養(yǎng)殖大菱鲆細(xì)菌性腹水病及其防治方法研究進(jìn)展

養(yǎng)殖大菱鲆細(xì)菌性腹水病及其防治方法研究進(jìn)展

黃華 張建柏 徐曉瑩 王鶴 王力勇 高雁 段鈺

(煙臺市海洋經(jīng)濟(jì)研究院，山東煙臺 264000)

大菱鲆(Scophthalmusmaximus)隸屬于鰈形目(Pleuronectiformes)、鲆科(Bothidae)、菱鲆屬(Scophthalmus)，是原產(chǎn)于歐洲的冷水性底棲海水魚類[1]。大菱鲆于1992年被引入我國，因其營養(yǎng)豐富、經(jīng)濟(jì)價值高，逐漸成為我國北方重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類[2]。隨著養(yǎng)殖集約化、規(guī)?；牟粩喟l(fā)展，大菱鲆病害頻發(fā)，嚴(yán)重影響了該產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。其中，腹水病是在大菱鲆苗期和養(yǎng)成期都會暴發(fā)的1種疾病，該病發(fā)生頻率及死亡率較高[3]。據(jù)王嵐等[4]報道，大菱鲆腹水病的病原為細(xì)菌，未發(fā)現(xiàn)病毒和寄生蟲。誘發(fā)大菱鲆細(xì)菌性腹水病的病因很多，如水質(zhì)變化、飼料質(zhì)量、魚體自身免疫力、藥物使用不合理等[5]。本文綜述了養(yǎng)殖大菱鲆細(xì)菌性腹水病的臨床癥狀、流行特點、發(fā)病原因以及預(yù)防治療方法的研究進(jìn)展，以期為大菱鲆細(xì)菌性腹水病的防治提供參考。

1 臨床癥狀

通過觀察臨床癥狀可以初步診斷大菱鲆是否患病?；几顾〉聂~主要表現(xiàn)為不集群、行動遲緩、攝食能力減弱或不攝食等，最典型的癥狀是腹部隆起[4]。觀察患病初期的大菱鲆可發(fā)現(xiàn)，其腹部膨大，手感很硬，用力擠壓會有液體流出，嚴(yán)重時肛門紅腫外翻，鰭部出血，腹部凹陷，內(nèi)臟團(tuán)萎縮?；疾〉拇罅怫一静粩z食，死亡率高達(dá)80%以上[2,4,6]。解剖觀察發(fā)現(xiàn)，病魚腹腔內(nèi)有微黃泛紅黏稠的液體，腸內(nèi)有不同程度的積液，胃部出血，腸壁發(fā)炎，肝臟、腎臟腫大[2,4,6]。

圖1 患腹水病的養(yǎng)殖大菱鲆[7]

2 流行特點

細(xì)菌性腹水病流行區(qū)域很廣，我國沿海各省市的大菱鲆養(yǎng)殖區(qū)，如天津[2]，遼寧大連[8]，山東煙臺[4]、威海[4]、青島[9]，河北滄州[6]等地區(qū)均有報道。該病一年四季都會暴發(fā)，尤其在8、9月份高水溫期(18～20 ℃)病害更為嚴(yán)重，是大菱鲆工廠化養(yǎng)殖中危害最嚴(yán)重的病害之一，一旦發(fā)病，死亡率高達(dá)80%以上[8,10]。

3 發(fā)病原因

據(jù)報道，在育苗場的水體、投喂的活餌以及大菱鲆的腸道中都曾檢測出大菱鲆弧菌(Vibrioscophthalmi)。該弧菌是大菱鲆幼苗期腸道中占優(yōu)勢數(shù)量的1種細(xì)菌，但在養(yǎng)殖池底沉積物中基本檢測不到。正常情況下大菱鲆弧菌沒有致病性[11-12]。并非所有存在于養(yǎng)殖環(huán)境和魚體中的大菱鲆腹水病病原菌都能致病，有的是條件致病菌，只有當(dāng)魚體免疫力、水質(zhì)環(huán)境、飼料等條件發(fā)生變化時才易引發(fā)疾病。

3.1 水質(zhì)變化

多數(shù)細(xì)菌性疾病是通過水體傳播的，大菱鲆實現(xiàn)健康養(yǎng)殖的前提是保障良好的水質(zhì)環(huán)境[13]。大菱鲆是底棲魚類，水質(zhì)環(huán)境是影響其健康的重要因素之一。大菱鲆養(yǎng)殖過程中，水體中殘留的餌(飼)料、排泄物等有機碎屑日積月累沉積在水底，極易滋生病原菌。

3.2 飼料質(zhì)量

養(yǎng)殖過程中若選用的飼料營養(yǎng)成分不全面、營養(yǎng)比例不均衡，會導(dǎo)致大菱鲆營養(yǎng)缺乏，免疫力下降，易受病原菌侵染，從而引發(fā)細(xì)菌性腹水病。有些含有野雜魚粉的飼料，由于原料無法保障新鮮度，可能攜帶病原菌(見表1)，投喂這種飼料也容易誘發(fā)細(xì)菌性腹水病[14-15]。另外，養(yǎng)殖戶自制的濕飼料如保存不當(dāng)容易腐敗變質(zhì)，且黏合性不易控制，投喂后易潰散，污染水體環(huán)境。

表1 野雜魚攜帶細(xì)菌情況調(diào)查結(jié)果[15]

3.3 魚體應(yīng)激反應(yīng)

大菱鲆受到較長時間、連續(xù)性刺激時，無法正常攝食，魚體的免疫力容易下降，此時若養(yǎng)殖環(huán)境發(fā)生變化，魚體極易感染病原菌。養(yǎng)殖過程中的分池倒池、不當(dāng)清池、飼料轉(zhuǎn)換、養(yǎng)殖水體混濁、溶解氧過低等都易引發(fā)魚體的應(yīng)激反應(yīng)[6,16]。例如某地大菱鲆養(yǎng)殖場暴發(fā)腹水病，原因是道路施工及雨水污染造成了養(yǎng)殖水體渾濁，雖經(jīng)及時治療，仍造成了20%的死亡率[16]。

3.4 感染病原菌

3.4.1 病原菌種類

目前的研究發(fā)現(xiàn)，從患腹水病的大菱鲆中檢測出的細(xì)菌有哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)[4]、嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)[5]、遲鈍愛德華氏菌(Edwardsiellatarda)[4,5,8,17]、大菱鲆弧菌(V.scophthalmi)[4,9]、溶藻弧菌(V.alginolytious)[14,18-20]、鰻弧菌(V.anguillarum)[5,21]、假交替單胞菌(Pseudoalteromonasespejiana)[4,14]、鯊魚弧菌(V.carchariae)[9]、殺魚愛德華氏菌(E.piscicida)[22]、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[20]等。

3.4.2 病原菌分離鑒定方法

通過臨床癥狀，選擇具有腹水病典型癥狀的患病大菱鲆進(jìn)行細(xì)菌分離。在無菌條件下進(jìn)行解剖，選取病魚的腹水、肝臟、腎臟等病灶部位，用勻漿器混合勻漿，用接種環(huán)蘸取接種于2216E瓊脂平板培養(yǎng)基及TCBS(胰蛋白胨大豆肉湯)瓊脂平板培養(yǎng)基上[2,4,17]，28 ℃下培養(yǎng)24 h后，挑取優(yōu)勢單一菌落進(jìn)行平板劃線，直至獲得純培養(yǎng)的菌落。再對分離的細(xì)菌進(jìn)行生理生化特性檢驗、人工感染試驗及分子生物學(xué)鑒定。鑒定大菱鲆腹水病病原菌可采用16S rDNA基因序列分析[9,23]。

3.5 藥物使用不當(dāng)

濫用抗生素會使各類致病菌產(chǎn)生耐藥性[4]，使用不合理藥物還會對魚體內(nèi)臟組織造成不同程度的損傷[24]。自從相關(guān)部門頒布了漁用禁用藥及休藥期等規(guī)定后，對禁用藥的管制措施進(jìn)一步加大，濫用抗生素的現(xiàn)象得以好轉(zhuǎn)，但耐藥菌仍普遍存在。

4 預(yù)防方法

4.1 選用健康苗種

選擇健康的苗種是養(yǎng)殖成功的首要條件。健康苗種的選擇標(biāo)準(zhǔn)是體色正常、規(guī)格一致、體表無傷、發(fā)育正常、游動有力、攝食活躍等。引進(jìn)苗種時要嚴(yán)格實施檢驗檢疫，避免將帶病苗種投入養(yǎng)殖區(qū)[13]。

4.2 保持良好水質(zhì)

水源水質(zhì)要符合《漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》(GB 11607—1989)的要求，養(yǎng)殖水質(zhì)應(yīng)符合《無公害食品 海水養(yǎng)殖用水水質(zhì)》(NY 5052—2001)的要求。養(yǎng)殖用水要進(jìn)行砂濾—消毒—調(diào)溫的預(yù)處理，即先采用砂濾去除水體中的大型寄生蟲和有機碎屑，然后全池潑灑漂白粉、二氧化氯、二氧異氰脲酸鈉等氯制劑進(jìn)行消毒，有條件的可選擇用紫外線或臭氧裝置消毒，再將水溫調(diào)節(jié)到所需的溫度。養(yǎng)殖日常管理要監(jiān)測水質(zhì)、水溫，做好換水、清池和消毒工作。養(yǎng)殖水溫通?？刂圃?7～19 ℃。夏季多雨季節(jié)，采用混合自然海水養(yǎng)殖或使用地下鹵水養(yǎng)殖的要注意鹽度變化[13]。

4.3 選擇優(yōu)質(zhì)飼料

選購飼料時要充分考慮飼料的營養(yǎng)成分搭配，選用相對有質(zhì)量保障的品牌飼料。自制飼料時要確保加工過程清潔無污染，飼料營養(yǎng)要均衡。投喂野雜魚要保證新鮮干凈，最好去除內(nèi)臟后再投喂。飼料要存放于干燥通風(fēng)的環(huán)境中，有條件的放置在冷庫中保存[13]。

4.4 免疫預(yù)防

疫苗接種是防治魚類細(xì)菌性疾病安全、環(huán)保、有效的方法[25-26]。

張麗等[27]采用0.5%福爾馬林滅活的方法制備了大菱鲆遲緩愛德華氏菌(即遲鈍愛德華氏菌)福爾馬林滅活疫苗，注射接種疫苗的大菱鲆對腹水病的免疫保護(hù)率(RPS)為70%，浸泡接種疫苗的大菱鲆對腹水病的RPS為35%。華東理工大學(xué)科研團(tuán)隊研究了遲鈍愛德華氏菌的基因組和致病機制，采用高效疫苗分子設(shè)計和評價的關(guān)鍵技術(shù)，研制出針對遲鈍愛德華氏菌的“大菱鲆遲鈍愛德華氏菌活疫苗”(EIBAV1株)，于2016年獲得獸藥產(chǎn)品批準(zhǔn)文號并正式投產(chǎn)，目前已在遼寧、山東、河北等我國大菱鲆養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)開展了規(guī)?；瘧?yīng)用[28]。

有學(xué)者進(jìn)行了鰻弧菌疫苗接種大菱鲆的免疫效果研究[29-34]，優(yōu)化了大菱鲆鰻弧菌滅活疫苗的生產(chǎn)工藝條件[35-36]，制備的滅活疫苗具有良好的安全性及效力，可用于大菱鲆鰻弧菌病的預(yù)防。肖鵬等[29]進(jìn)行了鰻弧菌油乳化二價乳化疫苗對養(yǎng)殖大菱鲆免疫應(yīng)答及免疫效果的研究，結(jié)果表明，口服乳化疫苗的大菱鲆對鰻弧菌M3、SMP1(為不同血清亞型菌株)的RPS分別為100%、50%，而口服未乳化疫苗大菱鲆的RPS分別為57.9%、0%。李杰等[30]以鰻弧菌O1血清型VAM003株和O2血清型VAM007株為抗原制備了福爾馬林滅活二價疫苗，該疫苗對大菱鲆的RPS為27%～60%。丁山等[31]制備了鰻弧菌O1、O2和O3血清型菌株的三價滅活疫苗，RPS最高可達(dá)100%，抗體持續(xù)期大于150 d，有效免疫保護(hù)期(RPS>70%)大于120 d。

曹宏梅等[32]制備的鰻弧菌和溶藻弧菌二聯(lián)疫苗對大菱鲆鰻弧菌和溶藻弧菌的RPS分別為83.52%和83.24%。鄧楠楠[33]制備了大菱鲆細(xì)菌性疾病五聯(lián)佐劑疫苗，對鰻弧菌、大菱鲆弧菌、遲鈍愛德華氏菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌的RPS分別為70.0%、87.5%、85.7%、75.0%、77.8%。劉瑞等[34]采用基因工程的方法，制備了副溶血弧菌tdh2基因和鰻弧菌ompU基因二聯(lián)DNA疫苗，經(jīng)DNA疫苗免疫的大菱鲆對副溶血弧菌感染的RPS為100%，對鰻弧菌感染的RPS為35%。

5 治療方法

當(dāng)大菱鲆確診患細(xì)菌性腹水病后，要及時清理死亡個體并進(jìn)行銷毀，對病魚采取隔離措施，嚴(yán)格消毒，防止二次傳染。同時可通過降溫的方式控制病原菌的增殖速度，將水溫控制在14～15 ℃，但需注意水溫的日變幅不能過大，避免刺激魚體產(chǎn)生應(yīng)激。日常管理時應(yīng)減少投飼量和日投喂次數(shù)，使大菱鲆處在六七分飽的狀態(tài)。

現(xiàn)代水生動物病害防控技術(shù)發(fā)展日新月異，但藥物仍是治療患病動物的主要手段[37]。藥物選擇上，可選擇殺菌藥物進(jìn)行藥浴，每立方米水體加鹽酸土霉素20 g和福爾馬林200 mL，每天1次，每次浸泡2 h，連續(xù)3～5 d[13]。口服法治療可選用氨芐青霉素或土霉素，將藥拌和在飼料中，用蛋清包裹風(fēng)干后投喂，用藥量為每天每千克魚100～150 mg[13]。中草藥可以有效減少養(yǎng)殖魚類病害的發(fā)生[38]。實踐證明，中草藥對大菱鲆腹水病具有較好的預(yù)防作用[6]。李華等[39]通過將牛膝、板藍(lán)根、甘草、陳皮、肉桂、麥芽、神曲等7味中草藥制成的復(fù)方中草藥制劑添加于基礎(chǔ)飼料中，連續(xù)投喂大菱鲆，證實復(fù)方中草藥對大菱鲆具有一定的免疫調(diào)節(jié)及增強作用，可顯著提高大菱鲆的非特異性免疫力，對魚抵抗病原菌感染具有一定的增強作用。但是，中草藥對大菱鲆腹水病的治療效果不是很明顯，為達(dá)到更好的效果，還應(yīng)使用國家允許的有質(zhì)量保證的抗菌類藥物進(jìn)行治療[16]。

6 結(jié)語

在大菱鲆養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展中，有養(yǎng)殖業(yè)者為實現(xiàn)利益最大化，過度增加養(yǎng)殖密度，忽視了水產(chǎn)疾病防控，結(jié)果導(dǎo)致大菱鲆發(fā)生腹水病，而治療過程中的藥物濫用和殘留等又會導(dǎo)致水產(chǎn)品安全問題，海域生態(tài)環(huán)境也會因此遭到破壞[40]。

魚類生活在水中，一旦生病，在治療及隔離上均比較困難，因而死亡率高，造成的損失較大[41]。因此，加強對大菱鲆腹水病的研究，從源頭上進(jìn)行防控顯得尤為重要。在養(yǎng)殖過程中，只要提高防病意識，做好防病工作，可以大大減少病害的發(fā)生，降低治療成本。腹水病是養(yǎng)成期大菱鲆的常見疾病，細(xì)菌是導(dǎo)致腹水病的病原[9]。大菱鲆細(xì)菌性腹水病發(fā)病初期是內(nèi)臟器官產(chǎn)生病變，中后期則全身感染。病魚腹部膨大癥狀明顯，極易觀察和診斷[42]。一旦發(fā)現(xiàn)大菱鲆患細(xì)菌性腹水病，可選擇中西醫(yī)結(jié)合的方法進(jìn)行對癥治療，同時在治療過程中要注意用藥量及休藥期等問題。