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魚(yú)病的顯微鏡檢查方法和步驟
用生產(chǎn)第一線的水產(chǎn)養(yǎng)殖體會(huì)
來(lái)助推漁業(yè)發(fā)展提振產(chǎn)業(yè)效益
用顯微鏡或解剖鏡檢查魚(yú)病,稱為鏡檢。鏡檢是對(duì)目檢時(shí)所確定的病變部位進(jìn)行的更深化一步的工作。鏡檢的取材方法和步驟與目檢差不多,即先外部后內(nèi)部。
一、檢查方法
檢查比較大的病原體,如蠕蟲(chóng)、軟體動(dòng)物幼蟲(chóng)、寄生甲殼動(dòng)物等,宜用雙目解剖鏡。檢查比較小的寄生蟲(chóng),需用顯微鏡。一般采用下述兩種方法檢查:
1、玻片壓縮法。
玻片可用普通的透明玻璃為原料,將原料切割成12×6厘米大小的方塊,邊緣磨平即可。
檢查時(shí)將要檢查的器官或組織的一部分,或?qū)Ⅲw表刮下的粘液、腸道中取出的內(nèi)含物等。
放在玻片上,滴入適量的清水或生理鹽水,再用另一玻片將其壓成透明的薄層,然后放在顯微鏡或解剖鏡下檢查。
檢查時(shí)要把玻片從左至右或從右至左慢慢地移動(dòng),仔細(xì)觀察,當(dāng)發(fā)現(xiàn)有寄生蟲(chóng)或其胞囊,以及某些可疑的病象時(shí),應(yīng)停止移動(dòng),集中視力,將上面的玻片一點(diǎn)一點(diǎn)地平行移開(kāi)(不要影響兩玻片之間的檢查物),用鑷子、解剖針或微吸管等,將要取出的寄生蟲(chóng)或出現(xiàn)可疑病象的組織從薄層中取出,分別放入盛有清水或生理鹽水的培養(yǎng)皿中,以待進(jìn)一步處理(對(duì)鰓的檢查不宜用此法)。
2、載玻片法。
適用于低倍或高倍顯微鏡檢查。方法是用小剪刀或鑷子取一小塊組織或一小滴內(nèi)含物放在一干凈的載玻片上,滴入一小滴清水或生理鹽水,蓋上干凈的蓋玻片,輕輕地壓平后先用低倍鏡觀察,若發(fā)現(xiàn)有寄生蟲(chóng)或可疑現(xiàn)象,再用高倍鏡觀察。
二、檢查步驟
鏡檢是在目檢的基礎(chǔ)上進(jìn)行的,在目檢時(shí)要將檢查的病魚(yú)編號(hào)并記錄時(shí)間、地點(diǎn)、魚(yú)的種名、大小(重量)、年齡和依次目檢時(shí)發(fā)現(xiàn)的病癥與疑象,對(duì)需要鏡檢的組織器官或病象再依次鏡檢。
1.粘液。
粘液中往往有許多肉眼看不到的寄生蟲(chóng),可用解剖刀刮取體表粘液,用顯微鏡或解剖鏡檢查。
2.鼻腔。
用吸管吸取少許清水注入鼻孔中,再將液體吸出,放入培養(yǎng)皿中(要多吸幾次),用低倍顯微鏡或解剖鏡觀察。
3.鰓。
目檢后用剪刀從左右鰓各剪取第一鰓兩端和中間三個(gè)點(diǎn)的組織為代表,每點(diǎn)看2個(gè)視野。檢查粘細(xì)菌可取鰓腐爛處旁邊的組織,取下后放載玻片上,加清水靜置10—15分鐘后檢查(因?yàn)檎臣?xì)菌離開(kāi)寄主后會(huì)聚集在一起),容易看到粘細(xì)菌。
4.口腔。
用鑷子刮取上下顎的粘液在顯微鏡下檢查。若是檢查白頭白嘴病,刮下吻部周?chē)恼骋阂惨^(guò)10—15分鐘后再觀察。
5.腹腔。
剖開(kāi)魚(yú)體,取出所有內(nèi)臟后用生理鹽水自上而下沖洗腹腔,用平皿盛裝沖洗液,稍加攪動(dòng),倒去上層清水,下沉水與沉淤物用吸管吸到載玻片上,逐次檢查。
6.消化道。
目檢后將腸道分為前、中、后三段,每段各取—點(diǎn),用尖的剪在與腸平行的方向剪開(kāi)一個(gè)小切口,用鑷子從切口取一小滴內(nèi)含物放載玻片上。滴上一小滴生理鹽水,蓋上蓋玻片,在顯微鏡下每個(gè)部分同時(shí)檢查兩次。
7.肝臟。
目檢后用鑷子從肝上取少許組織放于載玻片上,蓋上蓋玻片輕輕壓平,在低倍和高倍顯微鏡下觀察。肝的每一葉要檢查兩片。
8.膽囊。
取膽囊時(shí)要特別小心,切勿弄破,取出后放培養(yǎng)皿中,目檢后取一部分膽囊壁放載玻片上,蓋上蓋玻片,壓平,放顯微鏡下觀察。檢查膽汁時(shí)用吸管吸取膽汁,在鏡下作載玻片法檢查。
9.肌肉。
剝?nèi)テつw并目檢后,先在前、中、后等部分取一小片肌肉放在載玻片上,蓋上蓋玻片,輕輕壓平,在顯微鏡下觀察,再用壓縮法檢查。
三、鏡下觀察病原體的計(jì)數(shù)方法
鏡檢時(shí),除了解病原體的種類和對(duì)寄主的感染率(%)外,還要了解它們對(duì)寄主的感染強(qiáng)度,因而對(duì)每種病原體的數(shù)量要進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
其方法與標(biāo)準(zhǔn)是: 細(xì)菌:腸炎、爛鰓、蛀鰭、赤皮病、癤瘡等按表現(xiàn)的癥狀,用文字描述。真菌:水霉、鰓霉,按照對(duì)器官的比例大小,用文字和數(shù)字說(shuō)明。原生動(dòng)物:這類病原體用肉眼難于觀察到,鏡下觀察一般也不可能逐個(gè)數(shù)清,因而采用估計(jì)法以“+”來(lái)表示,“+”表示有,“++”表示多,“+++”表示很多。
其中:
鞭毛蟲(chóng)、變形蟲(chóng)和孢子蟲(chóng)的孢子,在高倍鏡一個(gè)視野下有1—20個(gè)蟲(chóng)體記“+”號(hào),20—5b個(gè)蟲(chóng)體記;“++”號(hào),蟲(chóng)體51個(gè)以上記“+++”號(hào),并注明是以孢子計(jì)算的。
纖毛蟲(chóng)、吸管蟲(chóng)莊低倍鏡一個(gè)視野下有1—50個(gè)記“+”號(hào),51—100個(gè)記“++”號(hào),100個(gè)以上記“+++”號(hào)。
小瓜蟲(chóng)可按孢子蟲(chóng)的標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)。
以上每—種統(tǒng)計(jì)數(shù),都以任取放大同倍數(shù)的3個(gè)視野中觀察到蟲(chóng)體的均值表示。
四、鏡檢須注意的事項(xiàng)
1.要用活的或剛死的魚(yú)檢查。
由于魚(yú)的死亡,寄生蟲(chóng)也會(huì)很快隨著死去,且死后往往會(huì)改變形狀或崩解腐爛,使原來(lái)所表現(xiàn)的癥狀無(wú)法文法辨別。
2.檢查的魚(yú)要保持濕潤(rùn)。
若魚(yú)體干燥,體表的寄生蟲(chóng)會(huì)很快死去,癥狀也變得不明顯或無(wú)法辨認(rèn)。解剖的魚(yú)體和取出的器官也不能干燥,最好用濕布或濕而潔凈的白紙蓋在上面,保持一定的濕潤(rùn)狀態(tài)。
3.內(nèi)臟檢查解剖時(shí)要保持器官完整。
要小心的將各器官逐一取出并分開(kāi)放在解剖盤(pán)或其它干凈的器皿中;對(duì)腸道、膽囊、膀胱等器官更要注意,不能有破損。
4.用過(guò)的工具要洗凈后再用。
每檢查完—個(gè)器官時(shí),要將使用過(guò)的剪刀、鑷子和吸管等工具洗干凈后,再用于另一器官的檢查。
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