魚(yú)病的顯微鏡檢查方法和步驟

用生產(chǎn)第一線的水產(chǎn)養(yǎng)殖體會(huì)

來(lái)助推漁業(yè)發(fā)展提振產(chǎn)業(yè)效益

用顯微鏡或解剖鏡檢查魚(yú)病，稱為鏡檢。鏡檢是對(duì)目檢時(shí)所確定的病變部位進(jìn)行的更深化一步的工作。鏡檢的取材方法和步驟與目檢差不多，即先外部后內(nèi)部。

一、檢查方法

檢查比較大的病原體，如蠕蟲(chóng)、軟體動(dòng)物幼蟲(chóng)、寄生甲殼動(dòng)物等，宜用雙目解剖鏡。檢查比較小的寄生蟲(chóng)，需用顯微鏡。一般采用下述兩種方法檢查：

1、玻片壓縮法。

玻片可用普通的透明玻璃為原料，將原料切割成12×6厘米大小的方塊，邊緣磨平即可。

檢查時(shí)將要檢查的器官或組織的一部分，或?qū)Ⅲw表刮下的粘液、腸道中取出的內(nèi)含物等。

放在玻片上，滴入適量的清水或生理鹽水，再用另一玻片將其壓成透明的薄層，然后放在顯微鏡或解剖鏡下檢查。

檢查時(shí)要把玻片從左至右或從右至左慢慢地移動(dòng)，仔細(xì)觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有寄生蟲(chóng)或其胞囊，以及某些可疑的病象時(shí)，應(yīng)停止移動(dòng)，集中視力，將上面的玻片一點(diǎn)一點(diǎn)地平行移開(kāi)(不要影響兩玻片之間的檢查物)，用鑷子、解剖針或微吸管等，將要取出的寄生蟲(chóng)或出現(xiàn)可疑病象的組織從薄層中取出，分別放入盛有清水或生理鹽水的培養(yǎng)皿中，以待進(jìn)一步處理(對(duì)鰓的檢查不宜用此法)。

2、載玻片法。

適用于低倍或高倍顯微鏡檢查。方法是用小剪刀或鑷子取一小塊組織或一小滴內(nèi)含物放在一干凈的載玻片上，滴入一小滴清水或生理鹽水，蓋上干凈的蓋玻片，輕輕地壓平后先用低倍鏡觀察，若發(fā)現(xiàn)有寄生蟲(chóng)或可疑現(xiàn)象，再用高倍鏡觀察。

二、檢查步驟

鏡檢是在目檢的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，在目檢時(shí)要將檢查的病魚(yú)編號(hào)并記錄時(shí)間、地點(diǎn)、魚(yú)的種名、大小(重量)、年齡和依次目檢時(shí)發(fā)現(xiàn)的病癥與疑象，對(duì)需要鏡檢的組織器官或病象再依次鏡檢。

1．粘液。

粘液中往往有許多肉眼看不到的寄生蟲(chóng)，可用解剖刀刮取體表粘液，用顯微鏡或解剖鏡檢查。

2．鼻腔。

用吸管吸取少許清水注入鼻孔中，再將液體吸出，放入培養(yǎng)皿中(要多吸幾次)，用低倍顯微鏡或解剖鏡觀察。

3．鰓。

目檢后用剪刀從左右鰓各剪取第一鰓兩端和中間三個(gè)點(diǎn)的組織為代表，每點(diǎn)看2個(gè)視野。檢查粘細(xì)菌可取鰓腐爛處旁邊的組織，取下后放載玻片上，加清水靜置10—15分鐘后檢查(因?yàn)檎臣?xì)菌離開(kāi)寄主后會(huì)聚集在一起)，容易看到粘細(xì)菌。

4．口腔。

用鑷子刮取上下顎的粘液在顯微鏡下檢查。若是檢查白頭白嘴病，刮下吻部周?chē)恼骋阂惨^(guò)10—15分鐘后再觀察。

5．腹腔。

剖開(kāi)魚(yú)體，取出所有內(nèi)臟后用生理鹽水自上而下沖洗腹腔，用平皿盛裝沖洗液，稍加攪動(dòng)，倒去上層清水，下沉水與沉淤物用吸管吸到載玻片上，逐次檢查。

6．消化道。

目檢后將腸道分為前、中、后三段，每段各取—點(diǎn)，用尖的剪在與腸平行的方向剪開(kāi)一個(gè)小切口，用鑷子從切口取一小滴內(nèi)含物放載玻片上。滴上一小滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下每個(gè)部分同時(shí)檢查兩次。

7．肝臟。

目檢后用鑷子從肝上取少許組織放于載玻片上，蓋上蓋玻片輕輕壓平，在低倍和高倍顯微鏡下觀察。肝的每一葉要檢查兩片。

8．膽囊。

取膽囊時(shí)要特別小心，切勿弄破，取出后放培養(yǎng)皿中，目檢后取一部分膽囊壁放載玻片上，蓋上蓋玻片，壓平，放顯微鏡下觀察。檢查膽汁時(shí)用吸管吸取膽汁，在鏡下作載玻片法檢查。

9．肌肉。

剝?nèi)テつw并目檢后，先在前、中、后等部分取一小片肌肉放在載玻片上，蓋上蓋玻片，輕輕壓平，在顯微鏡下觀察，再用壓縮法檢查。

三、鏡下觀察病原體的計(jì)數(shù)方法

鏡檢時(shí)，除了解病原體的種類和對(duì)寄主的感染率(%)外，還要了解它們對(duì)寄主的感染強(qiáng)度，因而對(duì)每種病原體的數(shù)量要進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

其方法與標(biāo)準(zhǔn)是： 細(xì)菌：腸炎、爛鰓、蛀鰭、赤皮病、癤瘡等按表現(xiàn)的癥狀，用文字描述。真菌：水霉、鰓霉，按照對(duì)器官的比例大小，用文字和數(shù)字說(shuō)明。原生動(dòng)物：這類病原體用肉眼難于觀察到，鏡下觀察一般也不可能逐個(gè)數(shù)清，因而采用估計(jì)法以“+”來(lái)表示，“+”表示有，“++”表示多，“+++”表示很多。

其中：

鞭毛蟲(chóng)、變形蟲(chóng)和孢子蟲(chóng)的孢子，在高倍鏡一個(gè)視野下有1—20個(gè)蟲(chóng)體記“+”號(hào)，20—5b個(gè)蟲(chóng)體記；“++”號(hào)，蟲(chóng)體51個(gè)以上記“+++”號(hào)，并注明是以孢子計(jì)算的。

纖毛蟲(chóng)、吸管蟲(chóng)莊低倍鏡一個(gè)視野下有1—50個(gè)記“+”號(hào)，51—100個(gè)記“++”號(hào)，100個(gè)以上記“+++”號(hào)。

小瓜蟲(chóng)可按孢子蟲(chóng)的標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)。

以上每—種統(tǒng)計(jì)數(shù)，都以任取放大同倍數(shù)的3個(gè)視野中觀察到蟲(chóng)體的均值表示。

四、鏡檢須注意的事項(xiàng)

1．要用活的或剛死的魚(yú)檢查。

由于魚(yú)的死亡，寄生蟲(chóng)也會(huì)很快隨著死去，且死后往往會(huì)改變形狀或崩解腐爛，使原來(lái)所表現(xiàn)的癥狀無(wú)法文法辨別。

2．檢查的魚(yú)要保持濕潤(rùn)。

若魚(yú)體干燥，體表的寄生蟲(chóng)會(huì)很快死去，癥狀也變得不明顯或無(wú)法辨認(rèn)。解剖的魚(yú)體和取出的器官也不能干燥，最好用濕布或濕而潔凈的白紙蓋在上面，保持一定的濕潤(rùn)狀態(tài)。

3．內(nèi)臟檢查解剖時(shí)要保持器官完整。

要小心的將各器官逐一取出并分開(kāi)放在解剖盤(pán)或其它干凈的器皿中；對(duì)腸道、膽囊、膀胱等器官更要注意，不能有破損。

4．用過(guò)的工具要洗凈后再用。

每檢查完—個(gè)器官時(shí)，要將使用過(guò)的剪刀、鑷子和吸管等工具洗干凈后，再用于另一器官的檢查。