普通光學(xué)顯微鏡的使用技術(shù)

一，普通光學(xué)顯微鏡的主要構(gòu)造

普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造主要分為三部分：機械部分、照明部分和光學(xué)部分。顯微鏡各部分構(gòu)造如下圖：

1.機械部分

（1）鏡座：是顯微鏡的底座，用以支持整個鏡體。

（2）鏡柱：是鏡座上面直立的部分，用以連接鏡座和鏡臂。

（3）鏡臂：一端連于鏡柱，一端連于鏡筒，是取放顯微鏡時手握部位。

（4）鏡筒：連在鏡臂的前上方，鏡筒上端裝有目鏡，下端裝有物鏡轉(zhuǎn)換器。

（5）物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)器)：接于棱鏡殼的下方，可自由轉(zhuǎn)動，盤上有3－4個圓孔，是安裝物鏡部位，轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，可以調(diào)換不同倍數(shù)的物鏡，當聽到碰叩聲時，方可進行觀察，此時物鏡光軸恰好對準通光孔中心，光路接通。

（6）鏡臺(載物臺)：在鏡筒下方，形狀有方、圓兩種，用以放置玻片標本，中央有一通光孔，我們所用的顯微鏡其鏡臺上裝有玻片標本推進器(推片器)，推進器左側(cè)有彈簧夾，用以夾持玻片標本，鏡臺下有推進器調(diào)節(jié)輪，可使玻片標本作左右、前后方向的移動。

（7）調(diào)節(jié)器：是裝在鏡柱上的大小兩種螺旋，調(diào)節(jié)時使鏡臺作上下方向的移動。

①粗調(diào)節(jié)器(粗螺旋)：大螺旋稱粗調(diào)節(jié)器，移動時可使鏡臺作快速和較大輻度的升降，所以能迅速調(diào)節(jié)物鏡和標本之間的距離使物象呈現(xiàn)于視野中，通常在使用低倍鏡時，先用粗調(diào)節(jié)器迅速找到物象。

②細調(diào)節(jié)器(細螺旋)：小螺旋稱細調(diào)節(jié)器，移動時可使鏡臺緩慢地升降，多在運用高倍鏡時使用，從而得到更清晰的物象，并借以觀察標本的不同層次和不同深度的結(jié)構(gòu)。

2．照明部分

裝在鏡臺下方，包括反光鏡，集光器。

（1）反光鏡：裝在鏡座上面，可向任意方向轉(zhuǎn)動，它有平、凹兩面，其作用是將光源光線反射到聚光器上，再經(jīng)通光孔照明標本，凹面鏡聚光作用強，適于光線較弱的時候使用，平面鏡聚光作用弱，適于光線較強時使用。

（2）集光器(聚光器)位于鏡臺下方的集光器架上，由聚光鏡和光圈組成，其作用是把光線集中到所要觀察的標本上。

①聚光鏡：由一片或數(shù)片透鏡組成，起匯聚光線的作用，加強對標本的照明，并使光線射入物鏡內(nèi)，鏡柱旁有一調(diào)節(jié)螺旋，轉(zhuǎn)動它可升降聚光器，以調(diào)節(jié)視野中光亮度的強弱。

②光圈(虹彩光圈)：在聚光鏡下方，由十幾張金屬薄片組成，其外側(cè)伸出一柄，推動它可調(diào)節(jié)其開孔的大小，以調(diào)節(jié)光量。

3.光學(xué)部分

（1）目鏡：裝在鏡筒的上端，通常備有2－3個，上面刻有5×、10×或15×符號以表示其放大倍數(shù)，一般裝的是10×的目鏡。

（2）物鏡：裝在鏡筒下端的旋轉(zhuǎn)器上，一般有3－4個物鏡，其中最短的刻有“10×”符號的為低倍鏡，較長的刻有“40×”符號的為高倍鏡，最長的刻有“100×”符號的為油鏡，此外，在高倍鏡和油鏡上還常加有一圈不同顏色的線，以示區(qū)別。

在物鏡上，還有鏡口率(N.A.)的標志，它反應(yīng)該鏡頭分辨力的大小，其數(shù)字越大，表示分辨率越高， 各物鏡的鏡口率如下表：

物鏡 鏡口率(N.A.) 工作距離(mm)

10× 0.25 5.40

40× 0.65 0.39

100× 1.30 0.11

表中的工作距離是指顯微鏡處于工作狀態(tài)(物象調(diào)節(jié)清楚)時物鏡的下表面與蓋玻片(蓋玻片的厚度一般為0.17mm)上表面之間的距離，物鏡的放大倍數(shù)愈大，它的工作距離愈小。

顯微鏡的放大倍數(shù)是物鏡的放大倍數(shù)與目鏡的放大倍數(shù)的乘積，如物鏡為10×，目鏡為10×，其放大倍數(shù)就為10×10=100。

4，成像系統(tǒng) 在使用過程中，為了方便觀察，通常會在光學(xué)顯微鏡目鏡上加裝成像系統(tǒng)，將顯微鏡視野內(nèi)的圖像通過成像系統(tǒng)傳送到電子顯示屏上，更好地對顯微鏡視野內(nèi)的標本進行觀察。如下圖所示：

二，水浸片的制作

在水產(chǎn)疾病的診斷過程中，使用得最多的是將病料組織制成水浸片，放在載物臺上觀察，詳細的制作步驟如下：

取一塊干凈的載玻片，在上面滴一滴清水（如果是利用與水直接接觸的組織或器官制作水浸片，淡水品種就使用淡水，海水品種就使用海水，如果是利用不與水接觸的組織器官制作水浸片，則要使用生理鹽水），首先從要檢查的部位取一小塊組織，至于載玻片的水滴中，用鑷子夾住輕輕攪動，讓其分散，再取一潔凈的蓋玻片將其一邊與載玻片接觸，傾斜著將蓋玻片輕蓋在待檢組織上，再用鑷子或鉛筆輕壓，讓待檢組織分散。如果水過多，可以用紗布或吸水紙吸去蓋玻片周圍多余的水。這樣，一個水浸片就制成了。

在制作水浸片的過程中，要注意以下幾點：

1，所取的待檢組織的樣品不宜過多，過多容易引起透光率的不良，影響顯微鏡的觀察。

2，必須先滴水，再放組織，否則會產(chǎn)生氣泡，影響觀察。

3，水產(chǎn)動物不與水接觸的組織器官要用生理鹽水，否則檢查的病原體會由于滲透壓的不同引起碎裂，皺縮或死亡而影響診斷。

4，水浸片要現(xiàn)場制作，不宜保存。

三，普通光學(xué)顯微鏡的使用步驟。

1、實驗時要把顯微鏡放在座前桌面上稍偏左的位置，鏡座應(yīng)距桌沿 6～7 cm左右。

2、打開光源開關(guān)，調(diào)節(jié)光強到合適大小。

3、轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡頭正對載物臺上的通光孔。先把鏡頭調(diào)節(jié)至距載物臺1～2cm左右處，然后用左眼注視目鏡內(nèi)，接著調(diào)節(jié)聚光器的高度，把孔徑光闌調(diào)至最大，使光線通過聚光器入射到鏡筒內(nèi)，這時視野內(nèi)呈明亮的狀態(tài)。

4、將所要觀察的玻片放在載物臺上，使玻片中被觀察的部分位于通光孔的正中央，然后用標本夾夾好載玻片。

5、先用低倍鏡觀察（物鏡10X、目鏡10X）。觀察之前，先轉(zhuǎn)動粗動調(diào)焦手輪，使載物臺上升，物鏡逐漸接近玻片。需要注意，不能使物鏡觸及玻片，以防鏡頭將玻片壓碎。然后，左眼注視目鏡內(nèi)，同時右眼不要閉合（要養(yǎng)成睜開雙眼用顯微鏡進行觀察的習(xí)慣，以便在觀察的同時能用右眼看著繪圖），并轉(zhuǎn)動粗動調(diào)焦手輪，使 載物臺慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。

6、如果在視野內(nèi)看到的物像不符合實驗要求（物像偏離視野），可慢慢調(diào)節(jié)載物臺移動手柄。調(diào)節(jié)時應(yīng)注意玻片移動的方向與視野中看到的物像移動的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以調(diào)節(jié)微動調(diào)焦手輪，直至物像清晰為止。

7、如果進一步使用高倍物鏡觀察，應(yīng)在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前，把物像中需要放大觀察的部分移至視野中央（將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時，視野中的物像范圍縮小了很多）。一般具有正常功能的顯微鏡，低倍物鏡和高倍物鏡基本齊焦，在用低倍物鏡觀察清晰時，換高倍物鏡應(yīng)可以見到物像，但物像不一定很清晰，可以轉(zhuǎn)動微動調(diào)焦手輪進行調(diào)節(jié)。

8、在轉(zhuǎn)換高倍物鏡并且看清物像之后，可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)孔徑光闌的大小或聚光器的高低，使光線符合要求（一般將低倍物鏡換成高倍物鏡觀察時，視野要稍變暗一些，所以需要調(diào)節(jié)光線強弱）。

9、觀察完畢應(yīng)先將物鏡鏡頭從通光孔處移開，然后將孔徑光闌調(diào)至最大，再將載物臺緩緩落下，并檢查零件有無損傷，特別要注意檢查物鏡是否沾水沾油，如沾了水或油要用鏡頭紙擦凈，檢查處理完畢后即可鋪上防塵布。

四，顯微鏡不同倍數(shù)鏡頭的使用方法

1．低倍鏡的使用方法

（1）取鏡和放置：顯微鏡平時存放在柜或箱中，用時從柜中取出，右手緊握鏡臂，左一手托住鏡座,將顯微鏡放在自己左肩前方的實驗臺上，鏡座后端距桌邊1－2寸為宜，便于坐著操作。

（2）對光：用拇指和中指移動旋轉(zhuǎn)器(切忌手持物鏡移動)，使低倍鏡對準鏡臺的通光孔(當轉(zhuǎn)動聽到碰叩聲時，說明物鏡光軸已對準鏡筒中心)。打開光圈，上升集光器，并將反光鏡轉(zhuǎn)向光源，以左眼在目鏡上觀察(右眼睜開),同時調(diào)節(jié)反光鏡方向，直到視野內(nèi)的光線均勻明亮為止。

（3）放置玻片標本：取一玻片標本放在鏡臺上，一定使有蓋玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器彈簧夾夾住，然后旋轉(zhuǎn)推片器螺旋，將所要觀察的部位調(diào)到通光孔的正中。

（4）調(diào)節(jié)焦距：以左手按逆時針方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺緩慢地上升至物鏡距標本片約5毫米處，應(yīng)注意在上升鏡臺時，切勿在目鏡上觀察。一定要從右側(cè)看著鏡臺上升，以免上升過多，造成鏡頭或標本片的損壞。然后，兩眼同時睜開，用左眼在目鏡上觀察，左手順時針方向緩慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺緩慢下降，直到視野中出現(xiàn)清晰的物象為止。

如果物象不在視野中心，可調(diào)節(jié)推片器將其調(diào)到中心(注意移動玻片的方向與視野物象移動的方向是相反的)。如果視野內(nèi)的亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調(diào)節(jié)，如果在調(diào)節(jié)焦距時，鏡臺下降已超過工作距離(>5.40mm)而未見到物象，說明此次操作失敗，則應(yīng)重新操作，切不可心急而盲目地上升鏡臺。

2．高倍鏡的使用方法

（1）選好目標：一定要先在低倍鏡下把需進一步觀察的部位調(diào)到中心，同時把物象調(diào)節(jié)到最清晰的程度，才能進行高倍鏡的觀察。

（2）轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，調(diào)換上高倍鏡頭，轉(zhuǎn)換高倍鏡時轉(zhuǎn)動速度要慢，并從側(cè)面進行觀察(防止高倍鏡頭碰撞玻片)，如高倍鏡頭碰到玻片，說明低倍鏡的焦距沒有調(diào)好，應(yīng)重新操作。

（3）調(diào)節(jié)焦距：轉(zhuǎn)換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察，此時一般能見到一個不太清楚的物象，可將細調(diào)節(jié)器的螺旋逆時針移動約0.5－1圈，即可獲得清晰的物象(切勿用粗調(diào)節(jié)器!)

如果視野的亮度不合適，可用集光器和光圈加以調(diào)節(jié)，如果需要更換玻片標本時，必須順時針(切勿轉(zhuǎn)錯方向)轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡臺下降，方可取下玻片標本。

3．油鏡的使用方法

（1）在使用油鏡之前，必須先經(jīng)低、高倍鏡觀察，然后將需進一步放大的部分移到視野的中心。

（2）將集光器上升到最高位置，光圈開到最大。

（3）轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢轉(zhuǎn)動油鏡，在轉(zhuǎn)換油鏡時，從側(cè)面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。

（4）用左眼觀察目鏡，并慢慢轉(zhuǎn)動細調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。

如果不出現(xiàn)物象或者目標不理想要重找，在加油區(qū)之外重找時應(yīng)按：低倍→高倍→油鏡程序。在加油區(qū)內(nèi)重找應(yīng)按：低倍→油鏡程序，不得經(jīng)高倍鏡，以免油沾污鏡頭。

（5）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭上和標本上的香柏油擦去，然后再用干擦鏡紙擦干凈。

五，顯微鏡使用的注意事項

（一）、正確安裝的問題

使用顯微鏡前，首先要把顯微鏡的目鏡和物鏡安裝上去。目鏡的安裝較為簡單，主要的問題在于物鏡的安裝，由于物鏡鏡頭較貴重，萬一安裝時螺紋沒合好，易摔到地上，造成鏡頭損壞，所以為了保險起見，強調(diào)操作者在安裝物鏡時要用左手食指和中指托住物鏡，然后用右手將物鏡裝上去，這樣即使沒安裝好，也不會摔到地上。

（二）、正確對光的問題

對光是使用顯微鏡時很重要的一步，有些操作者在對光時，隨便轉(zhuǎn)一個物鏡對著通光孔，而不是按要求一定用低倍鏡對光。轉(zhuǎn)動反光鏡時喜歡用一只手，往往將反光鏡扳了下來。所一定要強調(diào)用低倍鏡對光，當光線較強時用小光圈、平面鏡，而光線較弱時則用大光圈、凹面鏡，反光鏡要用雙手轉(zhuǎn)動，當看到均勻光亮的圓形視野為止。光對好后不要再隨便移動顯微鏡，以免光線不能準確地通過反光鏡進入通光孔。

（三）、正確使用準焦螺旋的問題

使用準焦螺旋調(diào)節(jié)焦距，找到物象可以說是顯微鏡使用中最重要的一步，也是操作者感覺最為困難的一步。操作者在操作過程中極易出現(xiàn)以下錯誤：一是在高倍鏡下直接調(diào)焦；二是不管鏡筒上升或下降，眼睛始終在往目鏡中看視野；三是不了解物距的臨界值，物距調(diào)到2~3厘米時還在往上調(diào)，而且轉(zhuǎn)動準焦螺旋的速度很快。前兩種錯誤結(jié)果往往造成物鏡鏡頭抵觸到裝片，損傷裝片或鏡頭，而第三種錯誤則是操作者使用顯微鏡時最常見的一種現(xiàn)象。針對以上錯誤，操作者要注意，調(diào)節(jié)焦距一定要在低倍鏡下調(diào)，先轉(zhuǎn)動粗準焦螺旋，使鏡筒慢慢下降，物鏡靠近載玻片，但注意不要讓物鏡碰到載玻片，在這個過程中眼睛要從側(cè)面看物鏡，然后用左眼朝目鏡內(nèi)注視，并慢慢反向調(diào)節(jié)粗準焦螺旋，使鏡筒徐徐上升，直當看到物像為止。一般顯微鏡的物距在1厘米左右，所以如果物距已遠超過1厘米，但仍未看到物像，那可能是標本未在視野內(nèi)或轉(zhuǎn)動粗準焦螺旋速度過快，此時應(yīng)調(diào)整裝片位置，然后再重復(fù)上述步驟，當視野中出現(xiàn)模糊的物像時，就要換用細準焦螺旋調(diào)節(jié)，只有這樣，才能縮小尋找范圍，提高找到物像的速度。

（四）、物鏡轉(zhuǎn)換的問題

使用低倍鏡后換用高倍鏡，操作者往往喜歡用手指直接推轉(zhuǎn)物鏡，認為這樣比較省力，但這樣容易使物鏡的光軸發(fā)生偏斜，原因是轉(zhuǎn)換器的材料質(zhì)地較軟，精度較高，螺紋受力不均勻很容易松脫。一旦螺紋破壞，整個轉(zhuǎn)換器就會報廢。操作者應(yīng)手握轉(zhuǎn)換器的下層轉(zhuǎn)動板轉(zhuǎn)換物鏡。

（五）、正確用眼的問題

用顯微鏡觀察物體時，應(yīng)雙眼同時睜開，左眼往目鏡內(nèi)注視。但有不少操作者往往做不到這一點，喜歡用手捂住右眼或干脆閉上右眼，這是不符合實驗的觀察要求的，這種不良習(xí)慣會造成左眼疲勞，同時也不能做到邊觀察邊畫圖。應(yīng)該注意，左眼要盡量貼近目鏡，右眼試圖向視野內(nèi)注視，如此反復(fù)訓(xùn)練，就會達到雙目同時睜開觀察的要求?；蛘咭部梢酝ㄟ^做以下練習(xí)：睜開雙眼，用一張紙或手掌豎立在兩眼之間，鼻子跟前，使左右眼不能互看對側(cè)一邊，然后有意識地先看左邊，再看右邊，如此3~5次，每天早晚各做一遍，不到一星期便可學(xué)會。

（六）視野內(nèi)污點判斷的問題

轉(zhuǎn)動目鏡，污點移動則在目鏡上。不移動則不在目鏡上

移動玻片，污點移動則在玻片上。不移動則不在玻片上

如果視野內(nèi)的污點不在玻片和目鏡上，那就在物鏡上。

（七）顯微鏡視野內(nèi)玻片的移動與物像的移動

由于是倒立的像，玻片的移動方向與物像移動的方向相反。

（八）使用過程中其他需要注意的問題

1．持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢，不可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。

2．輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在實驗臺的邊緣，以免碰翻落地。

3．保持顯微鏡的清潔，光學(xué)和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機械部分用布擦拭。

4．水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和鏡臺，如果沾污應(yīng)立即擦凈。

5．放置玻片標本時要對準通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡。

6．要養(yǎng)成兩眼同時睜開的習(xí)慣，以左眼觀察視野，右眼用以繪圖。

7．不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。

8．使用完畢后，必須復(fù)原才能放回鏡箱內(nèi)，其步驟是：取下標本片，轉(zhuǎn)動旋轉(zhuǎn)器使鏡頭離開通光孔，下降鏡臺，平放反光鏡，下降集光器(但不要接觸反光鏡)、關(guān)閉光圈，推片器回位，蓋上綢布和外罩，放回實驗臺柜內(nèi)。最后填寫使用登記表。(注：反光鏡通常應(yīng)垂直放，但有時因集光器沒提至應(yīng)有高度，鏡臺下降時會碰壞光圈，所以這里改為平放。