水產(chǎn)品中藥物殘留及檢測(cè)方法

水產(chǎn)品中藥物殘留及檢測(cè)方法

張桂云，楊偉強(qiáng)

（1.漳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品深加工及安全福建省高等學(xué)校應(yīng)用技術(shù)工程中心，福建 漳州 363000；2.閩南師范大學(xué)化學(xué)化工與環(huán)境學(xué)院，福建 漳州 363000）

我國(guó)是漁業(yè)養(yǎng)殖生產(chǎn)大國(guó)，水產(chǎn)品資源豐富、消費(fèi)市場(chǎng)巨大。然而在養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中，為了防治各類病害、獲取更高的經(jīng)濟(jì)收益，亂用、濫用各種藥物的現(xiàn)象普遍存在。人們?nèi)糸L(zhǎng)期食用這些藥物殘留超標(biāo)的水產(chǎn)品可造成藥物蓄積，導(dǎo)致機(jī)體中毒、代謝紊亂、過(guò)敏和變態(tài)反應(yīng)、細(xì)菌耐藥性等不良后果，嚴(yán)重影響消費(fèi)者的身體健康[1-2]。為此，國(guó)家制定了相關(guān)的法律法規(guī)，對(duì)水產(chǎn)品中的藥物殘留限量做出了嚴(yán)格的規(guī)定[3]。為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)水產(chǎn)品中藥物殘留的危害、提高防控藥物殘留風(fēng)險(xiǎn)的能力，該文總結(jié)介紹了幾種重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的藥物殘留及其檢測(cè)方法，并探討水產(chǎn)品中藥物殘留高效、準(zhǔn)確、靈敏檢測(cè)的技術(shù)方法。

1 水產(chǎn)品中的藥物殘留及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

水產(chǎn)品的養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中使用的藥物種類繁多，一些藥物對(duì)人體健康具有明確的毒害作用，因此也被國(guó)家列為重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的對(duì)象。

1.1 孔雀石綠

孔雀石綠（Malachite green,MG）屬于三苯甲烷類染料，具有較強(qiáng)的抗菌效力。曾作為驅(qū)蟲(chóng)劑和殺菌劑，廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，以防治魚(yú)類的水霉病、鰓霉病、以及小瓜蟲(chóng)病等。其在生物體內(nèi)被代謝成隱性孔雀石綠（Leucomalachite green,LMG），兩者在生物體內(nèi)殘留的時(shí)間長(zhǎng)、具有顯著的積蓄現(xiàn)象[4]。由于該類染料具有潛在的致畸、致癌、致突變作用，許多國(guó)家都已明令禁止其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的使用。但由于這類藥用染料的抗菌效果好、價(jià)格低廉、無(wú)有效替代藥等原因，其違規(guī)使用的現(xiàn)象仍時(shí)有發(fā)現(xiàn)。目前，孔雀石綠及其代謝產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法主要為高效液相色譜法（HPLC）和HPLC-MS/MS、GB/T 19857-2005高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[5]。兩者的結(jié)果差異性不大，但HPLC-MS/MS方法的樣品前處理操作更為簡(jiǎn)單、定性方式更為準(zhǔn)確。

1.2 氯霉素

氯霉素（Chloramphenicol,CAP）作為一種抗生素，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中能有效防治爛鰓、赤皮病等，具有良好的廣譜抗菌效果。抑菌效果優(yōu)于其他替代藥物。但氯霉素的毒性較大，可造成人體過(guò)敏反應(yīng)，抑制骨髓造血機(jī)能、引發(fā)不可逆的再生性障礙貧血等疾病[6]。因此，國(guó)家禁止氯霉素在食用性動(dòng)物中使用，并且規(guī)定不得檢出。但由于氯霉素的抑菌效果優(yōu)于其他替代藥物，在一些貝類水產(chǎn)中仍時(shí)有檢出，因此氯霉素仍是水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管的重點(diǎn)對(duì)象。水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的測(cè)定方法較多，其中酶標(biāo)法可用于氯霉素的快速篩查測(cè)定（農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-26-2008），HPLC-MS/MS和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法GC-MS和可用于GB/T 22338-2008氯霉素的準(zhǔn)確測(cè)定[7]。

1.3 磺胺類

磺胺類藥物（Sulfonamides,SAs）是一類具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的藥物，主要用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染引發(fā)的疾病。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中主要用于治療魚(yú)、蝦、蟹、鱉等動(dòng)物的細(xì)菌性疾病，防治鯉的赤鰭病，香魚(yú)、虹鱒等的弧菌病等[8]?；前奉愃幬镌谏矬w內(nèi)的作用時(shí)間和代謝時(shí)間較長(zhǎng)，長(zhǎng)期食用含磺胺藥物殘留的水產(chǎn)品易導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，對(duì)人體健康造成危害。我國(guó)規(guī)定動(dòng)物源食品中磺胺類藥物的最高殘留限量值為100 μg/kg（農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告）[9]。HPLC和HPLC-MS/MS是檢測(cè)磺胺類藥物殘留的主要方法，但由于磺胺類藥物的種類較多且結(jié)構(gòu)相似，因此HPLC-MS/MS可實(shí)現(xiàn)多種磺胺類藥物的同時(shí)快速檢測(cè)（GB/T 21316-2007）[10]。

1.4 喹諾酮類

喹諾酮類藥物（Quinolones,QNs）是人工合成的含4-喹諾酮基本結(jié)構(gòu)的抗菌藥，如環(huán)丙沙星、恩諾沙星、諾氟沙星等。其具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)的特點(diǎn)，在水產(chǎn)等養(yǎng)殖中廣泛用于魚(yú)、蝦、蟹等的疾病防治。人長(zhǎng)期食用含喹諾酮藥物殘留的水產(chǎn)品，易造成人體疾病對(duì)該藥物的嚴(yán)重耐藥性，影響人體疾病的治療。因此，我國(guó)規(guī)定動(dòng)物源食品中磺胺類藥物的最高殘留限量值為10～500 μg/kg（農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告）[9]。喹諾酮類藥物的種類也較多，因此適用HPLC-MS/MS方法進(jìn)行檢測(cè)，如GB/T 20366-2006[11]。

1.5 硝基呋喃類代謝物

硝基呋喃類藥物是一類化學(xué)合成的廣譜抗菌藥物，曾廣泛用于水產(chǎn)等動(dòng)物傳染性疾病的預(yù)防與治療。其原藥及代謝產(chǎn)物均具有一定的毒性，有致畸、致癌和致突變的危險(xiǎn)，因此被禁止使用[12]。但由于硝基呋喃類藥物價(jià)格低廉、治療效果顯著，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中違禁使用的現(xiàn)象屢見(jiàn)不鮮。硝基呋喃類藥物在生物體內(nèi)代謝迅速，難以原藥的形式檢出；因此主要是對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定，包括呋喃它酮的代謝物5-嗎啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ）、呋喃西林的代謝物氨基脲（SEM）、呋喃妥因的代謝物1-氨基-2-內(nèi)酰脲（AHD）和呋喃唑酮的代謝物3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）。這些代謝物通常需要以2-硝基苯甲醛進(jìn)行衍生化，用HPLCMS/MS方法進(jìn)行測(cè)定（GB/T 21311-2007[13]、GB/T 20752-2006[14]）。

2 水產(chǎn)品中多藥物殘留檢測(cè)方法的研究

按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢測(cè)方法，水產(chǎn)品中藥物殘留的檢測(cè)以分類檢測(cè)為主。不同種類的藥物殘留需要采用不同的前處理方法，過(guò)程繁瑣且不盡相同。各種檢測(cè)方法的適用性、靈敏度存在微小的差異性，易于混淆[8]。為簡(jiǎn)化分析步驟，切實(shí)提高檢驗(yàn)的效率，同時(shí)保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，有必要對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)方法進(jìn)行歸納總結(jié)并建立適用的多藥物殘留檢測(cè)方法。

2.1 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法綜合了高效液相色譜良好的分離能力以及質(zhì)譜的高通量、高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)，非常適用于水產(chǎn)品中多藥物殘留的檢測(cè)[15-16]。由前面的論述也可以看出，已有多種藥物殘留采用HPLC-MS/MS法進(jìn)行分析，特別是對(duì)于種類多（如磺胺類和喹諾酮類）、檢出限低（如氯霉素、硝基呋喃）的藥物殘留，HPLC-MS/MS法明顯優(yōu)于HPLC法。此外，水產(chǎn)品中的藥物殘留均為水溶性、不易氣化，因此其前端的色譜分離過(guò)程采用液相色譜為主。通過(guò)適當(dāng)?shù)奶荻认疵摮绦?，能?shí)現(xiàn)多種藥物的簡(jiǎn)單分離；即使不能實(shí)現(xiàn)基線分離，也可通過(guò)多通道的質(zhì)譜檢測(cè)器進(jìn)行分析，無(wú)礙檢測(cè)結(jié)果。農(nóng)業(yè)部1077號(hào)公告-1-2008規(guī)定了水產(chǎn)品中17種磺胺類和15種喹諾酮類藥物殘留量檢測(cè)的HPLC-MS/MS方法[17]，為多藥物殘留的同時(shí)檢測(cè)提供了一個(gè)很好的范例。然而由于各種藥物的理化性質(zhì)具有差異性，其樣品前處理方法不盡相同，要充分發(fā)揮HPLCMS/MS的優(yōu)勢(shì)須要建立相適應(yīng)的前處理方法。

2.2 分散固相萃取技術(shù)

分散固相萃取（Dispersive solid-phase extraction，DSPE）通過(guò)在試樣提取液中直接加入N-丙基乙二胺（Primarysecondaryamine，PSA）、石墨化炭黑（Graphitized carbon black，GCB）、C18、中性氧化鋁等固體吸附劑，去除脂肪、色素及碳水化合物等大部分非目標(biāo)化合物來(lái)凈化樣液[18-19]。具有快速、簡(jiǎn)單、廉價(jià)、有效、穩(wěn)定和安全的特點(diǎn)，又稱為QuEChERS（Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safty）方法。將 DSPE方法與HPLC-MS/MS相結(jié)合，能夠解決樣品分類前處理的問(wèn)題，同時(shí)彌補(bǔ)樣品凈化不完全的不足，是多目標(biāo)物檢測(cè)的有效解決途徑。羅輝泰等[20]用分散固相萃取法處理魚(yú)肉樣品，建立了一次提取、同時(shí)測(cè)定激素及氯霉素類等30種藥物殘留的方法。卜明楠等[21]以酸化乙腈提取、C18為凈化劑，并結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建立了蝦肉中72種藥物殘留的檢測(cè)方法。由此可見(jiàn)，采用分散固相萃取技術(shù)作為樣品前處理方法是建立多藥物殘留檢測(cè)的基本辦法，但應(yīng)根據(jù)各待測(cè)樣品及目標(biāo)物的特點(diǎn)選用適當(dāng)?shù)膬艋瘎?yōu)化用量。例如為檢測(cè)含四環(huán)素類的樣品，應(yīng)在提取液中加入適量的乙二胺四乙酸（EDTA）以降低四環(huán)素類藥物同金屬離子的配位作用。

3 總結(jié)和展望

水產(chǎn)品養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中使用違禁藥物的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，濫用藥物、殘留量居高不下的問(wèn)題屢見(jiàn)不鮮，對(duì)人們的身體健康產(chǎn)生了不良的影響。盡管國(guó)家相關(guān)法律法規(guī)和檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各類藥物殘留限量和檢測(cè)方法做出了明確的規(guī)定，但這些標(biāo)準(zhǔn)在執(zhí)行的過(guò)程中仍遇到不少問(wèn)題。尤其是各藥物殘留分類檢測(cè)的方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力、成本高昂，給日常的監(jiān)管帶來(lái)繁重的負(fù)擔(dān)。隨著檢測(cè)技術(shù)的快速發(fā)展，以分散固相萃取技術(shù)作為樣品前處理方法，結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的高通量、高選擇性、高靈敏度分析能力，是建立水產(chǎn)品中多藥物殘留同時(shí)檢測(cè)的有效分析方法。