魚(yú)類淋巴囊腫病的研究進(jìn)展

魚(yú)類淋巴囊腫病的研究進(jìn)展

王錫亮 胡國(guó)斌 宋珊珊

(中國(guó)海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院 青島 266003)

【摘 要】魚(yú)類淋巴囊腫病是一種慢性病毒性疾病，可以感染100種以上的溫水域和低溫水域的海、淡水魚(yú)類，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。文章綜述了近年來(lái)魚(yú)類淋巴囊腫病的研究現(xiàn)狀，重點(diǎn)介紹了魚(yú)類淋巴囊腫病的病原、傳播途徑、發(fā)病機(jī)理、診斷和防治等方面的研究進(jìn)展，并對(duì)今后魚(yú)類淋巴囊腫病的研究趨勢(shì)進(jìn)行了展望。

【關(guān)鍵詞】魚(yú)類淋巴囊腫病 淋巴囊腫病毒 發(fā)病機(jī)理 診斷防治

引言

魚(yú)類淋巴囊腫病(lymphocystis disease)是由淋巴囊腫病毒(lymphocystis disease virus，LCDV)感染引起魚(yú)類的一種典型的皮膚和淺表組織慢性病，它是最早發(fā)現(xiàn)的魚(yú)類病毒性疾病。該病的普遍癥狀是病魚(yú)體表長(zhǎng)有瘤狀物，嚴(yán)重時(shí)內(nèi)臟組織器官也出現(xiàn)病變。魚(yú)類淋巴囊腫病的較大規(guī)模流行最先發(fā)生在歐洲的牙鲆養(yǎng)殖場(chǎng)，隨后在南美和北美的養(yǎng)魚(yú)場(chǎng)中均暴發(fā)過(guò)；近年來(lái)，開(kāi)始在亞洲流行。在我國(guó)，1992年于養(yǎng)殖的云紋石斑魚(yú)中首次發(fā)現(xiàn)了淋巴囊腫病。l997年，山東威海地區(qū)的牙鲆養(yǎng)殖場(chǎng)大面積暴發(fā)了淋巴囊腫病。該病通常不具有致死性，但是病魚(yú)體質(zhì)瘦弱、生長(zhǎng)遲緩、外表異樣而失去商品價(jià)值，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

魚(yú)類淋巴囊腫病的流行性極廣，引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視；目前已知至少有42科、125種以上的魚(yú)類可以染上此病，其中海水魚(yú)占30科。當(dāng)前對(duì)魚(yú)類淋巴囊腫病的病原、臨床癥狀、組織病理學(xué)變化、診斷等已有多方面的報(bào)道，但是發(fā)病分子機(jī)制尚未明確，疫苗研究也沒(méi)有獲得突破性進(jìn)展。因此，要想控制和攻克此病，仍需付出巨大的努力。

1魚(yú)類淋巴囊腫病毒

l874年，Lowe首次在鰈形目魚(yú)類中發(fā)現(xiàn)淋巴囊腫病，認(rèn)為該病由原蟲(chóng)引起。l962年，Walker等使用電鏡觀察到LCDV，指出它就是魚(yú)類淋巴囊腫病的病原體。l965年，Walker將LCDV劃分到虹彩病毒科(Iridoviridae)淋巴囊腫病毒屬(Lymphocystivirus)。根據(jù)國(guó)際病毒分類學(xué)委員會(huì)(ICTV)第八次報(bào)告， 虹彩病毒科分為5個(gè)屬，包括感染脊椎動(dòng)物的淋巴囊腫病毒屬、蛙病毒屬(Ranavirus)和腫大細(xì)胞病毒屬(Megalocytivirus)以及感染無(wú)脊椎動(dòng)物的虹彩病毒屬(Iridovirus)和綠虹彩病毒屬(Chloriridovirus)。虹彩病毒經(jīng)過(guò)提純結(jié)晶后，在斜射光線照射下呈現(xiàn)藍(lán)紫色的虹彩光澤，故被命名為虹彩病毒。

LCDV是一種大的胞漿型DNA病毒。病毒粒子呈六邊形、二十面體對(duì)稱，直徑多在130～260 nm不等，由衣殼、中間脂質(zhì)層和核心體三部分組成。病毒粒子大小隨宿主或所在組織的不同而有差異，Heppell等測(cè)定的魚(yú)類淋巴囊腫病毒粒子直徑甚至達(dá)到380nm。病毒顆粒至少含有33條多肽，分子量大小為l4-220kDa。主要衣殼蛋白(MCP)是病毒顆粒的重要結(jié)構(gòu)成分，約占多肽的40％-45％。MCP基因是水生虹彩病毒進(jìn)化上比較保守的基因，被視為虹彩病毒分子進(jìn)化的標(biāo)記。

LCDV基因組大小約l02-186 kb，為一條具有環(huán)狀變換和末端冗余的線性雙鏈DNA分子，位于核心體中，其中的胞嘧啶5’端高度甲基化。目前，根據(jù)MCP基因保守序列將LCDV分為3種基因型：基因型I、基因型Ⅱ和基因型Ⅲ。徐洪濤等從我國(guó)養(yǎng)殖牙鲆中分離出的淋巴囊腫病毒中國(guó)株(LCDV-C)屬于基因型Ⅱ，它不同于歐洲分離的基因型I LCDV-1病毒株，兩者MCP的同源性為87.6％。LCDV-1是虹彩病毒中最早測(cè)出全長(zhǎng)序列的病毒株，其基因組全長(zhǎng)為102653bp，包含195個(gè)開(kāi)放閱讀框(ORF)，編碼的多肽分子大小為40-1199kDa。2004年，LVDV-C基因組全序列也被測(cè)出，大小為l86250bp，含有240個(gè)ORF。比較后發(fā)現(xiàn)，兩者的編碼能力和基因排列順序都有較大的差異。2007年，Eaton對(duì)虹彩病毒科中序列已知的12種病毒基因組進(jìn)行了分析，并鑒定出26個(gè)核心基因，經(jīng)過(guò)重新注釋后的LCDV1與LVDV-C基因組序列分別含有1O8和178個(gè)ORFs。

2 傳染途徑

淋巴囊腫病毒經(jīng)由水體或直接皮膚接觸，通過(guò)呼吸器官、消化道和皮膚傷口在同種或不同種魚(yú)之間進(jìn)行水平傳播。繩秀珍預(yù)測(cè)病毒至少可以通過(guò)體表傷口、鰓、消化道上皮等三條途徑進(jìn)入魚(yú)體內(nèi)。曲徑等通過(guò)對(duì)牙鲆進(jìn)行皮膚劃傷感染實(shí)驗(yàn)證實(shí)病毒主要以體表感染的方式進(jìn)行傳播。

迄今為止，有關(guān)淋巴囊腫病毒在魚(yú)體內(nèi)的傳播途徑的研究資料比較缺乏。Colorni認(rèn)為，淋巴囊腫細(xì)胞破裂后會(huì)釋放病毒粒子到鄰近組織中，然后進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。孫修勤等用原位雜交的方法在牙鲆的胃、性腺、肝臟和肌肉組織中檢測(cè)到病毒，推斷病毒經(jīng)口進(jìn)入消化道、再進(jìn)入血液進(jìn)行傳播。劉允坤等用PCR方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，人工感染淋巴囊腫病毒的牙鲆的血液和脾臟組織中病毒濃度最大，其次是腸、鰓、胃和肝，由于脾、腎臟是魚(yú)類的造血器官，因此推測(cè)病毒能很快地隨著血液循環(huán)擴(kuò)敖到性腺，進(jìn)行垂直傳播。

通常病毒在細(xì)胞間的傳播方式有三種：

(1)細(xì)胞外傳播：受染細(xì)胞釋放的病毒再去侵染其他細(xì)胞；

(2)細(xì)胞間傳播：病毒感染細(xì)胞后并不釋放而是通過(guò)細(xì)胞闊橋傳給相鄰細(xì)胞；

(3)細(xì)胞分裂傳播：病毒隨著細(xì)胞的繁殖從親代傳染到子代。

曾曉華通過(guò)斑點(diǎn)免疫吸附分析發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)明顯病變的細(xì)胞培養(yǎng)物上清中的病毒粒子極少，表明病毒傳播可能以細(xì)胞間傳播為主，隨著病變程度加深，細(xì)胞崩解，推測(cè)病毒有可能存在細(xì)胞外傳播方式。呂宏旭等認(rèn)為淋巴囊腫病毒可通過(guò)受體介導(dǎo)和吞噬作用兩種細(xì)胞內(nèi)吞方式進(jìn)入胞內(nèi)；此外，還通過(guò)膜融合進(jìn)人胞內(nèi)，這是胞膜病毒最常采用的方式。

當(dāng)淋巴囊腫病毒侵入魚(yú)體后，首先在受染的表皮細(xì)胞之內(nèi)形成淋巴囊腫細(xì)胞。包涵體是病毒在細(xì)胞中的增殖場(chǎng)所，病毒在其中裝配完畢后進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，其后細(xì)胞質(zhì)開(kāi)始衰退，包涵體也消失，在胞漿內(nèi)可見(jiàn)大量的散在病毒顆粒，直至細(xì)胞破裂，病毒顆粒散布到水中，繼而感染體表受損的魚(yú)體。集約化養(yǎng)殖在引入新苗種或者水體中含病毒時(shí)易感染淋巴囊腫病，然而，由于操作、捕撈、交配、寄生物感染以及魚(yú)體之間的攻擊行為等原因?qū)е碌钠つw創(chuàng)傷都加劇了病毒在魚(yú)群中的傳播；提高水溫和養(yǎng)殖密度也能加劇病毒的傳播。Kitamura等研究表明，夏天水溫高時(shí)發(fā)病率高，冬天發(fā)病率較低。然而，曲徑等的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牙鲆淋巴囊腫病一年四季均可發(fā)生，低水溫期病情似有加重。張永嘉等報(bào)道，在我國(guó)廣東海區(qū)養(yǎng)殖魚(yú)類中，該病的流行季節(jié)是10月份至翌年5月的低水溫期(10-25℃)，苗種發(fā)病時(shí)死亡率達(dá)30％。這與以往認(rèn)為此病多發(fā)生在高水溫季節(jié)的觀點(diǎn)不同，這些差異可能與養(yǎng)殖海區(qū)的環(huán)境有關(guān)。由此可見(jiàn)，淋巴囊腫病的發(fā)生與水溫沒(méi)有密切的關(guān)系。

3發(fā)病機(jī)制

目前，魚(yú)類淋巴囊腫病的發(fā)病機(jī)制尚不明確 已知魚(yú)類虹彩病毒主要通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和裂解細(xì)胞兩種方式損傷受染細(xì)胞。淋巴囊腫病毒感染培養(yǎng)細(xì)胞后，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，主要表現(xiàn)在細(xì)胞固縮，呈牽絲狀，然后細(xì)胞聚融合壞死，脫落并形成空斑，最終隨著空斑逐漸變多并擴(kuò)大，整個(gè)細(xì)胞單層被破壞脫落。通過(guò)對(duì)細(xì)胞核形態(tài)、DNA片斷化、天冬氨酸酶活性等研究，證明LCDV誘導(dǎo)宿主細(xì)胞調(diào)亡；凋亡的發(fā)生基本上不影響子代病毒粒子的復(fù)制。根據(jù)大菱鲆淋巴囊腫病毒SDS-PAGE圖譜分析，來(lái)自魚(yú)體囊腫細(xì)胞的LCDV與來(lái)自細(xì)胞系擴(kuò)增的LCDV有明顯差異，后者缺少14，25和45kDa的多肽，推測(cè)此三種多肽可能與病毒的致病性相關(guān)。胸苷合成酶(Thymidylate Synthase，TS)參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)和腫瘤的形成。病毒感染魚(yú)體后，該酶存在于宿主的細(xì)胞質(zhì)中，并促使細(xì)胞進(jìn)入S期和G2／M期。趙哲在LVDV-C中發(fā)現(xiàn)0RF011L含有完整的TS序列，這是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的脊椎動(dòng)物虹彩病毒的TS基因，有助于認(rèn)識(shí)和闡明淋巴囊腫病毒致病的分子機(jī)理。

淋巴囊腫病毒偏好感染真皮結(jié)締組織中成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞。病毒感染使細(xì)胞擴(kuò)大、增肥，不再進(jìn)行有絲分裂，從而形成球形的肥大細(xì)胞，此時(shí)細(xì)胞直徑可達(dá)0.3-2mm；同時(shí)細(xì)胞核發(fā)生退行性變化、凝結(jié)或破碎，核仁扭曲并模糊；胞漿發(fā)生變化，在細(xì)胞質(zhì)邊緣散有嗜堿性的、大小不一的包涵體；在淋巴囊腫周圍有一層厚而透明的硫酸粘多糖性質(zhì)的包膜；在染病早期，包膜有輕微炎癥，感染后期淋巴囊腫破裂，誘發(fā)更激烈的炎癥反應(yīng)。淋巴囊腫是最早在病魚(yú)體表出現(xiàn)的癥狀，它們通常生長(zhǎng)在皮膚、吻端、眼眶周圍、鰭和尾等部位，嚴(yán)重時(shí)遍及全身甚至內(nèi)臟組織器官，如腹膜、心包、咽、腸壁、卵巢、脾、肝等，其顏色從白色到微紅色不等，取決于感染的部位和血管的豐富度。

淋巴囊腫細(xì)胞破裂后，病毒粒子釋放出來(lái)，侵染鄰近組織并進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，引起全身性感染。囊腫破裂后還易形成開(kāi)放式潰瘍面，導(dǎo)致寄生蟲(chóng)、細(xì)菌等其他病原體的繼發(fā)感染。曲凌云等在患病牙鲆的心肌、脾細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞、鰓細(xì)胞和頭腎等組織中均觀察到了直徑略有不同的病毒顆粒，鰓細(xì)胞中的病毒數(shù)量?jī)H次于體表。這些來(lái)自不同組織的病毒粒子的毒力是否相同還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。Colorni等認(rèn)為，在系統(tǒng)性感染早期，脾細(xì)胞起主要免疫作用，但是當(dāng)宿主的免疫力下降時(shí)，脾細(xì)胞的吞噬能力降低，導(dǎo)致其他內(nèi)臟器官的相繼感染。Mareogliese等發(fā)現(xiàn)，LCDV促進(jìn)細(xì)胞吞噬能力，但不能明顯促進(jìn)非特異性免疫細(xì)胞的增生。并推測(cè)病毒以整合或非整合形式存在于易感細(xì)胞中而干擾細(xì)胞的核酸代謝，導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生不同程度的病變。

患病個(gè)體生長(zhǎng)緩慢，體形消瘦，一是因?yàn)榱馨湍夷[瘤狀物對(duì)病魚(yú)的呼吸與運(yùn)動(dòng)造成了障礙而影響了攝食，二是因?yàn)殡S著病毒侵入內(nèi)臟器官，尤其是心臟與腎臟功能的降低而導(dǎo)致體質(zhì)惡化。張永嘉認(rèn)為造成病魚(yú)死亡的主要原因是腎功能衰竭而導(dǎo)致的排泄系統(tǒng)功能障礙。常藕琴通過(guò)對(duì)軍曹魚(yú)淋巴囊腫病的研究認(rèn)為，病毒引起鰓、心臟、腎臟、脾臟、肝臟、腸道和腦等器官病變而致多器官功能衰竭，其中心肌纖維和腎小管上皮細(xì)胞受損是造成病魚(yú)死亡的主要原因。

到目前為止，關(guān)于病魚(yú)對(duì)再次感染是否具有保護(hù)性的看法還不統(tǒng)一。Nishda發(fā)現(xiàn)，患病牙鲆自愈后其抗體水平比發(fā)病魚(yú)體和健康體高出不少。Yoshimizu等證實(shí)LCDV滅活疫苗對(duì)牙鲆有保護(hù)作用。1wamoto等的研究表明，用HINAE細(xì)胞系擴(kuò)增的LCDV對(duì)牙鲆無(wú)感染性，而對(duì)魚(yú)體有保護(hù)作用。Chinchar根據(jù)LCDV染病魚(yú)體的體表?yè)p傷特性和病發(fā)部位的免疫應(yīng)答特點(diǎn)。推測(cè)在阻止病毒感染的過(guò)程中，免疫系統(tǒng)的作用是不明顯的。一些研究還表明，環(huán)境因子的變化似乎可以刺澈淋巴囊腫病的發(fā)生，這些因素包括養(yǎng)殖密度、低鹽度、季節(jié)、水溫和環(huán)境污染等

4 疾病的檢測(cè)和診斷

通常淋巴囊腫組織的病理學(xué)特征可作為疾病診斷的可靠依據(jù)，但是魚(yú)類淋巴囊腫病是一種慢性疾病，從感染病毒到出現(xiàn)組織學(xué)上的可察病癥需要很長(zhǎng)的時(shí)間。此外，由于病毒獨(dú)特的生物學(xué)特征和魚(yú)類的水生生長(zhǎng)環(huán)境使該病的治療和預(yù)防更加困難。因此如何提高診斷方法的敏感度，并采取相應(yīng)措施防止疾病的流行，是生產(chǎn)中減少損失的最有效的途徑。目前常用的診斷方法可歸納為以下幾類：

4．1電鏡觀察

通過(guò)電子顯微鏡可以觀察細(xì)胞的病理結(jié)構(gòu)、病毒形態(tài)大小和類型以及了解病毒的感染、復(fù)制和形態(tài)發(fā)生等特征。l962年。wa1ker通過(guò)電鏡觀察確定魚(yú)類淋巴囊腫病的病原體為淋巴囊腫病毒。徐洪濤通過(guò)電鏡觀察到發(fā)病牙鲆病變組織中的球狀淋巴囊腫病毒。曲凌云、繩袖珍等使用電鏡研究了淋巴囊腫病毒在患病牙鲆中的分布。常藕琴在患病軍曹魚(yú)的囊腫細(xì)胞質(zhì)中觀察到有大量二十面體的病毒粒子，大多數(shù)病毒粒子的核髓和衣殼清晰，結(jié)構(gòu)完整，少量病毒粒子正在裝配，有極少致病毒只有不完整的衣殼。

4．2 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是病毒學(xué)研究的基礎(chǔ)，也是病毒病診斷的經(jīng)典方法之一。寄生于培養(yǎng)細(xì)胞中的淋巴囊腫病毒在23℃的條件下可存活數(shù)月。1966年，Wolf等利用棘臀魚(yú)(centrarchid)細(xì)胞系增殖LCDV獲得成功。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，LCDV可在藍(lán)鰓魚(yú)幼魚(yú)細(xì)胞系BF-2(bluegill fry-2)、金頭鯛鯖細(xì)胞系SAF-1 (gilthead seabream fin-1)、亞洲鱸魚(yú)幼魚(yú)細(xì)胞系SF(Asian seabass fry)、日本牙鲆胚胎細(xì)胞系HINAE (Japanese flounder embryo)、草魚(yú)腎細(xì)胞系GCK (grass carp kidney)和草魚(yú)卵巢細(xì)胞系GCO(grass carp ovary)等細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并緩慢引起細(xì)胞病變。孫修勤、呂宏旭等分別利用牙鲆鰓細(xì)胞系進(jìn)行了養(yǎng)殖牙鲆淋巴囊腫病毒的分離和增殖。雖然多種細(xì)胞系是淋巴囊腫病毒感染的許可細(xì)胞，但是淋巴囊腫病毒對(duì)它們的感染能力并不相同。LCDV接種于GCO中，只需一天就能觀察到典型的細(xì)胞病變效應(yīng)，FG需要6天，SAF-1至少需要l0-15天，BF-2則需要21天才可見(jiàn)典型的細(xì)胞病變效應(yīng)。

4．3免疫檢測(cè)

免疫檢測(cè)是基于抗原抗體反應(yīng)的一種檢測(cè)方法。當(dāng)前，許多免疫技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于LCDV的檢測(cè)。1998年，日本學(xué)者建立了淋巴囊腫病的ELISA診斷法。Garc i a-Rosado等建立了血清學(xué)檢測(cè)方法。比較間接熒光測(cè)定、細(xì)胞計(jì)量術(shù)和斑點(diǎn)印跡免疫酶技術(shù)對(duì)SAF-l細(xì)胞中LCDV抗原的檢測(cè)效果發(fā)現(xiàn)，間接熒光溯定法快捷敏感，細(xì)胞計(jì)量術(shù)有漏檢情況發(fā)生，斑點(diǎn)印跡免疫酶檢測(cè)則易產(chǎn)生假陽(yáng)性，因此認(rèn)為間接熒光確定最適合于SAF-1細(xì)胞的LCDV抗原檢測(cè)。特異抗血清的使用提高了血清學(xué)檢測(cè)方法的敏感性。Cano等利用特異抗血清通過(guò)免疫印記技術(shù)對(duì)帶有瘤狀病灶的病魚(yú)以及攜帶病毒但無(wú)癥狀的個(gè)體進(jìn)行了檢測(cè)。單克隆抗體敏感、易獲得，對(duì)疾病的診斷具有較高的特異性，同時(shí)容易做到診斷程序的標(biāo)準(zhǔn)化。繩袖珍利用抗LCDV的單克隆抗體結(jié)合免疫熒光技術(shù)對(duì)感染病毒的許氏平壹由進(jìn)行檢測(cè)，并在淋巴囊腫細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中、胃上皮、鰓片以及肌纖維下表皮檢測(cè)到特異熒光信號(hào)。程順風(fēng)等通過(guò)抗LCDV的小鼠單克隆抗體，結(jié)合ELISA診斷、間接免疫熒光法、蛋白質(zhì)印跡、免疫電子顯徽技術(shù)，對(duì)LCDV進(jìn)行檢測(cè)。發(fā)現(xiàn)具有特異反應(yīng)的LCDV蛋白，井檢測(cè)到單克隆抗體作用于病毒粒子外表面。

4．4分子診斷

核酸雜交技術(shù)是繼免疫診斷技術(shù)之后產(chǎn)生的第三代診斷技術(shù)。孫修勤采用核酸探針雜交方法可有效地對(duì)LCDV進(jìn)行定性和定位診斷，并提出LCDV是通過(guò)血液在牙鲆體內(nèi)傳播，同時(shí)可能存在垂直和水平兩種傳播方式。

PCR技術(shù)具有敏感、特異、快速和簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，目前已成為檢測(cè)虹彩病毒的主要技術(shù)手段。針對(duì)虹彩病毒的MCP、DNA聚合酶(DdDP)、DNA轉(zhuǎn)甲基酶(DMet)、ATP酶(ATPase)、核苷酸還原酶(RBRD)基因以及其他ORFs或限制性酶切核酸片斷序列，建立了相應(yīng)的PCR檢測(cè)技術(shù)，并成功進(jìn)行了魚(yú)類細(xì)胞淋巴囊腫病毒的檢測(cè)。其中所用的引物大部分都是根據(jù)虹彩病毒MCP基因的高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)的。此外，Kitamurat利用淋巴囊腫病毒MCP基因的高變區(qū)和保守區(qū)，建立了多重PCR技術(shù)，用于淋巴囊腫病毒不同地理株基因型的鑒定。Cano等利用PCR技術(shù)結(jié)合狹縫印記雜交技術(shù)進(jìn)一步提高了病毒檢測(cè)的敏感性，所用的病毒DNA量?jī)H為2.5ng。定量PCR技術(shù)被用于確定淋巴囊腫病毒滴度和發(fā)病率之間的關(guān)系。咎金東通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性定量PCR對(duì)牙鲆組織中的LVDV-C進(jìn)行定量，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)有明顯腫瘤的牙鲆外周血中LVDV-C的平均含量是無(wú)瘤染病牙鲆的100倍；當(dāng)少量病毒感染時(shí)，牙鲆并不出現(xiàn)病癥。

5預(yù)防與治療

淋巴囊腫病是一種慢性病毒病，感染率達(dá)30％，發(fā)病不嚴(yán)重的魚(yú)可以自行痊愈，有的病魚(yú)的囊腫可以自行脫落，有的在口唇部影響進(jìn)食的病魚(yú)則需外科手術(shù)摘除。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，22-25℃高溫水結(jié)合過(guò)氧化氫藥浴可使病魚(yú)體表囊腫消失。使用中草藥制劑對(duì)淋巴囊腫病毒進(jìn)行預(yù)防和治療，治愈率達(dá)80％，用于預(yù)防發(fā)病率低于10％的魚(yú)群。Yoshimizu等研制出LCDV滅活疫苗，并證實(shí)其對(duì)牙鲆有保護(hù)作用，但是該制備方法不適合規(guī)模化生產(chǎn)。核酸疫苗與傳統(tǒng)的抗原疫苗相比，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生廣泛的體液免疫和細(xì)胞免疫，同時(shí)具有生產(chǎn)成本低以及保存上的許多優(yōu)點(diǎn)。目前，已經(jīng)將淋巴囊腫病毒主要衣殼蛋白基因片段分另別進(jìn)行了原核和真核表達(dá)，并且成功誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異體液免疫應(yīng)答。孫修勤等構(gòu)建的真核重組質(zhì)?？梢栽谘丽遗咛ゼ?xì)胞FEC中表達(dá)。鄭風(fēng)榮等將陽(yáng)性重組質(zhì)粒經(jīng)肌肉接種牙鲆，驗(yàn)證了該疫苗良好的免疫效果和較高的保護(hù)率。

迄今還缺乏有效的治療淋巴囊腫病的措施，因此疾病的預(yù)防非常關(guān)鍵。預(yù)防養(yǎng)殖群體發(fā)生疫病在集約化養(yǎng)殖模式中至關(guān)重要，通常采取以下方式：(1)把好苗種關(guān)，對(duì)親魚(yú)、苗種嚴(yán)格檢疫。發(fā)現(xiàn)帶毒者，截?cái)嘁咴?、銷毀病死魚(yú)；(2)對(duì)病魚(yú)實(shí)施隔離養(yǎng)殖，并用過(guò)氧化氫溶液浸洗，提高養(yǎng)殖水溫，同時(shí)注意預(yù)防并發(fā)感染；(3)把好水質(zhì)關(guān)，提倡流水養(yǎng)魚(yú)，加大換水量，過(guò)濾消毒水源；(4)把好餌料關(guān)，不用鮮活餌料、小雜魚(yú)等，杜絕病原從餌料帶入；(5)降低養(yǎng)殖密度以減少發(fā)病機(jī)會(huì)；(6)增加營(yíng)養(yǎng)，提高魚(yú)類機(jī)體自身免疫能力。

6 魚(yú)類淋巴囊腫病的研究展望

自1962年Walker目首次鑒定魚(yú)類淋巴囊腫病毒以來(lái)，學(xué)者們圍繞魚(yú)類淋巴囊腫的細(xì)胞發(fā)生學(xué)和病原分子生物學(xué)開(kāi)展了研究。近年來(lái)，在病毒基因組序列測(cè)定和注釋、發(fā)展診斷技術(shù)、研制疫苗等方面取得了一定的進(jìn)展，但還有許多方面的研究有待進(jìn)一步深入，如病毒裝配過(guò)程、免疫逃逸機(jī)制、宿主感染特異性和特效疫苗研制等方面。

淋巴囊腫病毒在魚(yú)體內(nèi)潛伏期長(zhǎng)，一旦出現(xiàn)病癥來(lái)不急醫(yī)治就傳播開(kāi)來(lái)，因此如何提高診斷方法的敏感度和有效性對(duì)于疾病流行的控制具有重要的意義。應(yīng)用分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)可以達(dá)到早期和快速診斷的目的，從而指導(dǎo)病毒病的防治。快速診斷試劑盒的研制是今后加強(qiáng)疫病防控的手段之一。由于病毒存在于活體細(xì)胞中，要求藥物具有極高的選擇性，因此藥物開(kāi)發(fā)難度大；并且長(zhǎng)期施藥不僅導(dǎo)致水體的污染，也會(huì)造成諸多耐藥性病原體的產(chǎn)生，使進(jìn)一步的防治工作變得復(fù)雜。核酸疫苗的出現(xiàn)開(kāi)辟了疫苗學(xué)的新領(lǐng)域，但還存在著免疫效果不穩(wěn)定和安全性等問(wèn)題。因此，研制安全、穩(wěn)定、特效的疫苗仍是今后的努力方向。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，淋巴囊腫病毒LCDV-1、LCDV-C基因組全序列的測(cè)定為研究工作帶來(lái)新的生機(jī)。利用世界各大數(shù)據(jù)庫(kù)(GenBank／EMBL／DDBS)中海量的生物信息資源，并結(jié)合各種實(shí)驗(yàn)手段，將大大加速了解淋巴囊腫病毒的基因組成及功能，使闡明LCDV感染的分子機(jī)制和獲得LCDV與宿主細(xì)胞相互作用的關(guān)鍵因素成為可能。90年代興起的人類基因組計(jì)劃(GHP)，積極推動(dòng)了基因克隆技術(shù)的發(fā)展，相繼出現(xiàn)了數(shù)種基于消減雜交策略的基因克隆方法。張義兵等以紫外線滅活的草魚(yú)出血病病毒(GCHV)誘導(dǎo)細(xì)胞，構(gòu)建魚(yú)類細(xì)胞抗病毒基因差減cDNA文庫(kù)，并從文庫(kù)中分離鑒定多種抗病毒和／或免疫相關(guān)基因。因此，可以利用抗病基因進(jìn)行抗病育種，這也是魚(yú)類疾病防預(yù)的一種有效途徑。

（參考文獻(xiàn)略）