斑馬魚：保健食品功能評(píng)價(jià)新星

近來(lái)，國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局就《保健食品人群食用試驗(yàn)倫理審查工作指導(dǎo)原則（2020年版）征求意見稿》、《保健食品功能評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則（2020年版）征求意見稿》等四個(gè)文件公開征求意見，其中《保健食品功能評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則（2020年版）征求意見稿》就保健食品功能評(píng)價(jià)的主題內(nèi)容和適用范圍，保健食品功能評(píng)價(jià)的基本要求，保健食品動(dòng)物試驗(yàn)的基本要求，保健食品人體試食試驗(yàn)的基本要求，和評(píng)價(jià)保健食品功能時(shí)需要考慮的因素等五個(gè)方面公開征求意見。其中，關(guān)于保健食品動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本要求如下：

1 對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、飼料、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的要求

1.1 根據(jù)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的具體要求，合理選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。常用大鼠和小鼠，品系不限，應(yīng)使用適用于相應(yīng)功能評(píng)價(jià)的動(dòng)物品系，推薦使用近交系動(dòng)物。

1.2 動(dòng)物的性別、周齡依實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量要求為小鼠每組10－15只（單一性別），大鼠每組8－12只（單一性別）。

1.3 動(dòng)物及其實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合國(guó)家對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其實(shí)驗(yàn)環(huán)境的有關(guān)規(guī)定。

1.4 動(dòng)物飼料應(yīng)提供飼料生產(chǎn)商等相關(guān)資料。如為定制飼料，應(yīng)提供基礎(chǔ)飼料配方、配制方法，并提供動(dòng)物飼料檢測(cè)報(bào)告。

2 對(duì)給予受試樣品劑量的要求

各種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)至少應(yīng)設(shè)3個(gè)劑量組，劑量選擇應(yīng)合理，盡可能找出最低有效劑量。在3個(gè)劑量組中，其中一個(gè)劑量應(yīng)相當(dāng)于人體推薦攝入量（折算為每公斤體重的劑量）的5倍（大鼠）或10倍（小鼠），且最高劑量不得超過(guò)人體推薦攝入量的30倍（特殊情況除外），受試樣品的功能實(shí)驗(yàn)劑量必須在毒理學(xué)評(píng)價(jià)確定的安全劑量范圍之內(nèi)。

3 對(duì)受試樣品給予方式的要求

必須經(jīng)口給予受試樣品，首選灌胃。灌胃給予受試物時(shí)，應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和受試物的理化性質(zhì)選擇適合的溶媒（溶劑、助懸劑或乳化劑），將受試物溶解或懸浮于溶媒中，一般可選用蒸餾水、純凈水、食用植物油、食用淀粉、明膠、羧甲基纖維素、蔗糖脂肪酸酯等，如使用其他溶媒應(yīng)說(shuō)明理由。所選用的溶媒本身應(yīng)不產(chǎn)生毒性作用，與受試物各成分之間不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，且保持其穩(wěn)定性，無(wú)特殊刺激性味道或氣味。如無(wú)法灌胃則可加入飲水或摻入飼料中給予，并計(jì)算受試樣品的給予量。

應(yīng)描述受試物配制方法、給予方式和時(shí)間。

在這里，我向您介紹一種新的脊椎類模式動(dòng)物明星：斑馬魚。

斑馬魚，一種身材玲瓏?yán)w細(xì)的熱帶淡水魚，因其體側(cè)長(zhǎng)有像斑馬一樣縱向的暗藍(lán)色與銀色相間的條紋而得名。它長(zhǎng)3-4cm，紡錘形，頭小而尖，短吻，原產(chǎn)于喜馬拉雅山南麓的印度、巴基斯坦、孟加拉和尼泊爾等南亞國(guó)家。它是環(huán)境監(jiān)測(cè)的哨兵，是生物發(fā)育學(xué)家的助手，是臨床醫(yī)學(xué)研究的新秀。 （圖一：斑馬魚照片）

圖一：斑馬魚照片

斑馬魚作為一種新型的模式動(dòng)物，其具有其他動(dòng)物不可比擬的優(yōu)勢(shì)，它被美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院列為繼小鼠和大鼠之后的第三大模式生物，并且受到歐美食品藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可，通過(guò)GLP認(rèn)證。OECD認(rèn)定斑馬魚胚胎毒性測(cè)試為評(píng)價(jià)化學(xué)品毒性最敏感的體內(nèi)方法。至今OECD和ISO共發(fā)布了10項(xiàng)魚類（斑馬魚）化學(xué)品毒性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。特別值得一提的是，根據(jù)歐盟動(dòng)物保護(hù)法，出生5天以內(nèi)的斑馬魚胚胎和幼魚不屬于動(dòng)物，可用于替代哺乳動(dòng)物測(cè)試，符合3R(替代、減少、優(yōu)化)原則。

由于斑馬魚飼養(yǎng)成本低、產(chǎn)卵量大，加之體外受精、發(fā)育周期短、透明易觀察等優(yōu)點(diǎn)，已在基礎(chǔ)研究、藥物開發(fā)、食品安全、環(huán)境保護(hù)等眾多領(lǐng)域有了廣泛應(yīng)用。近年來(lái)，斑馬魚作為國(guó)際公認(rèn)的，適于功效性評(píng)價(jià)的新型脊椎類模型動(dòng)物，可為各種食品評(píng)測(cè)安全性和其他功效屬性。

斑馬魚生理、發(fā)育和代謝與哺乳類動(dòng)物高度相似，基因與人類基因的同源性達(dá)87%，能可靠模擬和預(yù)測(cè)人類生理、病理過(guò)程（圖二：斑馬魚基因與人類基因的同源性87%）。而且，斑馬魚是公認(rèn)的生態(tài)毒理學(xué)模型。在上個(gè)世紀(jì)70年代，國(guó)外已經(jīng)開始應(yīng)用斑馬魚進(jìn)行重金屬和有機(jī)物的急性毒性研究。同時(shí)，除了毒性，斑馬魚還被用來(lái)評(píng)估食物成分的生物活性等。我們看到，越來(lái)越多的生物活性成分在食物中被日益發(fā)現(xiàn)，通過(guò)一些活性成分的配比形成的特殊食品已漸漸走入人們的生活。與此相關(guān)的，食品研究領(lǐng)域存在著許多難題，例如：如何區(qū)分活性化合物，如何推斷活性化合物是否具有生物學(xué)特性，并且其安全性是否可靠等。所以研究確認(rèn)食品的有效活性成分，并對(duì)其進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，是目前食品研究領(lǐng)域的一個(gè)重要內(nèi)容。包括對(duì)食品、食品提取物和從食品中分離出來(lái)的分子進(jìn)行功能測(cè)試等。

圖二：斑馬魚基因與人類基因的同源性達(dá)87%

斑馬魚檢測(cè)技術(shù)是FDA、EPA、EURL ECVAM等國(guó)際組織認(rèn)可的檢測(cè)技術(shù)，并在《Nature》等學(xué)術(shù)期刊發(fā)表。很多國(guó)外公司如默克、諾華、強(qiáng)生等均擁有自己的斑馬魚實(shí)驗(yàn)室，用于他們的產(chǎn)品研發(fā)。目前，在中國(guó)，斑馬魚技術(shù)連續(xù)獲得中國(guó)科技部“重大新藥創(chuàng)制”專項(xiàng)資助，已頒布斑馬魚實(shí)驗(yàn)相關(guān)的13個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，并且在食品安全性評(píng)價(jià)、活性成分篩選及作用機(jī)制研究等方面被廣泛應(yīng)用，如代謝異常、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)保護(hù)等相關(guān)的營(yíng)養(yǎng)保健食品的研發(fā)與檢測(cè)上發(fā)揮著有效作用。（表一：可以用斑馬魚評(píng)價(jià)的保健食品功能）

表一：可以用斑馬魚評(píng)價(jià)的保健食品功能

隨著消費(fèi)者消費(fèi)水平的不斷升級(jí)，對(duì)于高品質(zhì)的、特殊食品的需求也在日益攀升，有效，便捷、又經(jīng)濟(jì)的斑馬魚將會(huì)在特殊食品的功效研究中持續(xù)發(fā)揮積極的作用，同時(shí)，我們期待著越來(lái)越多的斑馬魚的用途被人類所掌握，為促進(jìn)人類的健康，增加新的、有效的驗(yàn)證手段。