論文：凡納濱對蝦白便綜合征的組織病理學(xué)觀察

     凡納濱對蝦白便綜合征的組織病理學(xué)觀察

戚瑞榮1,2，崔龍波3，唐紹林1,2，高珺珊1,2，馬家好1,2

（1.廣州利洋水產(chǎn)科技股份有限公司，廣東 廣州 510515；2.廣州金水動(dòng)物保健品有限公司，廣東 廣州 510515；3.煙臺(tái)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東 煙臺(tái) 264005）

本文比較觀察了不同規(guī)格的健康和患白便綜合征凡納濱對蝦Litopenaeus vannamei肝胰腺、中腸、后腸、后盲囊等的組織結(jié)構(gòu)。組織病理顯示：白便綜合征凡納濱對蝦腸道嚴(yán)重病變，腸腔空，環(huán)肌兩側(cè)增生大量成纖維細(xì)胞，這些增生細(xì)胞取代了腸上皮，而不見正常柱狀上皮細(xì)胞；肝胰腺有不同程度和性質(zhì)的病變，如腺管萎縮、崩解、壞死等。凡納濱對蝦患白便綜合征的組織病變演變過程為：最初腸上皮基膜下出現(xiàn)一圈增生細(xì)胞，腸上皮柱狀細(xì)胞脫離基膜；增生細(xì)胞持續(xù)增生增多，腸上皮崩解脫落至腸腔，增生細(xì)胞完全取代腸上皮；增生細(xì)胞不斷增生，增生細(xì)胞層逐漸變厚，隨著時(shí)間的推移，增生細(xì)胞層近腔端的一圈增生細(xì)胞壞死，出現(xiàn)一圈棕黃色物質(zhì)，最終壞死細(xì)胞連同棕黃色物質(zhì)脫落至腸腔。脫落至腸腔的腺管細(xì)胞、上皮細(xì)胞、增生細(xì)胞排出體外即為肉眼可見的白便。

白便綜合征；凡納濱對蝦；組織病理

凡納濱對蝦Litopenaeusvannamei（南美白對蝦）生長速度快、養(yǎng)殖周期短、產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)收益高，是世界對蝦養(yǎng)殖的主要經(jīng)濟(jì)品種，目前已在我國廣東、福建、海南、廣西、山東、京津唐等地區(qū)大規(guī)模養(yǎng)殖，并取得了顯著的經(jīng)濟(jì)效益[1,2]。但是，2010年廣東、廣西養(yǎng)殖的凡納濱對蝦頻發(fā)白便綜合征，之后逐年加強(qiáng)。發(fā)病初期病蝦癥狀不明顯，隨著病情發(fā)展，池塘下風(fēng)口水面可見漂浮的白色線狀黏性糞便，病蝦腸道“斷腸”、空腸，嚴(yán)重時(shí)整個(gè)腸道變成乳白色，呈“白腸”，肝胰腺萎縮、模糊。白便綜合征發(fā)病率高、傳染性強(qiáng)，嚴(yán)重困擾凡納濱對蝦養(yǎng)殖業(yè)。我國對凡納濱對蝦白便綜合征的研究較少，僅有防治、流行特點(diǎn)等零星報(bào)道[3-10]。目前對白便綜合征的病因眾說紛紜，如細(xì)菌感染、藻毒素、水質(zhì)惡化、霉菌毒素、濫用藥物等[4]。曹海鵬等[1]研究確定霍亂弧菌Vibriocholerae是其病原菌。唐紹林等[3]、彭小云[6]、張水波[7,8]認(rèn)為白便綜合征是一種細(xì)菌病。Ha NTH等[11]認(rèn)為越南的白便綜合征是由蝦肝腸胞蟲Enterocytozoonhepatopenaei引起，但Tangprasittipap A等[12]推翻了這一觀點(diǎn)。國內(nèi)對患白便綜合征凡納濱對蝦的組織病理未見有報(bào)道。Sriurairatana S等[13]通過電鏡觀察認(rèn)為，白便綜合征是腺管上皮微絨毛脫落后在管腔中形成的聚集體，其數(shù)量多、嚴(yán)重時(shí)就使對蝦形成白色糞便，但是微絨毛聚集體的成因不明。

本研究利用組織病理切片直觀地展示了患白便綜合征凡納濱對蝦的組織病變情況，特別是腸組織病變的演變，以期為疾病的準(zhǔn)確診斷提供理論參考，為病原的致病機(jī)理分析提供直觀的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 對蝦樣品采集

患白便綜合征對蝦用旋網(wǎng)采自廣東省凡納濱對蝦養(yǎng)殖池塘，對不同規(guī)格（400～500尾/500g～40尾/500g）、不同程度患白便綜合征的凡納濱對蝦分別取樣，用波恩氏液固定病蝦肝胰腺、中腸、后腸、后盲囊等，將中腸切成前、中、后三段進(jìn)行固定，同時(shí)采集、固定健康凡納濱對蝦組織，以作對照。

1.2 方法

將波恩氏液固定的凡納濱對蝦組織于24h內(nèi)用70%酒精換液，之后每隔4h換液一次，直至溶液無黃色。石蠟包埋時(shí)，用70%、80%、90%、95%、100%梯度酒精脫水，再用二甲苯透明，石蠟浸蠟、包埋成塊、切片，切片厚度為5μm；H·E染色后，中性樹膠封片，于MOTIC光學(xué)顯微鏡下觀察、拍照。

2 結(jié)果與分析

比較觀察發(fā)現(xiàn)，患白便綜合征凡納濱對蝦中腸、肝胰腺組織有明顯的病變，中腸前、中、后段病變差異不明顯，不同程度白便綜合征的凡納濱對蝦組織病變不同。

2.1 中腸

健康凡納濱對蝦中腸上皮細(xì)胞呈柱狀，排列緊密，細(xì)胞間隙清楚，游離端滿布微絨毛，組織結(jié)構(gòu)由內(nèi)向外依次為：腸上皮、基膜、結(jié)締組織、肌層、外膜（圖1）。

圖1 健康凡納濱對蝦腸的組織結(jié)構(gòu)Fig.1 Histological sections of intestine of healthy Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei

患白便綜合征凡納濱對蝦中腸組織最明顯的病變是：環(huán)肌兩側(cè)增生大量的成纖維細(xì)胞，取代了腸上皮，腸上皮崩解脫落至腸腔。白便綜合征程度較輕的凡納濱對蝦腸組織基膜下可見一圈增生細(xì)胞，腸上皮完整或局部脫落（圖2）。病變較重的白便綜合征凡納濱對蝦腸上皮整個(gè)脫落，腸腔內(nèi)可見脫落的腸上皮。腸上皮被大量增生細(xì)胞取代，增生細(xì)胞層有一定的厚度（圖3-A、B、C）。再嚴(yán)重些的白便綜合征凡納濱對蝦無腸上皮，被大量增生細(xì)胞取代，增生細(xì)胞層近腔端一圈增生細(xì)胞壞死并有色素沉積，腸腔內(nèi)可見壞死脫落的增生細(xì)胞（圖3-D、E、F、H）。增生的細(xì)胞一圈圈地脫落壞死，直至呈空腸腔（圖3-G）。

圖2 患白便綜合征凡納濱對蝦腸初期病變的組織結(jié)構(gòu)Fig.2 Initial pathological changes in intestine of Pacific white leg shrim p Litopenaeus vannamei w ith white feces syndrome

圖3 白便綜合征凡納濱對蝦腸嚴(yán)重病變Fig.3 Severe pathological changes in intestine of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei w ith white feces syndrome

2.2 肝胰腺及其他組織

健康凡納濱對蝦肝胰腺組織由多個(gè)腺管組成，腺管緊密鄰接，腺管上皮中可見三種類型的細(xì)胞：（1）吸收細(xì)胞，細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有大量的小泡；（2）分泌細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)僅有一個(gè)大泡，細(xì)胞核被擠到一側(cè)；（3）纖維細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)致密，呈深藍(lán)色，核、核仁明顯（圖4-a）。還有一種細(xì)胞位于組織周圍、腺管盲端，可以分化產(chǎn)生其他類型的上皮細(xì)胞，稱為胚細(xì)胞。

患白便綜合征凡納濱對蝦腸出現(xiàn)病變，肝胰腺或正?；虺霈F(xiàn)不同程度的病變，如萎縮、水腫、腺管崩解、壞死、增生、肉芽腫等；有些腺管組織中可見大量菌體（圖4-b、c）。

患白便綜合征凡納濱對蝦后腸、后盲囊與健康凡納濱對蝦比較，未見明顯病變。

圖4 凡納濱對蝦肝胰腺的組織結(jié)構(gòu)Fig.4 Histological structure of hepatopancreas of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei

3 討論

白便綜合征不是單純的糞便呈白色，而是肝胰腺、腸道病變，是一種慢性病，比較難治療。肝胰腺腺管崩解、壞死，腺管上皮細(xì)胞脫落，腸道細(xì)胞增生、上皮脫落，脫落的細(xì)胞最終到達(dá)腸腔排出體外，形成肉眼可見的白便。

對患白便綜合征凡納濱對蝦樣品的組織觀察發(fā)現(xiàn)，有些樣品肝胰腺中有大量菌體，而在治療實(shí)踐中也發(fā)現(xiàn)抗菌藥物對白便綜合征有較好的治療效果[9]，所以認(rèn)為細(xì)菌是凡納濱對蝦白便綜合征的原因。但是，對白便綜合征病原菌的研究較少。唐紹林等[3]、彭小云[6]、張水波[7,8]都認(rèn)為白便綜合征是細(xì)菌病，而天氣突變、“倒藻”、底質(zhì)敗壞、餌料霉變、藍(lán)藻暴發(fā)、消化機(jī)能受損等是重要的誘發(fā)因素。曹海鵬等[1]的研究表明，霍亂弧菌是白便綜合征病原菌，此病與養(yǎng)殖水質(zhì)和底質(zhì)惡化、投喂變質(zhì)飼料或不正常投飼也有較大的關(guān)系。

白便綜合征已經(jīng)成為近年來凡納濱對蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)中的又一重大疾病。組織切片顯示，該病形成的機(jī)制可能是：蝦體受某種因素的刺激影響，認(rèn)為可能是細(xì)菌的某種毒素刺激，引發(fā)凡納濱對蝦上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。起初腺管上皮、腸上皮開始崩解，在腸上皮基膜下出現(xiàn)增生細(xì)胞，此時(shí)的腸上皮尚完整或已崩解脫落。隨著時(shí)間的推移，增生細(xì)胞越來越多，增生細(xì)胞層越來越厚，腸上皮被逐步取代、完全脫落；腸完全喪失吸收營養(yǎng)物質(zhì)的功能，增生細(xì)胞沒有了物質(zhì)代謝的基礎(chǔ)，開始在增生細(xì)胞層游離端壞死，之后一圈圈壞死、脫落，最終腸上皮所在部位的結(jié)構(gòu)也不存在。壞死脫落的細(xì)胞，無論是上皮細(xì)胞還是增生細(xì)胞，均落入腸腔，排出體外，即肉眼所見的白便。曹海鵬等[1]認(rèn)為，發(fā)病機(jī)理可能是由于霍亂弧菌在凡納濱對蝦腸組織中大量生長增殖、黏附腸黏膜、表面產(chǎn)生毒力因子而引起腸壁、黏膜損傷，進(jìn)一步通過血淋巴循環(huán)至肝胰腺組織并在其中繁殖和產(chǎn)生毒素后導(dǎo)致肝胰腺腫大、糜爛等病變，最終導(dǎo)致肝胰腺和腸功能失常，引發(fā)凡納濱對蝦發(fā)病、死亡。

［1］ 曹海鵬,溫樂夫,周桂嫻,等.南美白對蝦白便綜合征病原霍亂弧菌的分離與藥敏試驗(yàn)［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2016（2）: 128-132.

［2］ 馬良驍,馮憲斌,韋新蘭,等.湖北地區(qū)南美白對蝦養(yǎng)殖現(xiàn)狀分析及展望［J］.漁業(yè)致富指南,2014（5）:45-47.

［3］ 唐紹林,雷燕,戚瑞榮.南美白對蝦產(chǎn)生白便綜合征的原因及防治［J］.科學(xué)養(yǎng)魚,2012（11）:58-58.

［4］ 黃興宇.關(guān)于南美白對蝦白便綜合征的分析［J］.當(dāng)代水產(chǎn),2014（9）:66-67.

［5］ 曹海鵬.南美白對蝦白便綜合征的診治實(shí)例［J］.水產(chǎn)養(yǎng)殖,2013,34（11）:56-56.

［6］ 彭小云.南美白對蝦白便產(chǎn)生原因及防治方法［J］.科學(xué)養(yǎng)魚,2014（7）:92-92.

［7］ 張水波.南美白對蝦白便腸炎的防治［J］.海洋與漁業(yè), 2013（3）:52-52.

［8］ 張水波.南美白對蝦空腸白便的防治［J］.水產(chǎn)養(yǎng)殖,2013（3）:73-74.

［9］ 唐紹林,章明鳳.南美白對蝦白便癥的流行特點(diǎn)和防治措施［J］.海洋與漁業(yè),2015（8）:66-67.

［10］ 賈宏升.天津地區(qū)對蝦白便的防治方案分析［J］.當(dāng)代水產(chǎn),2015（7）:84-84.

［11］ Ha NTH,Ha DT,Thuy NT,et al.Enterocytozoon hepatopenaei has been detected parasitizing tiger shrimp（Penaeus monodon）cultured in Vietnam and showing white feces syndrome［J］.Agriculture and Rural Development:Science and Technology,2010（12）:45-50.（Google translation from Vietnamese）

［12］ Tangprasittipap A,Srisala J,Chouwdee S,etal.Themicrosporidian Enterocytozoon hepatopenaei is not the cause of white feces syndrome in white leg shrimp Penaeus（Litopenaeus）vannamei［J］.BMCVeterinary Research,2013,9（1）:1-10.

［13］ Sriurairatana S,Boonyawiwat V,Gangnonngiw W,et al. White feces syndrome of shrimp arises from transformation,sloughing and aggregation of hepatopancreatic microvilli into vermiform bodies superficially resembling gregarines［J］.PlosOne,2014,9（6）:99170-99170.