陳昌福 ▏魚病越來(lái)越難治！根據(jù)藥敏檢測(cè)結(jié)果用藥為何也不管用了？原因在這里都說清楚了

我們?yōu)榱硕糁扑a(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物細(xì)菌性病原菌耐藥性的蔓延，也是為了確保水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)品的質(zhì)量安全，最近幾年來(lái)，我們一直在宣傳建設(shè)簡(jiǎn)易水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物病害診治實(shí)驗(yàn)室，現(xiàn)在全國(guó)范圍內(nèi)也建有幾十家這類簡(jiǎn)易實(shí)驗(yàn)室了。

但是，在各地實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行過程中，我們發(fā)現(xiàn)即使根據(jù)在實(shí)驗(yàn)室完成的藥物敏感性檢測(cè)數(shù)據(jù)使用了“國(guó)標(biāo)漁藥”，也難以有效地治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的疾病。本文對(duì)這個(gè)問題發(fā)生原因進(jìn)行了分析，同時(shí)提出了我們解決這個(gè)問題的設(shè)想。

為什么根據(jù)藥敏檢測(cè)結(jié)果

用藥也不能治療患病魚類疾病

摘要：從患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)分離致病性細(xì)菌，在完成抗微生物藥物對(duì)致病性細(xì)菌的藥物敏感性檢測(cè)基礎(chǔ)上，選取適宜的抗微生物藥物并實(shí)施精準(zhǔn)使用藥物，是指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者科學(xué)用藥的重要措施。然而，由于實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作人員錯(cuò)誤地選擇藥敏試驗(yàn)方法、試驗(yàn)中操作不規(guī)范、致病性細(xì)菌鑒定不準(zhǔn)確、藥敏試驗(yàn)的藥物與治療藥物含量不同等，這些在藥物敏感性試驗(yàn)技術(shù)操作中常見的問題，均可以導(dǎo)致即使依據(jù)致病性細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果篩選的藥物與劑量，也不能有效治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病的結(jié)果。

本文最后提出了可以采取采樣實(shí)驗(yàn)室加中心實(shí)驗(yàn)室的模式，有效地避免由于藥物敏感性試驗(yàn)技術(shù)操作人員專業(yè)素質(zhì)問題引起檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確等，導(dǎo)致使用抗微生物藥物不能有效治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病的問題。

關(guān)鍵詞：藥物敏感性試驗(yàn)，抗微生物藥物；致病性細(xì)菌，精準(zhǔn)用藥

最近幾年來(lái)，危害我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的各種細(xì)菌性疾病高發(fā)，而治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物細(xì)菌性疾病的抗微生物藥物，也就是通過我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部允許使用的幾種抗微生物藥物的“國(guó)標(biāo)漁藥”，用于治療患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物細(xì)菌性疾病的效果卻越來(lái)越差，據(jù)不少地方的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者反映，使用這些“國(guó)標(biāo)漁藥”已經(jīng)完全沒有治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病的效果。采用抗微生物藥物的“國(guó)標(biāo)漁藥”難以有效治療患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物細(xì)菌性疾病的主要原因，就是致病性細(xì)菌已經(jīng)對(duì)這些“國(guó)標(biāo)漁藥”或多或少地產(chǎn)生了耐藥性的緣故。

細(xì)菌對(duì)抗微生物藥物會(huì)產(chǎn)生耐藥性是自然規(guī)律，隨著某種抗微生物藥物使用次數(shù)的增加，細(xì)菌對(duì)這種抗微生物藥物所產(chǎn)生的耐藥性也會(huì)越來(lái)越強(qiáng)。遏制水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物致病性細(xì)菌對(duì)抗微生物藥物耐藥性的產(chǎn)生，其有效途徑就是在采用抗微生物藥物治療患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物細(xì)菌性疾病之前，首先應(yīng)該從患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)分離致病性細(xì)菌，通過完成分離致病菌性細(xì)菌對(duì)抗微生物藥物敏感性檢測(cè)后，再根據(jù)分離菌株對(duì)抗微生物藥物的敏感性，確定治療患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物細(xì)菌性疾病的用藥劑量，只有做到精準(zhǔn)用藥，才有可能達(dá)到藥到病除的療效，從而讓致病性細(xì)菌對(duì)所使用的抗微生物藥物沒有產(chǎn)生耐藥性的機(jī)會(huì)。

廣大的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者也應(yīng)該明白，為了在對(duì)患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病治療過程中，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)用藥、達(dá)到藥到病除的藥物治療效果，從患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)分離致病性細(xì)菌，完成分離菌株對(duì)抗微生物藥物的敏感性檢測(cè)的基礎(chǔ)上，再根據(jù)藥敏試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果選擇適宜的抗微生物藥物，用作治療患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物細(xì)菌性疾病的藥物，這就是唯一科學(xué)、能有效治療疾病的的方法與適宜藥物選擇途徑。如果不設(shè)法完成這種篩選治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病有效藥物的過程，只是根據(jù)“國(guó)標(biāo)漁藥”包裝袋上印制說明書的內(nèi)容，選擇和使用藥物的話，也就是“神仙”的用藥方式，從本質(zhì)上而言是與盲目、濫用抗微生物藥物無(wú)異的，而濫用藥物是難以獲得有效治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病效果的。

為了避免在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中繼續(xù)出現(xiàn)濫用抗微生物藥物的問題，最近幾年來(lái)，我們?cè)谌珖?guó)各地協(xié)助一些企業(yè)和水產(chǎn)用獸藥經(jīng)銷商，建成了一些簡(jiǎn)易水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病診治實(shí)驗(yàn)室。建設(shè)這類實(shí)驗(yàn)室的初衷，就是為了幫助解決長(zhǎng)期困惑廣大水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者的三個(gè)問題：即實(shí)現(xiàn)正確地診斷水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的疾病，篩選能有效治療患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病的適宜藥物，確定有效治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病的精確用藥劑量。

這些簡(jiǎn)易水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病診治實(shí)驗(yàn)室在運(yùn)行的過程中，或多或少地均出現(xiàn)了即使根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選用的藥物也不能有效地治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病的問題。本文內(nèi)容就是針對(duì)這種問題完成的原因分析，旨在幫助簡(jiǎn)易水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病診治實(shí)驗(yàn)室的工作人員避免這類問題繼續(xù)發(fā)生，提高水產(chǎn)用獸藥治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病的治療效果。

1. 根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果用藥不能實(shí)現(xiàn)藥到病除主要原因分析

1.1選用的藥敏試驗(yàn)方法不正確

完成致病性細(xì)菌對(duì)抗微生物藥物的藥物敏感性試驗(yàn)有多種方法，譬如簡(jiǎn)便易行的藥敏紙片法和牛津杯法，其檢測(cè)結(jié)果可以用于判斷多種抗微生物藥物對(duì)某種致病性微生物抑菌效力的差異，用于比較和定性多種抗微生物藥物對(duì)某種致病性細(xì)菌抑菌效力的強(qiáng)弱。但是，用紙片法和牛津杯法獲得的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果，是無(wú)法用于指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者決定抗微生物藥物的用藥劑量的，不能幫助水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)地確定用藥劑量，達(dá)到有效治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病的目的。

幫助水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者科學(xué)地選擇和精準(zhǔn)地確定用藥劑量的藥物敏感試驗(yàn)方法，應(yīng)該采用在試管（或者微量板）內(nèi)完成的系列藥物濃度稀釋法。將從患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)分離獲得的分離菌株，定量添加在盛裝有經(jīng)過系列濃度稀釋供試抗微生物藥物的試管中，經(jīng)過恒溫培養(yǎng)一定時(shí)間后讀取最小抑菌濃度（MIC），最后根據(jù)各種抗微生物藥物的MIC選擇治療藥物和確定用藥劑量，才能實(shí)現(xiàn)選擇適宜藥物和實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)用藥。如果選擇了只是具有定性作用的紙片法和牛津杯法完成的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果，就不可能幫助水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者選擇到適宜藥物和做到精準(zhǔn)用藥。

1.2未按照規(guī)范操作程序完成藥敏試驗(yàn)過程

在針對(duì)致病性細(xì)菌對(duì)抗微生物藥物敏感性檢測(cè)試驗(yàn)中，會(huì)涉及到多個(gè)操作技術(shù)環(huán)節(jié)，任何一個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)出現(xiàn)錯(cuò)誤，均會(huì)影響到藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果的應(yīng)用效果，甚至導(dǎo)致即使遵照藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用的抗微生物藥物，在治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病應(yīng)用中的失敗。

首先，培養(yǎng)分離菌株后的稀釋菌液濃度過低或過高。在藥敏試驗(yàn)過程中，致病性細(xì)菌濃度對(duì)于獲得準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果是至關(guān)重要的。必須將提純的供試致病性細(xì)菌配制成一定濃度（106cells/mL）的菌液。按照CLSI及世界衛(wèi)生組織（WHO）制定的供試致病性細(xì)菌菌液濃度標(biāo)準(zhǔn)為0.5麥?zhǔn)蠁挝弧Ｈ艟簼舛冗^高，供試致病性細(xì)菌表現(xiàn)為對(duì)抗微生物藥物產(chǎn)生耐藥狀態(tài)；與此相反，如果供試菌液濃度過低，供試致病性細(xì)菌表現(xiàn)為對(duì)抗微生物藥物敏感性狀態(tài)，其測(cè)得的結(jié)果即為假敏感。在配制藥敏試驗(yàn)致病性細(xì)菌的菌液濃度時(shí)，部分藥敏檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室是以硫酸鋇濁度管比色的，其A625值常超出0.08~0.10范圍，由于其穩(wěn)定性比較差，容易導(dǎo)致藥敏試驗(yàn)致病性細(xì)菌懸液濃度失控，結(jié)果就會(huì)出現(xiàn)假耐藥或假敏感。還有的試驗(yàn)室在藥敏檢測(cè)中直接挑取供試菌落涂板，沒有配制標(biāo)準(zhǔn)的菌懸液，其濃度﹥109cells/mL的范圍，其藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果為假耐藥的機(jī)率也可能大幅度增加的。

其次，供試致病性細(xì)菌純化程度不良。進(jìn)行致病性細(xì)菌藥敏試驗(yàn)時(shí)，必須將各種致病性細(xì)菌做純化分離后，分別進(jìn)行不同藥物種類的藥敏試驗(yàn)。因?yàn)椴煌闹虏⌒约?xì)菌對(duì)抗微生物藥物的敏感程度是不相同的，如果致病性細(xì)菌種類不純，該供試致病性細(xì)菌在試驗(yàn)中所產(chǎn)生的抑菌效果差異比較大，就會(huì)影響對(duì)藥敏試驗(yàn)結(jié)果判斷的準(zhǔn)確性，最終導(dǎo)致執(zhí)業(yè)獸醫(yī)在患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病治療中，難以參考藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇到合適的抗微生物藥物。

一般而言，應(yīng)該避免直接挑取初分離的菌落做藥敏試驗(yàn)，除非在暴發(fā)性疾病流行的緊急情況下、當(dāng)革蘭染色提示出分離微生物為單一種類時(shí)可以直接挑取菌落做藥物敏感試驗(yàn)。但是，其結(jié)果也僅能作為藥敏試驗(yàn)結(jié)果的初步報(bào)告，隨后必須用標(biāo)準(zhǔn)方法重復(fù)做藥敏試驗(yàn)。

1.3供試致病性細(xì)菌屬于非致病菌

由于水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的疾病大多是由于條件致病性細(xì)菌感染所致，這個(gè)特點(diǎn)給水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的致病性細(xì)菌判斷帶來(lái)了一定的困難。如果從患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)分離獲得的菌株不是致病性細(xì)菌，針對(duì)非致病性細(xì)菌完成的藥物敏感性檢測(cè)結(jié)果，也是抗微生物藥物治療失敗的一個(gè)重要原因。

首先，一些簡(jiǎn)易實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備和技術(shù)操作人員的專業(yè)素質(zhì)有限，在致病性細(xì)菌分離、培養(yǎng)與純化過程中，培養(yǎng)物受到了來(lái)自環(huán)境中微生物污染，培養(yǎng)出來(lái)的不是致病性細(xì)菌，藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果就難以正確地指導(dǎo)抗微生物藥物先擇和使用了。

來(lái)自實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中微生物污染可能出現(xiàn)在多個(gè)環(huán)節(jié)中，譬如可以發(fā)生在培養(yǎng)基制備、標(biāo)本采集、接種、培養(yǎng)等各個(gè)操作環(huán)節(jié)。有些屬于技術(shù)操作人員的問題，如果采樣部位是養(yǎng)殖魚類的鰓、腸道、體表病灶等，采集時(shí)很難做到不攜非致病性細(xì)菌，在培養(yǎng)出微生物時(shí)都面臨判斷該微生物是致病的還是攜帶的非致病菌的問題。在這種情況下致病菌的判定是個(gè)難題，容易出現(xiàn)對(duì)致病菌的判斷錯(cuò)誤，需要檢驗(yàn)者具備較豐富的經(jīng)驗(yàn)，或者需要對(duì)分離致病性細(xì)菌進(jìn)行種類鑒定。因?yàn)槿绻凑詹皇轻槍?duì)致病菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果去治療疾病的話，所選擇的藥物是難以消滅致病菌而獲得良好治療結(jié)果的。

1.4供試藥物與治療用藥質(zhì)量差異大

這也是簡(jiǎn)易水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病診治實(shí)驗(yàn)室容易出現(xiàn)的錯(cuò)誤。完成致病性細(xì)菌藥物敏感性檢測(cè)的供試藥物，是采用的抗微生物藥物的標(biāo)準(zhǔn)品或者原料藥物，而治療水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病則需要采用抗微生物藥物的“國(guó)標(biāo)漁藥”。如果兩者間質(zhì)量存在差異，藥物敏感性檢測(cè)結(jié)果就難以用于指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者正確地選擇和使用水產(chǎn)用獸藥了。

為了避免這個(gè)問題的發(fā)生，我們主張直接采用水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者附近可以采購(gòu)到的抗微生物藥物的“國(guó)標(biāo)漁藥”制劑，完成對(duì)致病性細(xì)菌的分離菌株的藥物敏感性檢測(cè)試驗(yàn)。

2. 我們對(duì)應(yīng)對(duì)方案的設(shè)想

要解決以上試驗(yàn)中的問題，關(guān)鍵在于提高實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作人員的專業(yè)素質(zhì)。

然而，在短時(shí)期內(nèi)要達(dá)成提高實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作人員專業(yè)素質(zhì)的目標(biāo)，也是比較困難的。因此，我們認(rèn)為可以根據(jù)簡(jiǎn)易水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病診治實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備和技術(shù)操作人員的水平與素質(zhì)，劃分為采樣實(shí)驗(yàn)室和中心實(shí)驗(yàn)室，分別完成藥物敏感性試驗(yàn)的不同工作內(nèi)容。由分布在全國(guó)各地的簡(jiǎn)易水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病診治實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作人員，在無(wú)菌條件下從各地患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)分離致病性細(xì)菌，接種在盛有腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基（BHIA）培養(yǎng)皿中，直接將接種后的培養(yǎng)皿封口后，快遞給中心實(shí)驗(yàn)室，即由采樣實(shí)驗(yàn)室完成從全國(guó)各地患病水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)采集致病性細(xì)菌的工作，再由中心實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作人員完成致病性細(xì)菌純化和藥物敏感性檢測(cè)的后續(xù)工作。

在完成全部藥物敏感性檢測(cè)的基礎(chǔ)上，由中心實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員提出檢測(cè)報(bào)告并指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者選用適宜的抗微生物藥物、確定治療疾病的用藥劑量，實(shí)施精準(zhǔn)用藥。

作者：華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 陳昌福 武漢科研時(shí)代生物技術(shù)有限公司 周鑫軍。