魚用疫苗口服免疫途徑的研究概況

隨著疫苗產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，魚類免疫逐漸產(chǎn)生了注射、浸泡和口服3種途徑。本文從免疫機(jī)理和提高免疫效果等方面對(duì)注射免疫途徑進(jìn)行綜述，同時(shí)對(duì)水產(chǎn)疫苗的研究前景進(jìn)行展望。

1.口服疫苗

目前，口服疫苗的使用方法分為兩種：涂在飼料表面和直接混入飼料，疫苗通過進(jìn)入魚體內(nèi)達(dá)到免疫保護(hù)的效果。其優(yōu)勢(shì)較為明顯，不僅使用方便，對(duì)魚體影響小，而且不受魚體大小、時(shí)間、地點(diǎn)等影響，降低了勞動(dòng)強(qiáng)度。另據(jù)相關(guān)報(bào)道，口服免疫能有效提升魚體免疫力，癤瘡病疫苗、弧菌病疫苗、類結(jié)節(jié)癥疫苗等能得到預(yù)期效果，達(dá)到免疫水平。然而口服免疫產(chǎn)生的問題還不容忽視，主要表現(xiàn)在免疫效果不夠好，尤其是與浸泡免疫相比，會(huì)產(chǎn)生攝食量大的魚浪費(fèi)疫苗，攝食量不足的魚無法得到足量的疫苗(Quentel C等，1997)。Johnson等(1981)用滅活的弧菌疫苗通過肛門插入法免疫紅大麻哈魚，獲得了良好免疫效果。該發(fā)現(xiàn)為口服疫苗提供了不同的接種路徑。為了讓其在后腸發(fā)揮充分效果，專家們采取各種技術(shù)和方法，來減少消化酶和胃酸對(duì)疫苗的破壞，提升其作用時(shí)間，充分引起魚體的免疫應(yīng)答，達(dá)到更好的保護(hù)效果。

2.口服免疫的機(jī)理

魚類雖然是低等脊椎動(dòng)物，但它仍具有較為完善的免疫系統(tǒng)，在魚的腸道中，尤其是后腸中分布著大量的淋巴細(xì)胞(Dal mo R A等，1997)。Quent el等(1997)研究表明，在魚的整個(gè)腸道中都存在淋巴細(xì)胞，主要包括巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和漿細(xì)胞3種細(xì)胞，而且真骨魚類的頭、腎、脾、胸腺、消化道的淋巴組織、血液和淋巴是產(chǎn)生免疫應(yīng)答的主要器官與組織(Neal e N T，1971；Ell is A E，1977；Rij ker s G T等，1980)。Abel l i等(1997)通過單克隆抗體技術(shù)，應(yīng)用胸腺細(xì)胞在舌齒鱸的腸道中檢測(cè)到了淋巴細(xì)胞的存在。但是抗原具體是在魚體消化道的哪個(gè)部位被吸收，則眾說紛紜。Companj en(2005)證實(shí)，魚類抗原的攝入與加工的功能區(qū)主要在后腸，進(jìn)入后腸的抗原被巨噬細(xì)胞攝取，誘導(dǎo)魚體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。同時(shí)Gr ove等(2006)也表明了大西洋比目魚的后腸、鰓等組織含有IgM細(xì)胞。而且，也有研究表明，越靠近肛門的地方，其淋巴細(xì)胞的數(shù)量越多(Abel l i L等，1997)。Daml o等(1997)卻提出了相反的觀點(diǎn)，認(rèn)為抗原是在前腸被吸收的。盡管如此，目前普遍認(rèn)為后腸是魚類攝取抗原的主要部位(Pr ess C M等，1999)。

魚類的腸道黏膜層可分為上皮層和固有層兩層(Pr ess C M等，1999；Four nier-bet z V等，2000)。而且粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等白細(xì)胞主要存在于腸道黏膜層的固有層中(Mc Mil l an D N等，1997)。Rombout等(1993)通過免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在魚的后腸上皮層中存在大量的Ig-細(xì)胞，而在固有層中，則主要分布的是Ig+細(xì)胞。同時(shí)，也有研究表明，在大菱鲆的腸上皮中主要分布的是Ig-細(xì)胞，而固有層卻主要含有大量的Ig+細(xì)胞(Four nier-bet z V等，2000)，也有報(bào)道稱在中腸的上皮層分布有Ig+細(xì)胞(Scapigl iat i G等，1996)。為了研究魚類是否存在T、B淋巴細(xì)胞，Sizemor e等(1984)從外周血細(xì)胞中分離出能與LPS作用的SmIg+細(xì)胞，當(dāng)有輔佐細(xì)胞存在時(shí)，則SmIg-可與ConA作用。也有研究者用Per ol l不連續(xù)梯度的方法對(duì)褐鱒外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行分離發(fā)現(xiàn)，分布于低密度、表面光滑并且對(duì)PHA刺激敏感的淋巴細(xì)胞可能相當(dāng)于人類的T細(xì)胞，而相反，分布于高密度、大多表面被毛的淋巴細(xì)胞可能相當(dāng)于人類的B細(xì)胞。隨著各種分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，Secombes等(1983)、Xia等(1993)、Par t ul a等(1999)、Scapigl iat i等(2000)研究均表明魚類存在相當(dāng)于哺乳動(dòng)物的T、B細(xì)胞的兩類淋巴細(xì)胞。T細(xì)胞分布在腸黏膜的上皮層中，而B細(xì)胞則分布在腸黏膜的固有層中來參與黏膜免疫應(yīng)答反應(yīng)。

魚類黏膜免疫反應(yīng)是否能夠獨(dú)立地完成局部特異性的免疫應(yīng)答，針對(duì)這一問題，有著不同的說法。Quent el(1997)認(rèn)為魚類口服免疫既能產(chǎn)生局部的黏膜免疫，同時(shí)也可引起全身的免疫反應(yīng)。黏膜免疫在魚類的疾病防御中起著舉足輕重的作用。羅曉春等(2005)對(duì)斜帶石斑魚黏膜組織結(jié)構(gòu)(皮膚、鰓、眼角膜、前腸及后腸)進(jìn)行研究表明，杯狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫相關(guān)細(xì)胞存在于黏膜組織中，具有黏膜免疫獨(dú)立應(yīng)答基礎(chǔ)。Pr ess等(1999)均認(rèn)為在真骨魚類腸道黏膜淋巴組織中有不同種免疫細(xì)胞，保障魚體各個(gè)部分能獨(dú)立完成免疫反應(yīng)。Maki等(2003)也發(fā)現(xiàn)斑點(diǎn)叉尾鮰血清和黏液分泌物中抗體的產(chǎn)生是不同步的。雖然口服免疫既能引起黏膜免疫反應(yīng)，也能引起系統(tǒng)免疫反應(yīng)。但是，一般認(rèn)為口服免疫以黏膜免疫為主。

雖在魚類的免疫學(xué)方面做了大量的工作，但是目前，魚類口服免疫轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制卻不是十分清楚。一些研究表明蛋白或者抗原由后腸上皮細(xì)胞以吞噬的方式吸收。Str and等(1997)也認(rèn)為后腸上皮細(xì)胞以內(nèi)吞方式攝取大分子抗原，小分子可溶性抗原物質(zhì)可經(jīng)腸黏膜細(xì)胞間隙滲入血液中，而大分子顆粒抗原則先由巨噬細(xì)胞吞噬到細(xì)胞中經(jīng)過加工以后，轉(zhuǎn)運(yùn)到相關(guān)的淋巴組織或細(xì)胞中，然后運(yùn)輸?shù)窖h(huán)系統(tǒng)，最后經(jīng)血液或淋巴液轉(zhuǎn)運(yùn)至淋巴結(jié)產(chǎn)生相關(guān)的免疫應(yīng)答反應(yīng)(Schep L J等，1999)。另據(jù)相關(guān)研究，許多真骨魚類后腸的巨噬細(xì)胞也有胞飲作用。

     (西南漁業(yè)網(wǎng)摘選文章)