小瓜蟲病流行病學調查及防治

［摘要］小瓜蟲是淡水養(yǎng)殖中致死率最高的寄生原蟲之一，本文首先分析了小瓜蟲病的發(fā)病癥狀，并簡述了該病的發(fā)現、流行及分布狀況，從其起源到地方流行及全世界性蔓延情況入手，總體分析了小瓜蟲病的流行原因及危害。在小瓜蟲病的防治方面，依次從物理方法、化學方法和生物疫苗治療三個方面入手，重點分析了這三種方法的利弊，通過比較，作者認為基因工程疫苗防治小瓜蟲病逐步成為研究熱點，具有廣闊的發(fā)展空間，在繼續(xù)加大力度篩選無公害有效藥物的同時，應大力開展基因工程疫苗研究，防治一體。盡量降低其對食用魚和觀賞魚養(yǎng)殖的危害，力爭徹底治愈小瓜蟲病。

［關鍵詞］小瓜蟲??；流行及分布；疫苗防治

小瓜蟲(IchthyoPhthirius multifiliis)隸屬原生動物門，纖毛綱，全毛目，凹口科，小瓜蟲屬。是一類寄生在魚類體表的纖毛原蟲，其繁殖力強，感染迅速，并對寄主無選擇性。幾乎所有淡水魚類都能感染，并導致大量苗種甚至成魚死亡，是致死率最高的寄生原蟲之一。為更好的了解小瓜蟲發(fā)病及防治現狀，本文就小瓜蟲病流行及防治情況做一綜述。

1 小瓜蟲病流行病學調查

1.1 小瓜蟲病癥狀

小瓜蟲生活史分為成蟲期、幼蟲期和包囊期。幼蟲期分為不具感染能力的非感染性幼蟲期和具感染能力的感染性幼蟲期。感染性幼蟲前端有鉆孔器，后端有尾鞭毛，可以侵入魚體，一般寄生在魚皮膚和鰓絲，也曾發(fā)現在腹膜中寄生。魚類感染小瓜蟲后，多數病魚表現出浮躁、食欲減退、反應遲緩、離群、上浮、間歇性亂串等行為。從感染到死亡，可分為早、中、晚三個時期。早期癥狀不明顯，少數個體尾鰭和臀鰭有充血現象；中期小瓜蟲寄生刺激魚體組織增生，在體表和鰓上形成白色小包囊，（因此，小瓜蟲病又被稱為“白點病”），各鰭上充血現象明顯；晚期由于蟲體不停刺激，引起鰓絲上粘液細胞大量分泌粘液，造成魚體呼吸、排泄和滲透機能破壞而導致死亡。解剖學觀察，感染小瓜蟲病魚鰓絲腫脹變形，鰓上皮脫離。顯微鏡檢測病魚體表粘液，蟲體呈圓形，作阿米巴樣的滾動運動。蟲體中央有“C”形核。

1.2 小瓜蟲病的發(fā)現、流行及分布

小瓜蟲病是世界流行性寄生蟲病，1869年Hilgendorf和Paulicki首次描述該纖毛蟲的生命周期及其分類學地位。自1876年法國人Fouquet將該病原正式命名為多子小瓜蟲(Ichthyophthirius Multifiliis)。

研究表明該病起源于亞洲，最初在遠東地區(qū)呈地方性流行；但受人類活動的影響，中世紀時期，隨著鯉魚養(yǎng)殖規(guī)模的不斷壯大和金魚的進口，該病傳入歐洲、美國等其它國家。直到18世紀，由于金魚的大量進口，該病在南非國家也呈普遍流行趨勢。病原多子小瓜蟲蔓延至世界各地，甚至在熱帶和亞熱帶地區(qū)都發(fā)現了其蹤跡。我國魚類養(yǎng)殖產業(yè)也深受其害。

“養(yǎng)殖觀賞魚這么長時間，要問我什么魚最好養(yǎng)？不是魚，是小瓜蟲”。這是一位具有多年觀賞魚養(yǎng)殖經驗的專家發(fā)出的感慨。可見，在觀賞魚養(yǎng)殖領域，小瓜蟲的危害不容小覷。究其原因，可能是養(yǎng)殖觀賞魚較池塘養(yǎng)魚需要更頻繁的換水，新舊水之間產生的溫差導致小瓜蟲病暴發(fā)。

2 小瓜蟲病防治

目前，小瓜蟲病的防治主要從物理方法、化學方法和生物疫苗治療三個方面入手。三種方法各有利弊，在應對不同水體，不同發(fā)病魚群、不同發(fā)病時機時需要綜合考慮，協(xié)調應用。

2.1 物理防治方法

物理方法重點在于從水溫、水體pH值、鹽度等方面改善養(yǎng)殖環(huán)境，從水源、魚池建設、魚苗投放等方面嚴格把關。早在1947年就有學者利用提升鹽度來防治小瓜蟲病。由于小瓜蟲不能感染生活在堿性水域中的魚類，因此，也可以通過提高水體pH值的方法控制小瓜蟲病的蔓延。條件允許情況下，如水族箱環(huán)境，可以將水溫提高到18℃以上，迫使小瓜蟲自行脫離魚體。

2.2 化學藥物防治方法

在充分做好物理防治的同時，結合化學藥物治療是目前常用的治療小瓜蟲病的方法。用于防治小瓜蟲病的藥物很多，但用藥效果大都不太理想或不穩(wěn)定。能有效殺滅小瓜蟲的藥物如孔雀石綠、硝酸亞汞、醋酸亞汞等由于具有明顯的致癌、致畸特性，已被禁止用于水產疾病治療。而大多數藥物，諸如福爾馬林、高錳酸鉀、過氧乙酸、硫酸銅、辣椒煎水等皆是對自由生活階段的蟲體有殺滅作用，但對寄生階段的蟲體有殺滅作用的藥物卻很少。究其原因是小瓜蟲寄生魚體，刺激魚體表皮增生形成很厚的囊泡，藥物很難透過。在美國，有3種化學藥品可合法地用于防治養(yǎng)殖的食用魚和魚卵寄生蟲病，即福爾馬林、食鹽和醋酸，但因其價格原因，這3種化學藥品僅適用于小水體。由于化學藥物不僅對魚體、人體和環(huán)境不利，對小瓜蟲殺滅作用也存在一定的缺陷，僅能殺滅自由生活的和寄生于魚體體表還未侵入皮膚的小瓜蟲，一旦小瓜蟲進入宿主寄生階段就失去了藥物的作用。因此，對小瓜蟲病治療的用藥時機也非常重要，黎明前后為幼蟲孵化期，此時用藥可以起到事半功倍的效果。由于小瓜蟲對長期接觸的化學藥物會產生耐藥性，常規(guī)藥物對小瓜蟲的殺滅效果會越來越差。因此，采用免疫防治是替代化學藥物預防小瓜蟲病更為經濟、環(huán)保和有效的方法。

2.3 生物疫苗防治方法

隨著國家對水產品質量安全重視程度的增加，迫切要求大力發(fā)展生物疫苗防治研究。目前應用于小瓜蟲防治的疫苗主要包括全蟲疫苗和基因工程疫苗。全蟲疫苗是直接用活體小瓜蟲或甲醛滅活小瓜蟲全蟲制備的疫苗。但滅活疫苗免疫保護效果不顯著，Burkart認為，可能是因為殺死小瓜蟲的過程（甲醛滅活）改變相關保護性抗原的空間結構和性質造成的。制備活疫苗首先要解決全蟲供應問題，這就要求對小瓜蟲進行人工培養(yǎng)，目前應用較廣泛的人工培養(yǎng)方法是實驗室傳代，但這一方法也面臨著隨著傳代次數的增加，感染力下降的問題。在人工培養(yǎng)方法尚不成熟的情況下，也有學者嘗試用其他寄生蟲刺激魚類的非特異性免疫來抵抗小瓜蟲感染的研究，以四膜蟲應用居多，Govern、Dickerson等和Houghton、Sign等都做了類似的免疫試驗，存活率有所改觀。

隨著基因工程疫苗研究日漸火熱，用基因工程疫苗防治小瓜蟲病逐步成為研究熱點。目前開發(fā)合適抗原決定簇的研究皆圍繞著小瓜蟲表面抗原即抑動抗原展開。1997年，He等采用大腸桿菌系統(tǒng)表達了抑動抗原融合蛋白，但由于大腸桿菌的表達產物缺少糖基化修飾，產物不能形成正確的空間結構，免疫效果不理想。Lin等采用哺乳動物COS-7細胞表達抑動抗原，其表達產物蛋白雖能形成正確的折疊，但抑動抗原不能錨定在細胞膜表面，免疫效果依然不理想。而四膜蟲與小瓜蟲同屬膜口目纖毛蟲，它們的表達系統(tǒng)十分相似，適用于表達抑動抗原基因。由于四膜蟲普遍存在與淡水生態(tài)系統(tǒng)，且易于實驗室培養(yǎng)，將四膜蟲作為載體制成重組疫苗用于預防小瓜蟲病被認為具有良好的發(fā)展前景。Gaertig等在四膜蟲中表達了小瓜蟲抑動抗原。通過Western blotting分析，證實重組體中包含抑動抗原基因，并且反應效果不錯。

通過間接免疫熒光抗體試驗證明，轉基因的抑動抗原蛋白定位在四膜蟲表面。柯翎等應用四膜蟲表達了小瓜蟲抑動抗原基因，通過Western Blotting證實重組多子小瓜蟲抑動抗原免疫原性與多子小瓜蟲抑動抗原相似。接種該蛋白后可誘導魚體產生免疫保護性,這也表明四膜蟲表達系統(tǒng)相對于大腸桿菌表達系統(tǒng)更適合小瓜蟲抑動抗原的表達。

3 展望

對魚類多子小瓜蟲病的研究至今已有100余年，但至今無有效藥物可用于治療，小瓜蟲病成為水產養(yǎng)殖業(yè)最為頑固的疾病之一。筆者認為小瓜蟲病暴發(fā)的原因主要包括水質、水溫、飼料等三個方面。對于池塘養(yǎng)殖或山泉水養(yǎng)殖場，污水匯入養(yǎng)殖水體是造成小瓜蟲病暴發(fā)的重要原因。對于養(yǎng)殖觀賞魚，其新舊水水溫差以及投喂飼料品種均對小瓜蟲病暴發(fā)有顯著影響，調查顯示投喂顆粒飼料較投喂天然餌料暴發(fā)小瓜蟲病的幾率顯著降低，同時嚴格控制新舊水水溫一致也可明顯減少小瓜蟲病的暴發(fā)。對小瓜蟲病的防治研究還應雙管齊下，即加強對無公害有效藥物的篩選，又加大力度開展基因工程疫苗研究，防治一體。盡量降低其對食用魚和觀賞魚養(yǎng)殖的危害，力爭徹底治愈小瓜蟲病。