都是出血，怎么分辨草魚(yú)“出血病”和“細(xì)菌性敗血癥”？陳昌福：采取兩種方法進(jìn)行治療

草魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）是一種生長(zhǎng)速度快、飼料來(lái)源比較廣，味道鮮美的淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)。但是，在草魚(yú)養(yǎng)殖過(guò)程中因?yàn)楦鞣N疾病頻發(fā)，導(dǎo)致養(yǎng)殖草魚(yú)的成活率往往比較低。尤其是在草魚(yú)魚(yú)種培育階段疾病發(fā)生比較多，由呼腸孤病毒（Reoviruses）引起的草魚(yú)出血?。╤emorrhagic disease of grass carp），嚴(yán)重時(shí)可以導(dǎo)致養(yǎng)殖草魚(yú)魚(yú)種100.0%死亡。

草魚(yú)出血病的主要病癥是，患病草魚(yú)各器官、組織有不同程度的充血、出血現(xiàn)象；體色暗黑，小的魚(yú)種在陽(yáng)光或燈光透視下，可見(jiàn)皮下肌肉充血、出血，病魚(yú)的口腔上下頜、頭頂部、眼眶周?chē)?、鰓蓋、鰓及鰭條基部都充血，有時(shí)眼球突出，剝除魚(yú)的皮膚，可見(jiàn)肌肉呈點(diǎn)狀或塊狀充血、出血，嚴(yán)重時(shí)全身肌肉呈鮮紅色，腸壁充血，但仍具韌性，腸內(nèi)無(wú)食物，腸系膜及周?chē)?、鰾、膽囊、肝、脾、腎也有出血點(diǎn)或血絲。

不過(guò)，草魚(yú)出血病主要在草魚(yú)魚(yú)種階段多發(fā)，對(duì)養(yǎng)殖草魚(yú)成魚(yú)的危害相對(duì)比較少。但是，最近在湖北省宜昌市、枝江市與當(dāng)陽(yáng)市某些養(yǎng)殖場(chǎng)的養(yǎng)殖草魚(yú)，出現(xiàn)了具有“出血病”較為典型疾病癥狀（圖1），并且導(dǎo)致了患病草魚(yú)比較多的死亡。

在尚不能確定導(dǎo)致草魚(yú)疾病原因究竟是由呼腸孤病毒引起的“出血病”，還是由致病性細(xì)菌引起的細(xì)菌性敗血癥的情況下，指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者采取了兩套防控疾病的方案。現(xiàn)將我們的防控方案與試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1患病草魚(yú)的來(lái)源

患病草魚(yú)主要由湖北省宜昌市、當(dāng)陽(yáng)市和枝江市水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)域的草魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)者，直接送到“陳昌福魚(yú)病防控實(shí)驗(yàn)室”，委托診斷患病草魚(yú)的疾病并提出治療草魚(yú)疾病的方案。

1.2致病性細(xì)菌菌株分離與純化

因?yàn)閼岩墒怯墒人畾鈫伟ˋeromonas hydrophila）等致病性細(xì)菌引起的細(xì)菌性敗血癥，在無(wú)菌條件下解剖患病草魚(yú)，從患病草魚(yú)的腎臟中分離致病性細(xì)菌，在腦心浸液瓊脂（BHIA）培養(yǎng)基平板上作劃線后，將接種分離細(xì)菌后的培養(yǎng)皿置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)36~48 h后，從生長(zhǎng)出菌落的平板中挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，獲取純化的分離菌株。共分離純化的8個(gè)優(yōu)勢(shì)菌株，將純化后的分離菌株置于4℃冰箱中保存，供作分離菌株對(duì)抗微生物藥物的藥物敏感性檢測(cè)。

1.3供試抗微生物藥物

采用市售17種抗微生物獸藥作為本試驗(yàn)中的供試藥物。供試藥物的名稱(chēng)與批號(hào)如表1所示。

1.4最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

依日本化學(xué)療法學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)法進(jìn)行。即首先將供試抗微生物藥物用適宜的容媒預(yù)溶后，用滅菌生理鹽水按照上述制劑中抗微生物藥物的含量，分別稀釋至1000~0.25mg/L的２倍稀釋的13個(gè)濃度。然后用腦心浸液培養(yǎng)基（BHI，Difco）將各濃度的藥物液稀釋10倍，從而使培養(yǎng)基中的各種藥物的濃度達(dá)到100.0~0.025mg/L的2倍稀釋的13個(gè)濃度。最后向每支盛有2.9 mL培養(yǎng)基的試管中加入0.1 mL濃度為1.2×10 6cfu/mL活菌液，在28℃條件下連續(xù)培養(yǎng)3d，經(jīng)肉眼觀察證實(shí)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)試管中的最低藥物濃度，即為某種抗微生物藥物對(duì)分離菌株的最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）。

1.5投喂酵母多糖調(diào)節(jié)養(yǎng)殖草魚(yú)的免疫機(jī)能

因?yàn)閼岩墒怯珊裟c孤病毒引起的病毒性出血病，對(duì)于從患病草魚(yú)腎臟中未分離到致病性菌株的養(yǎng)殖池塘，指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者采用安琪酵母股份有限公司生產(chǎn)的酵母多糖，按照每噸飼料中添加8.0kg的劑量，制備成含有酵母多糖的草魚(yú)飼料，連續(xù)投喂14d為一個(gè)療程。對(duì)于從患病草魚(yú)腎臟中分離到致病性細(xì)菌的養(yǎng)殖池塘，也動(dòng)員水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者采用在飼料中添加酵母多糖的措施。旨在調(diào)節(jié)養(yǎng)殖草魚(yú)自身的免疫系統(tǒng)功能，增強(qiáng)魚(yú)體自身免疫機(jī)能達(dá)到抵抗魚(yú)體內(nèi)致病性生物危害的目的。

2結(jié)果

2.1分離菌株對(duì)各種抗微生物藥物的最小抑菌濃度（MIC）

本實(shí)驗(yàn)室先后完成了從各地送來(lái)患病草魚(yú)體內(nèi)分離、純化的8個(gè)分離菌株的收集，利用這些分離菌株對(duì)17種供試抗微生物藥物獸藥制劑完成的藥物敏感性檢測(cè)結(jié)果如表2所示。從表2所示結(jié)果可以看出，分離菌株對(duì)有些抗微生物藥物的MIC檢測(cè)結(jié)果證明，致病性菌株已經(jīng)對(duì)其產(chǎn)生了比較強(qiáng)的耐藥性，而且也證明了有多個(gè)分離菌株已經(jīng)對(duì)供試抗微生物藥物獸藥制劑，產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。

2.2藥物的投喂與藥物治療效果

根據(jù)對(duì)17種抗微生物藥物制劑對(duì)患病草魚(yú)中分離菌株的MIC檢測(cè)結(jié)果，建議草魚(yú)養(yǎng)殖者選擇在水產(chǎn)養(yǎng)殖中可以使用的，而且對(duì)分離菌株尚具有敏感性的10.0%的恩諾沙星粉，作為患病草魚(yú)的治療藥物，分別用于不同地方的患細(xì)菌性爛鰓病草魚(yú)的藥物治療。

根據(jù)對(duì)分離菌株藥物敏感性檢測(cè)結(jié)果，選擇合適在不同養(yǎng)殖區(qū)域用藥的抗微生物藥物，根據(jù)草魚(yú)總體重計(jì)算用藥量拌和在飼料中投喂給藥。將全天的用藥量拌和在1次投喂的餌料中，每天投喂1次藥物餌料，連續(xù)投喂8d為一個(gè)給藥療程。在投喂藥物餌料期間，采用質(zhì)量較好的二氧化氯作全池潑灑用消毒劑，隔天消毒池水1次，連續(xù)消毒池水2次，消毒的目的在于消滅養(yǎng)殖水體中部分致病菌。同時(shí)，建議草魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)者在每噸飼料中添加8.0kg酵母多糖，連續(xù)投喂患病草魚(yú)14d，籍以提高投喂抗微生物藥物的治療效果。

3討論

在本次選擇的17種供試抗微生物藥物制劑中，從來(lái)自不同養(yǎng)殖區(qū)域的患病草魚(yú)中分離菌株，顯示出對(duì)同種抗微生物藥物存在不同的敏感性，個(gè)別分離菌株對(duì)許多供試抗微生物藥物制劑，均已經(jīng)產(chǎn)生了比較嚴(yán)重的抗藥性。這種檢測(cè)結(jié)果預(yù)示著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者采用抗微生物藥物治療養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的細(xì)菌性疾病時(shí)，一定需要在檢測(cè)致病性細(xì)菌對(duì)藥物敏感性的基礎(chǔ)上，選擇抑菌效果良好的抗微生物藥物，精準(zhǔn)用藥才有可能獲得良好的治療魚(yú)病效果的同時(shí)，還能夠減少或避免致病性細(xì)菌產(chǎn)生對(duì)抗微生物藥物的耐藥性。

對(duì)于患病毒性出血病的養(yǎng)殖草魚(yú)，投喂抗微生物藥物治療應(yīng)該是不會(huì)有療效的。而本次藥物治療養(yǎng)殖草魚(yú)“出血病”的試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，對(duì)具有“出血病”癥狀的患病草魚(yú)卻獲得了較好的藥物治療結(jié)果。說(shuō)明顯示“出血病”癥狀的患病草魚(yú)，不是由致病性呼腸孤病毒引起的，而可能就是由致病性細(xì)菌引起的。治療患病草魚(yú)“出血病”的結(jié)果，也提示我們不能見(jiàn)到魚(yú)體上有發(fā)紅等癥狀，就將其稱(chēng)為“出血病”，而“出血”的癥狀也可能是由致病性細(xì)菌引起的細(xì)菌性敗血癥。

在采用抗微生物藥物治療養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)細(xì)菌性性敗血癥的時(shí)候，在投喂的飼料中添加具有免疫調(diào)節(jié)作用的免疫調(diào)節(jié)劑，對(duì)于抗微生物藥物治療細(xì)菌性疾病的效果，也是具有協(xié)同增效作用的。這可能是因?yàn)榛疾◆~(yú)類(lèi)自身的免疫機(jī)能，得到了免疫調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)調(diào)節(jié)，增加了自身免疫系統(tǒng)的功能，而能快速地排除入侵到魚(yú)體內(nèi)病原生物的緣故。