論文：飼料中添加乳酸菌對南美白對蝦蝦苗生長的影響

     飼料中添加乳酸菌對南美白對蝦蝦苗生長的影響

曾思源，饒從穩(wěn)，2，韓坤煌*，陳欣欣，詹巧玲，李菲艷，李華民

（1.寧德師范學院生命科學學院/閩東水產(chǎn)品精深加工福建省高校工程研究中心，福建 寧德 352100；2.福建農(nóng)林大學食品科學學院，福建 福州 350000）

南美白對蝦（Penaeus vannamei），學名凡納濱對蝦，又名白肢蝦、白對蝦，為廣溫、廣鹽性熱帶蝦類，原產(chǎn)于太平洋西海岸至墨西哥灣沿岸,是世界三大經(jīng)濟蝦類之一。南美白對蝦也是我國主要的蝦類養(yǎng)殖對象，是一種經(jīng)濟效益高的養(yǎng)殖品種，其肉質鮮美，含肉率高，營養(yǎng)豐富，深受消費者的喜愛。

隨著南美白對蝦養(yǎng)殖規(guī)模日漸擴大，病害、食品安全等諸多問題也開始顯現(xiàn)。一方面由于養(yǎng)殖過程中過多使用藥物，造成蝦代謝系統(tǒng)紊亂，抵抗力下降；另一方面是細菌、病毒和寄生蟲引起的各種病害增多。近年來，綠色、環(huán)保藥物、益生菌等在水產(chǎn)養(yǎng)殖中大量應用，效果良好。

乳酸菌是一類能利用可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生乳酸的異氧厭氧型細菌，具有提高養(yǎng)殖對象的攝食量、促進其腸道消化、增強機體抗病力、強化肝臟功能和調(diào)節(jié)水質等優(yōu)點，在南美白對蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)中被廣泛應用。目前，在基礎餌料中添加乳酸菌對南美白對蝦生長影響的研究報道不多，現(xiàn)通過添加不同質量分數(shù)的乳酸菌混合餌料，喂養(yǎng)南美白對蝦蝦苗，分析其對南美白對蝦蝦苗生長性能的影響，以期為生產(chǎn)實踐中合理使用乳酸菌喂養(yǎng)南美白對蝦提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗時間

2021年3月24日—4月23日。

1.2 試驗地點

試驗地點位于福州市長樂友豐養(yǎng)殖有限公司蝦苗場，共有12口高位池，面積均約300 m，高均約2 m，前期只使用4口高位池。投苗前，用火槍噴射火焰灼燒4口高位池地面與墻壁，進行高溫消毒。對火焰噴射不到的地方，使用氫氧化鈉溶液消毒。投苗前7 d內(nèi)，選擇陰天或雨天，將被火焰灼燒過的4口高位池洗凈，每667 m按1 m水深使用漂白粉50 kg，嚴格消毒，其他8口高位池亦要在分苗前完成相同的消毒程序。

1.3 試驗材料

1.3.1 試驗蝦

試驗蝦苗購自廈門喜大生物科技有限公司，初始平均體長（0.33±0.06）cm，平均體質量為（0.049±0.014）g，投放密度約為666尾/m。將12口高位池分成4組，分別為A、B、C、D組，A組為對照組，每組3口高位池。蝦苗養(yǎng)殖的第20天開始分苗，將蝦苗平均分至12口高位池進行養(yǎng)殖，以保障成活率以及平行樣品數(shù)據(jù)的準確性。用分別添加質量分數(shù)為0%，0.75%，1.00%和1.25%乳酸菌的混合飼料進行飼養(yǎng)。

1.3.2 試劑和設備

生理鹽水，亞硝酸鹽氮，氨氮試劑盒；溶氧儀，pH計，電子天平，高精度數(shù)顯電子鹽度計，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，試管，100 mL燒杯，100 mL容量瓶等。

1.4 試驗方法

1.4.1 乳酸菌用法

乳酸菌來自廈門優(yōu)必和生物科技有限公司，按質量分數(shù)1.00%的量，以接種擴培的方式接入菌種，依次加入3%的糖蜜和96%的水充分攪拌直至完全融解，密閉發(fā)酵3 d左右，直至產(chǎn)生芳香氣味。使用pH試紙測得pH值為3~4即可，然后分別按照質量分數(shù)0%，0.75%，1.00%和1.25%的比例與對蝦飼料混合，待用。

1.4.2 水質指標測定方法

每日測量高位池水溫3次；使用高精度數(shù)顯電子鹽度計，定期監(jiān)測鹽度；使用廣泛pH試紙檢測pH值；用水質檢測試劑盒定期測定亞硝酸鹽氮、氨氮含量，溶氧儀檢測水體中溶解氧（DO）含量。

1.4.3 水樣采集時間

水質指標測定時間為每隔5 d于10：30取樣測定，12口池中每口取樣至少3次，取其平均值用于統(tǒng)計。每天06：30、12：30、18：30各測量水溫1次，取平均值進行統(tǒng)計。

1.4.4 肝臟壓片觀察

試驗過程中，發(fā)現(xiàn)A組中的一口高位池蝦苗肝萎縮比較嚴重。隨機抽取5尾肝萎縮比較嚴重的幼蝦以及其他組正常健康的幼蝦，用解剖器取出肝臟，放入裝有生理鹽水的載玻片，蓋上蓋玻片進行壓片處理，顯微鏡鏡檢觀察。

1.4.5 不同組別的生物學特征測量

養(yǎng)殖期結束后，取A、B、C、D 4組蝦苗，每口池取30尾，測定蝦苗體長、體質量，計算質量增加率和特定生長率。采用SPSS 15.0單因素方差分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，結果用（平均值±標準差）表示。

質量增加率（%）=100%×（末均質量-初均質量）/初均質量；

體質量特定生長率（%·d）=100%×（ln末均質量-ln初均質量）/飼養(yǎng)天數(shù)；

體長增長率（%）=100%×（末均體長-初均體長）/初體長；

體長特定生長率（%·d）=100%×（ln末均體長-ln初均體長）/飼養(yǎng)天數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件中ANOVA單因素方差分析，進行各組間數(shù)據(jù)兩兩比較，對其差異進行分析。

2 結果與分析

2.1 水質理化因子測定

4組高位池的水溫見表1。由表1可見，4組高位池的水溫變化為21.3～26.8℃，各組間水溫差異較小。4組高位池的鹽度為0.420%～0.470%，說明水體的鹽度比較穩(wěn)定，滿足對蝦生長需求（表2）。DO是水產(chǎn)養(yǎng)殖動物重要的水質影響因子，4組高位池的DO為6.12～7.60 mg/L，滿足對蝦生長需求（表3）。4組高位池在加入乳酸菌之后，養(yǎng)殖水體pH值變化范圍不斷變小，D組的數(shù)值最穩(wěn)定，為7.55～7.75（表4）。乳酸菌對降解水體中的亞硝酸鹽氮具有明顯效果，在4月3日開始，C與A組相比，差異顯著（P＜0.05），D組A組相比，差異極顯著（P<0.01）；在4月18日之后，C組和D組的測量值已趨于穩(wěn)定（表5）。

表1 4組高位池的水溫 ℃

表2 4組高位池的鹽度 %

表3 4組高位池的DO mg/L

表4 試驗期間四組高位池的pH值

表5 4組高位池的亞硝酸鹽氮① mg/L

4組高位池中氨氮一直處于較低水平，在3月24日—4月13日，氨氮數(shù)值有所增加，C組和D組的增加幅度明顯較??；A組在4月8日達到峰值，B組在4月13日達到峰值，之后開始下降，2組間的數(shù)值比較接近。在4月18日時C組值已明顯下降，D組值為0，到4月23日時C和D組的檢測數(shù)據(jù)均為0（表6）。

表6 4組高位池的氨氮 mg/L

2.2 不同試驗組生長速率統(tǒng)計

乳酸菌對南美白對蝦生長性能的影響見表7。由表7可見，隨著乳酸菌劑量的增加，在飼養(yǎng)30 d后，C組末體長、末體質量比A組均有顯著提高（P＜0.05），而D組末體長、末體質量則比A組均有極顯著提高（P＜0.01）。說明乳酸菌在促進其生長性

表7 乳酸菌對南美白對蝦生長性能的影響①（n=30）

2.3 肝臟壓片顯微觀察結果

能方面效果顯著。

患病、正常蝦苗肝臟壓片結果見圖1（a）（b）。由圖1可見，正常蝦苗和發(fā)病蝦苗兩者都寄生有大量弧菌，發(fā)病蝦苗肝臟壓片顯微鏡觀察附有更多異物，且有明顯萎縮現(xiàn)象；而正常蝦苗的肝臟壓片干凈、無異物，且肝臟組織紋理清楚。

圖1 患病、正常蝦苗肝臟壓片結果

3 討論

乳酸菌是一類無芽孢、革蘭陽性菌的總稱，可在機體腸道內(nèi)產(chǎn)生維生素和促生長因子，從而實現(xiàn)促進對蝦生長的目的。張家國等研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌在水產(chǎn)動物的養(yǎng)殖方面具有改善水質、提高機體免疫能力和替代抗生素藥物治療疾病等功效。文獻[16]研究表明，從皮皮蝦、南美白對蝦腸道及養(yǎng)殖池底質活性污泥中，分離具有水質凈化功能的乳酸菌，可有效降低水中亞硝酸鹽氮和氨氮，具有顯著的水體凈化效果。本研究中，拌喂乳酸菌飼料的試驗組與對照組相比，水溫、鹽度、pH值、DO值均無顯著性差異，但添加較多劑量乳酸菌的D組，水體中溶解氧含量更高，水體pH值更穩(wěn)定，氨氮和亞硝酸鹽氮測定值更低，說明隨著養(yǎng)殖時間延長，乳酸菌在改良水質方面的功能逐漸顯現(xiàn)出來，與黃浦江等的研究結果一致。

文獻[18]研究顯示，南美白對蝦養(yǎng)殖飼料中添加乳酸菌，可顯著增加機體腸道有益菌數(shù)量、抑制病原菌的生長繁殖、提高機體病原菌的抵抗力。本研究顯示，隨著乳酸菌添加劑量增加，對蝦蝦苗體長和體質量的增加幅度亦提高，并顯著高于對照組；同時，肝臟的顯微壓片結果顯示，乳酸菌可有效提高對蝦機體抗病能力，減少有害物質引起的蝦苗肝萎縮。Kongnum等研究發(fā)現(xiàn)，南美白對蝦飼料中拌喂乳酸菌可顯著提高質量增加率、特定生長率、免疫力、成活率及抗弧菌效果。張玲研究表明，日本囊對蝦和中國明對蝦的養(yǎng)殖過程中口服或浸浴乳酸菌，均能改善水質、提高成活率和抗病能力。文金順研究表明，提高南美白對蝦養(yǎng)殖環(huán)境中的乳酸菌含量可顯著提高蝦體生長速度。汪海燕等研究表明，南美白對蝦發(fā)酵飼料中添加乳酸菌可顯著提高對蝦生長速度，體長比對照組增長0.5~0.8 cm。Sha等研究表明，乳酸菌不僅可以促進對蝦生長，還可提高對蝦的免疫應激和抗病能力，成活率顯著提高。鄭玉等在南美白對蝦餌料中添加蝦體質量3%的乳酸菌，飼喂8周后，對蝦的終全長、質量增加率和特定生長率均具有顯著提高。

4 結論

本研究結果顯示，南美白對蝦蝦苗淡水養(yǎng)殖過程中，投喂添加了1.25%乳酸菌的飼料后，與對照組相比，試驗組蝦苗生長速率更快，活力更強，水體環(huán)境更好，水體pH值更穩(wěn)定，溶解氧含量更高，肝萎縮現(xiàn)象更少，說明飼料中拌喂乳酸菌可以促進南美白對蝦蝦苗生長。