（2）鰓
用剪刀從左右鰓各剪取第一鰓兩端和中間三個(gè)點(diǎn)的鰓組織，放在載玻片上，滴入適量的清水，蓋上蓋玻片在顯微鏡下觀察；然后再刮取鰓片上的粘液或可疑物，同樣按上述方法進(jìn)行檢查。可發(fā)現(xiàn)鰓隱鞭蟲、波豆蟲、車輪蟲、黏孢子蟲、膚孢蟲、斜管蟲、小瓜子蟲、杯體蟲、毛管蟲、指環(huán)蟲等寄生蟲。魚的鰓是特別容易被病原體侵襲寄生的部位，取鰓組織時(shí)，最好從每一邊鰓的第一片鰓片接近兩端的位置剪取一小塊，寄生蟲大多在鰓小片的這兩個(gè)位置上寄生。
檢查粘細(xì)菌可取鰓腐爛處旁邊的組織，取下后放載玻片上，加清水靜置10—15分鐘后檢查(因?yàn)檎臣?xì)菌離開寄主后會(huì)聚集在一起)，容易看到粘細(xì)菌。
（3）鼻腔
用吸管吸取少許清水注入鼻孔中，再用鑷子或微吸管從鼻腔內(nèi)取少許內(nèi)含物或?qū)⒁后w吸出，放入培養(yǎng)皿中(要多吸幾次)，或置于顯微鏡下檢查，用低倍顯微鏡或解剖鏡觀察?？砂l(fā)現(xiàn)黏孢子蟲、車輪蟲等原生動(dòng)物。
（4）血液
從鰓動(dòng)脈或心臟取血。血液鏡檢可以發(fā)現(xiàn)錐體蟲等原生動(dòng)物寄生蟲。
（5）口腔
用鑷子刮取上下顎的粘液在顯微鏡下檢查。若是檢查白頭白嘴病，刮下吻部周圍的粘液也要過10—15分鐘后再觀察。
（6）眼
用彎頭鑷取出魚眼睛，放于玻片上，剖開鞏膜，釋出玻璃體和水晶體，在低倍顯微鏡下或解剖鏡下檢查，可發(fā)現(xiàn)雙穴吸蟲的囊蚴和黏孢子蟲等。
（7）體腔（腹腔）
打開體腔，剖開魚體，取出所有內(nèi)臟后用潔凈水或生理鹽水自上而下沖洗腹腔，用平皿盛裝沖洗液，稍加攪動(dòng)，倒去上層清水，下沉水與沉淤物用吸管吸到載玻片上，逐次檢查。發(fā)現(xiàn)有白點(diǎn)，用解剖鏡或顯微鏡檢查，可發(fā)現(xiàn)黏孢子蟲、微孢子蟲、絳蟲等成蟲和囊蚴。
（8）肌肉
剝?nèi)ヴ~體皮膚后，先在前、中、后等部分取一小片肌肉放在載玻片上，蓋上蓋玻片，輕輕壓平，在顯微鏡下觀察，再用壓縮法檢查，可發(fā)現(xiàn)黏孢子蟲、復(fù)殖吸蟲、絳蟲和線蟲等幼蟲。
（9）腸胃
檢查魚的腸胃，首先應(yīng)把腸道外壁上所有的脂肪組織盡量去除干凈，否則不易進(jìn)行觀察。目檢腸道外形，若腸道外壁上有許多小白點(diǎn)，通常是粘孢子蟲或微孢子蟲的孢囊。肉眼檢查完后，一般是將腸道分為前腸、中腸和后腸三段，分別進(jìn)行檢查。用尖剪在與腸平行的方向剪開一個(gè)小切口，用鑷子從切口取一小滴內(nèi)含物放載玻片上。滴上一小滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，壓片鏡檢，可發(fā)現(xiàn)鞭毛蟲，變形蟲、黏孢子蟲、微孢子蟲、球蟲和纖毛蟲等原生動(dòng)物。六鞭毛蟲、變形蟲和腸袋蟲一般寄生在后腸近肛門3～7厘米處，而復(fù)殖吸蟲、絳蟲、線蟲和棘頭蟲等通常在胃、前腸或中腸寄生。
檢查時(shí)除了注意發(fā)現(xiàn)較大型的寄生蟲外，還應(yīng)注意腸內(nèi)壁上有無白色點(diǎn)狀物或瘤狀物，有無潰爛發(fā)紅發(fā)紫的現(xiàn)象。如果有小白點(diǎn)，壓破其孢囊，往往可以看到大量的粘孢子蟲，有時(shí)也會(huì)是微孢子蟲。青魚腸里潰爛或有白色瘤狀物，往往是球蟲的大量寄生。如果發(fā)紅發(fā)紫，則一般是細(xì)菌性腸炎。
（10）肝臟
檢查魚的肝臟，先肉眼觀察肝臟的顏色有無變化，有無潰爛、病變、白色和腫瘤等。在肝的表面，有時(shí)可發(fā)現(xiàn)復(fù)殖吸蟲的孢囊或蟲體，有的則有粘孢子蟲、微孢子蟲或球蟲形成的孢囊的小白點(diǎn)。然后取少許肝組織，放在載玻片上，蓋上蓋玻片，輕輕壓平，先在低倍鏡下觀察，然后再用高倍鏡觀察，通常在病魚肝臟上可發(fā)現(xiàn)粘孢子蟲，微孢子蟲等的孢子或胞囊，有時(shí)還有吸蟲的囊蚴。
（11）膽囊
魚的膽囊壁和膽汁，除用載玻片法在顯微鏡下檢查外，還要用壓展法或放在培養(yǎng)皿里用解剖鏡或低倍顯微鏡觀察。膽囊內(nèi)可發(fā)現(xiàn)六鞭毛蟲、黏孢子蟲、微孢子蟲、復(fù)殖吸蟲和絳蟲幼蟲等。
取膽囊時(shí)要特別小心，切勿弄破，取出后放培養(yǎng)皿中，目檢后取一部分膽囊壁放載玻片上，蓋上蓋玻片，壓平，放顯微鏡下觀察。檢查膽汁時(shí)用吸管吸取膽汁，在鏡下作載玻片法檢查。
（12）鰾
檢查魚鰾用載玻片法和壓展法同時(shí)檢查，可發(fā)現(xiàn)復(fù)殖吸蟲、線蟲、黏孢子蟲及其胞囊。
七、鏡下觀察病原體的計(jì)數(shù)方法
鏡檢時(shí)，除了解病原體的種類和對(duì)寄主的感染率(%)外，還要了解它們對(duì)寄主的感染強(qiáng)度，因而對(duì)每種病原體的數(shù)量要進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
其方法與標(biāo)準(zhǔn)是：細(xì)菌：腸炎、爛鰓、蛀鰭、赤皮病、癤瘡等按表現(xiàn)的癥狀，用文字描述。
真菌：水霉、鰓霉，按照對(duì)器官的比例大小，用文字和數(shù)字說明。原生動(dòng)物：這類病原體用肉眼難于觀察到，鏡下觀察一般也不可能逐個(gè)數(shù)清，因而采用估計(jì)法以“+”來表示，“+”表示有，“++”表示多，“+++”表示很多。
其中：
鞭毛蟲、變形蟲和孢子蟲的孢子，在高倍鏡一個(gè)視野下有1—20個(gè)蟲體記“+”號(hào)，20—5b個(gè)蟲體記；“++”號(hào)，蟲體51個(gè)以上記“+++”號(hào)，并注明是以孢子計(jì)算的。
纖毛蟲、吸管蟲莊低倍鏡一個(gè)視野下有1—50個(gè)記“+”號(hào)，51—100個(gè)記“++”號(hào)，100個(gè)以上記“+++”號(hào)。
小瓜蟲可按孢子蟲的標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)。
以上每—種統(tǒng)計(jì)數(shù)，都以任取放大同倍數(shù)的3個(gè)視野中觀察到蟲體的均值表示。
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