魚類核質(zhì)雜交與魚類基因轉(zhuǎn)移育種

把成熟的卵子置于盛有消毒水的培養(yǎng)皿中，在雙筒解剖鏡下靜置2～3分鐘，在卵子吸水膨脹出現(xiàn)卵周隙后，用磨尖的鐘表鑷子輕輕剝開卵膜，也可用胰酶溶液消化卵膜；將去膜的卵用消毒過的吸管吸移至底上涂有瓊脂層的培養(yǎng)皿中，皿內(nèi)盛有郝氏液，于解剖鏡下仔細(xì)觀察極體的位置。極體很?。s10微米），且發(fā)亮，緊靠極體的胚盤表面下即為卵核。用初生嬰兒胎發(fā)制成的發(fā)圈輕輕壓住卵子，再用玻璃針把卵核挑出，以去核的卵子作為受體。取另一種魚的發(fā)育至囊胚期的卵子，去膜后置于盛有細(xì)胞分離液（NaCl0.35克，KC10.005克，C10H14N2O8Na2·2H2O0.55克溶于100毫升重蒸水內(nèi)煮沸，冷卻后再加NaHCO30.02克，pH＝7）、涂有瓊脂的培養(yǎng)皿中。用玻璃針切下動物極囊胚，待囊胚細(xì)胞游離成單個細(xì)胞后即可作為供體。把分離的供體細(xì)胞移入盛有去核的受體卵細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。在雙筒解剖鏡下，借助于顯微注射器把供體細(xì)胞核注入受體卵細(xì)胞的胚盤中，然后移入1/10郝氏液中讓其發(fā)育。如手術(shù)準(zhǔn)確無誤，則移入細(xì)胞核后的卵子一般都能正常發(fā)育，有的還可孵出仔魚。

魚類基因轉(zhuǎn)移育種是利用外源目的基因，通過重組、轉(zhuǎn)移，培養(yǎng)具有目的表型效應(yīng)的個體。再以此作育種材料，育成可繁殖后代的個體。魚類的遺傳特征是由基因調(diào)控的，基因是由含特定遺傳信息的脫氧核糖核酸（DNA）構(gòu)成。通過在體外重新組合DNA分子，并將其移入受精的卵細(xì)胞中，使其能發(fā)育長成為具有新的遺傳特性的個體。

為把外源基因移入受體生物體中，必須把含有外源目的基因的DNA進(jìn)行重組。重組體DNA技術(shù)包括：首先得到目的基因的DNA片段，然后把這段DNA組合到載體上，引入細(xì)菌中使其大量擴(kuò)增，再從大量的DNA中選擇特定的DNA片段。至20世紀(jì)80年代，用于轉(zhuǎn)移至魚體內(nèi)的重組體基因已有人生長激素基因、人胰島素基因、牛生長激素基因、抗凍多肽基因及雞晶體蛋白基因等。

用得最普遍的轉(zhuǎn)移方法是，把特定的外源基因用顯微注射的方法導(dǎo)入魚的受精卵中，也有用Ca＋＋沉淀法導(dǎo)入的。顯微注射玻璃針內(nèi)徑為3微米，用帶有這種玻璃針的顯微注射器，把2毫微升含有3～7×106拷貝的外源基因溶液注入到受精卵的胚盤中央附近。外源基因的導(dǎo)入率最高可達(dá)100%。

人的生長激素基因被導(dǎo)入鯽、泥鰍的受精卵后，用分子雜交的方法檢測到外源基因在受體魚中自胚胎發(fā)育早期至成魚都能表達(dá)。在原腸晚期至神經(jīng)板期的復(fù)制達(dá)到高峰，隨后外源基因逐漸被降解，但在25%～60%成體受體魚的肌肉中，還能檢查到外源基因，證實(shí)外源基因已整合到受體魚染色體的DNA中。在轉(zhuǎn)移基因鯽的后代中，也發(fā)現(xiàn)所有2月齡的幼魚肌肉組織中有外源基因，說明外源基因不僅能被整合到受體魚染色體中，而且還可以遺傳。

轉(zhuǎn)移人生長激素基因的泥鰍，結(jié)果產(chǎn)生了快速生長的效應(yīng)，其43日齡時，快速生長的效應(yīng)特別顯著，實(shí)驗(yàn)組最大個體的體重為對照組平均體重的4.6倍。

魚類的基因轉(zhuǎn)移育種為魚類的定向育種提供了美妙的前景。人的生長激素基因在魚類中轉(zhuǎn)移成功且有一定的生物學(xué)效應(yīng)，預(yù)示著魚類的基因轉(zhuǎn)移可能不受親緣關(guān)系的嚴(yán)格限制。很多與經(jīng)濟(jì)上極為密切的新的動物基因?qū)饾u被分離出來，如抗寒、抗病和生長基因等，這些基因經(jīng)重組后再轉(zhuǎn)移于魚體內(nèi)可望獲得具有經(jīng)濟(jì)性狀極其優(yōu)良的魚類新品種。