論文：硫酸銅對梭鱸幼魚的急性毒性及其對車輪蟲的滅殺作用

        硫酸銅對梭鱸幼魚的急性毒性及其對車輪蟲的滅殺作用

王秋實 ，王樂 ，裴月 ，曹頂臣 ，李崇文 ，鄭先虎 ，吳學工 ，王炳謙

（1.中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070；2.天津天祥水產(chǎn)有限責任公司，天津 300000）

梭鱸Sander lucioperca屬鱸形目Pericformes鱸科Percidae梭鱸屬Stizostedion，主要分布于歐洲的咸海、黑海、里海和波羅的海水系的河流、湖泊，以及等鹽線在0.7%～0.9%范圍的海區(qū)[1]，在我國分布于新疆的額爾齊斯河、伊犁河[2]和黑龍江水系。梭鱸肉質(zhì)優(yōu)良、無肌間刺，氨基酸含量高[3]，是歐洲重要的養(yǎng)殖魚類，近年我國梭鱸的人工養(yǎng)殖逐步發(fā)展起來[4-6]，是一種適合池塘、湖泊、水庫增殖的優(yōu)良種類。

車輪蟲有280余種，是常見的魚類寄生蟲，在我國發(fā)現(xiàn)5屬近80種，屬寄生性纖毛蟲原生動物[7]。生產(chǎn)中常用硫酸銅防治車輪蟲病。目前已有學者進行了硫酸銅對梭鱸的急性毒性研究[1,2,8]，但用硫酸銅防治梭鱸的車輪蟲病尚未見報道。本試驗通過研究不同濃度硫酸銅對梭鱸的急性毒性及對車輪蟲的滅殺作用，旨在探索用硫酸銅有效滅殺車輪蟲的安全用量，為梭鱸車輪蟲病的防治提供依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗魚平均體質(zhì)量（3.59±0.19）g，平均體長（6.48±0.45）cm，為天津天祥水產(chǎn)有限責任公司提供的當年苗種，親本來自寧夏地理群體。從確診患有車輪蟲病的養(yǎng)殖池中隨機選取試驗魚，鏡檢患病率約30%，試驗前停食1d，放入水族箱中暫養(yǎng)。

試驗用五水硫酸銅為藍色粉末或晶體，大連康宇特種化工有限公司生產(chǎn)，含量≥96%。

1.2 方法

1.2.1 病魚流行病學特征觀察

首先對病魚的體表、鰓和攝食、游動行為等進行目測觀察，隨后取病魚體表黏液和鰓絲在顯微鏡下觀察車輪蟲的寄生情況。

1.2.2 急性毒性試驗

試驗用水為呼蘭試驗場地下水，曝氣72h，水溫22.5～24℃，溶解氧 6.4～8.0 mg/L，pH7.8～8.2。試驗容器為長方形聚乙烯塑料箱（54cm×36cm×40cm），試驗水體50L。先配制成1 000mg/L的五水硫酸銅母液，再按比例稀釋至各試驗濃度。

在正式試驗前，參考硫酸銅生產(chǎn)使用量和文獻資料，先進行預(yù)試驗，確定硫酸銅對梭鱸的24 h全致死濃度下限和96 h無致死濃度上限。根據(jù)該濃度范圍，按照等對數(shù)間距設(shè)置五水硫酸銅質(zhì)量濃度為0.40mg/L、0.70mg/L、1.22mg/L、2.14mg/L、3.75mg/L 和6.57mg/L共6個試驗濃度梯度組，設(shè)1個空白對照組，每個濃度設(shè)2個平行，隨機放入30尾魚，采用靜水生物法[9]，進行急性毒性試驗。為保證試驗水體中的藥物濃度和水質(zhì)，每24h更換50%的試驗液，試驗全程不投喂，微充氣。

試驗開始后連續(xù)12h觀察魚的中毒癥狀、死亡狀況，試驗魚停止呼吸、對外界刺激無反應(yīng)為死亡，及時清除死魚。統(tǒng)計各濃度組24h、48h和96h的死亡個體數(shù)。

1.2.3 硫酸銅對車輪蟲的滅殺作用

按照急性毒性試驗的濃度梯度組，設(shè)置1個對照組和6個車輪蟲滅殺效果觀察組，每組隨機放入30尾試驗魚，每4h各組分別隨機撈取3尾魚，用顯微鏡觀察鰓絲和體表黏液中車輪蟲的滅殺情況。如間隔4h連續(xù)2次取樣觀察無車輪蟲或蟲體全部死亡，即認定試驗魚體上車輪蟲病原滅殺成功。

1.2.4 硫酸銅治療車輪蟲病的生產(chǎn)性試驗

選取梭鱸養(yǎng)殖車間中2個發(fā)病池（面積12m2，水深50cm的水泥池，每池1 700尾）進行硫酸銅治療車輪蟲病的生產(chǎn)性試驗。參照生產(chǎn)經(jīng)驗用量和急性毒性試驗的結(jié)果，將硫酸銅用水溶化后全池潑灑至池水濃度為0.7mg/L，靜水充氣消殺24h后，將魚移至消過毒的新養(yǎng)殖池（新池條件同消毒池）。連續(xù)10 d觀察車輪蟲的滅殺效果和魚死亡情況。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用寇氏法（Karder）[10]計算硫酸銅對梭鱸的24h、48h和 96h的半致死濃度（LC50），公式為：

lgLC50的標準誤（S）的計算公式：

95%可信限（X）的計算公式：

式中：Xi與Xi+1為相鄰兩組的劑量對數(shù)；Pi與Pi+1為相鄰兩組動物死亡百分比；d為相鄰兩組濃度對數(shù)差。

硫酸銅對梭鱸的安全濃度（SC）計算公式為：

2 結(jié)果與分析

2.1 流行病學特征觀察

本試驗中發(fā)病的梭鱸幼魚攝食減弱，個別個體現(xiàn)離群獨游、反應(yīng)遲緩。顯微鏡下觀察統(tǒng)計，約有30%左右的個體鰓絲和體表黏液中發(fā)現(xiàn)車輪蟲活體。在100倍視野下，平均5個視野可見2～3個車輪蟲。感染車輪蟲的個體，鰓絲和體表黏液增多，部分個體鰓絲充血、腫脹，為感染車輪蟲病的初期癥狀。

2.2 硫酸銅對梭鱸的急性毒性

兩組高濃度（3.75mg/L和6.57mg/L）試驗魚在試驗開始3h后出現(xiàn)呼吸急促、體表黏液增多、反應(yīng)遲鈍的現(xiàn)象；5h后兩組部分個體頭斜向上懸停于水中，對外界刺激幾乎失去反應(yīng)；7h后6.57mg/L組中部分個體掙扎跳躍，開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，死亡個體身體僵直，體色發(fā)白，口、鰓蓋張開；9h后3.75mg/L組個體開始死亡。

低濃度組的試驗魚在試驗初期活動正常，與對照組相似，對外界刺激時反應(yīng)迅速。5h后1.22mg/L和2.14mg/L組的試驗魚開始出現(xiàn)輕微反應(yīng)遲鈍的中毒癥狀；22 h后兩組個別魚開始死亡。

對照組和0.40mg/L組、0.70mg/L組的試驗魚一直無死亡。各濃度組魚死亡率見表1。

表1 硫酸銅對梭鱸毒性試驗結(jié)果Tab.1 Effects of different copper sulfate concentrations on pikeperch Sander lucioperca

硫酸銅對梭鱸的半致死濃度和安全濃度見表2。由表2可知，硫酸銅對梭鱸的LC50隨時間的延長而逐漸減小，表明硫酸銅對梭鱸的毒性隨時間延長而逐漸增加。

2.3 硫酸銅對車輪蟲的滅殺作用

表2 硫酸銅對梭鱸的半致死濃度和安全濃度Tab.2 LC50and safe concentrations of copper sulfate in pikeperch Sander lucioperca

試驗開始4h時，0.40mg/L和0.70mg/L兩組魚鰓絲和體表黏液中仍能觀察到活體車輪蟲，但與對照組相比，蟲體活力減弱，數(shù)量平均減少到1個左右；8h后，僅0.40mg/L組仍能觀察到少量車輪蟲，約10個視野可見1～2個活體，多數(shù)蟲體已死亡；20h后，0.40mg/L組車輪蟲滅殺率達到100%。濃度高于0.70mg/L的4個濃度組在試驗開始4 h后滅殺率即達100%。

2.4 硫酸銅治療車輪蟲病的生產(chǎn)性試驗

兩個試驗池全池潑灑0.7mg/L硫酸銅24h后，10d內(nèi)試驗魚僅死亡1尾，患病魚攝食和日常行為恢復(fù)正常，取鰓絲和體表黏液在顯微鏡下觀察，未發(fā)現(xiàn)寄生的車輪蟲，表明0.7mg/L硫酸銅消毒24h，已成功治愈試驗魚的車輪蟲病。

3 討論

硫酸銅是漁業(yè)生產(chǎn)中常用的重金屬鹽類藥物，游離的銅離子能夠破壞氧化還原酶系統(tǒng)的活性，阻礙代謝蛋白質(zhì)的合成[11]，可以治療原生動物引起的寄生蟲病[12]，還能殺滅一些低等藻類，控制藻類生長，對部分真菌和細菌也有一定的效果[13]，尤其是對纖毛蟲類寄生蟲病有明顯的治療效果。本研究中，硫酸銅對梭鱸的48hLC50為2.35mg/L，高于銀鱸Bidyanus bidyanus魚種（0.76 mg/L）[14]，低于加州鱸Micropterus salmoides魚苗（8.00mg/L）[15]、澳洲寶石鱸 Scortum barcoo稚魚（9.10mg/L）[16]，根據(jù)農(nóng)藥對魚類急性毒性等級評價標準，屬中毒藥物[17]（1.0～10.0），表明梭鱸對硫酸銅的敏感性較弱。硫酸銅的安全濃度為0.59mg/L，接近漁業(yè)生產(chǎn)中的常用量0.4～0.7mg/L。本研究中，在濃度為0.7mg/L時，梭鱸96h的死亡率為0，因此認為可以全池潑灑0.4～0.7mg/L硫酸銅治療梭鱸的寄生蟲病，或可用于調(diào)節(jié)養(yǎng)殖池塘的藻相和菌相。由于硫酸銅會損傷魚類鰓、內(nèi)臟器官，富集在魚體內(nèi)[18]，所以應(yīng)盡量使用較低的潑灑濃度治療車輪蟲病。本研究中硫酸銅對梭鱸幼魚的安全濃度為0.59mg/L，在實際使用量超過該濃度時，應(yīng)密切觀察施藥池塘，出現(xiàn)異常情況及時采取補救措施。

硫酸銅濃度 0.4mg/L 20h、0.7mg/L 8h，高于0.7mg/L時4h，即可有效滅殺魚體表寄生的車輪蟲，殺蟲率可達100%。硫酸銅滅殺車輪蟲所需的時間隨其濃度增加而縮短。急性毒性試驗結(jié)果表明，硫酸銅濃度為1～2mg/L時，試驗魚初期活動正常，與對照組相似，5h后出現(xiàn)中毒癥狀，所以在養(yǎng)殖生產(chǎn)中也可以采用高濃度、短時間的藥浴方式治療車輪蟲病。參考其他魚類使用硫酸銅藥浴的經(jīng)驗用量，可以使用1.5mg/L硫酸銅浸泡2h，間隔1d以同劑量再用一次的藥浴方式。

藥物的毒性效應(yīng)與試驗魚的生長階段、生理狀態(tài)和所處水體水質(zhì)理化指標等因素密切相關(guān)[19]。本研究中，硫酸銅對梭鱸的24hLC50和48hLC50均低于陳羅明等[1]、韓小麗等[2]的研究結(jié)果，其原因可能是本試驗使用的試驗魚為患病魚，水溫高于前兩者。本試驗中，患病魚已有行為異常（攝食減弱）和魚體損傷（鰓絲腫脹充血、體表黏液增多），抗逆性必然減弱，導(dǎo)致對硫酸銅的敏感度增強。同時有研究表明，硫酸銅對魚類的毒性隨著溫度的升高而上升[20,21]。本試驗水溫高于前兩者研究中的水溫，勢必會造成硫酸銅毒性的增加，導(dǎo)致24hLC50和48hLC50降低。車輪蟲病為魚類養(yǎng)殖常見的寄生蟲病，一年四季均可發(fā)生，發(fā)病高峰水溫20～28℃，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，應(yīng)根據(jù)水溫、水質(zhì)和養(yǎng)殖生物的生理狀態(tài)，適當選擇硫酸銅的使用時間和使用量。

綜上所述，梭鱸幼魚對硫酸銅的敏感性較弱，可以使用硫酸銅防治車輪蟲病。流水養(yǎng)殖中，在靜水充氣的條件下，0.4mg/L消殺20h，或0.7mg/L消殺8h，即可達到治療的效果，也可以采用1.5mg/L硫酸銅浸泡2h，間隔1d以同劑量再用一次的藥浴方式；池塘養(yǎng)殖中，若具備增氧設(shè)施，可全池潑灑0.4～0.7mg/L濃度進行治療，如未達到理想效果，可在7d后再施藥一次。但在實際應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)患病魚的發(fā)育階段、魚體狀態(tài)和水質(zhì)條件，先進行預(yù)試驗，確定適宜的潑灑濃度，同時準備好補救措施，以達到安全生產(chǎn)和有效治療的目的。

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