硫酸銅鐵、敵百蟲、聚維酮碘和甲醛對錦鯉幼魚的急性毒性

      4種常用水產(chǎn)藥物對錦鯉幼魚的急性毒性

楊志強(qiáng)，李瀟軒，馬行空，霍春林，梁政遠(yuǎn)

（1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017；2.無錫瑞順?biāo)a(chǎn)養(yǎng)殖科技有限公司，江蘇 無錫 214000）

錦鯉Cyprinus carpio是鯉突變品系經(jīng)多代人工選育與定向培育成的觀賞魚類。錦鯉體態(tài)優(yōu)雅、高貴，泳姿瀟灑、習(xí)性溫和、斑紋華麗、色彩絢麗、身軀雄健，被譽(yù)為“會游泳的藝術(shù)品”、“水中活寶石”等[1]。近年來，中國錦鯉市場發(fā)展迅速，很多地區(qū)將其列為水產(chǎn)養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)調(diào)整的首選對象，整個(gè)行業(yè)的消費(fèi)和投資市場受到廣泛重視，成為未來休閑漁業(yè)、觀光農(nóng)業(yè)的主導(dǎo)產(chǎn)品之一。我國錦鯉養(yǎng)殖業(yè)已有一定規(guī)模，但在集約化精養(yǎng)、蓄養(yǎng)的條件下，養(yǎng)殖密度大，養(yǎng)殖操作不當(dāng)，水環(huán)境變化諸多，病害發(fā)生日趨嚴(yán)重，制約了養(yǎng)殖產(chǎn)量與規(guī)模的提升。

錦鯉魚種易出現(xiàn)寄生蟲、霉菌、細(xì)菌等疾病，引起大面積死亡[2]。其病害防治中藥物治療是最經(jīng)濟(jì)、最有效的方法[3]。水產(chǎn)藥物實(shí)踐得知：養(yǎng)殖魚類品種、規(guī)格和生長階段不同，所用藥物的安全濃度也不同[4]。用藥不當(dāng)或濃度超標(biāo)都可能會帶來養(yǎng)殖魚類中毒[5]。為此，本試驗(yàn)通過研究水產(chǎn)養(yǎng)殖中廣泛用于防治魚類苗種疾病的殺蟲劑—硫酸銅與硫酸亞鐵合劑（5∶2）、甲醛、敵百蟲和聚維酮碘對錦鯉幼魚的急性毒性，探討試驗(yàn)藥物對錦鯉幼魚的安全濃度，為預(yù)防和治療錦鯉苗種疾病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用魚體長（12.5±1.0）cm，體質(zhì)量（25.0±2.0）g，體表完好，游動正常，健康活潑，無傷、病、殘。試驗(yàn)開始前在適宜條件下暫養(yǎng)1周，暫養(yǎng)期間水溫23.0～25.0℃，pH7.8～8.2，溶解氧濃度 ＞4.5mg·L-1，光照250～1 350lx。每天中午12點(diǎn)左右投喂1次。試驗(yàn)開始前1d停止投喂。

試驗(yàn)用藥物硫酸銅與硫酸亞鐵合劑（5∶2）、敵百蟲、聚維酮碘和甲醛的規(guī)格及生產(chǎn)廠家等見表1。其中硫酸銅與硫酸亞鐵均為分析純。

1.2 方法

2017年5月1日—5月27日，試驗(yàn)在室內(nèi)80cm×50cm×40cm的白色透明玻璃缸中進(jìn)行。每缸放錦鯉幼魚50尾和一個(gè)長約30cm的微孔增氧管。一個(gè)試驗(yàn)周期為4d。試驗(yàn)用水為經(jīng)48h曝氣的自來水，pH在7.8～8.2之間，硬度為200mg·L-1（以CaCO3計(jì)），溶解氧濃度 ＞4.5 mg·L-1，光照 250～1 350 lx，水溫 23.0～25.0℃。

試驗(yàn)采用靜態(tài)急性毒性試驗(yàn)法。在預(yù)試驗(yàn)中，根據(jù)常用魚病防治用量進(jìn)行調(diào)整，觀察錦鯉幼魚的活動，記錄存活狀況，得出正式試驗(yàn)藥物區(qū)間。試驗(yàn)設(shè)置6個(gè)濃度組以及1個(gè)對照組，每組3個(gè)重復(fù)，濃度梯度按照等對數(shù)間距設(shè)置，具體試驗(yàn)藥物濃度見表2～表5。

表1 4種試驗(yàn)藥物的規(guī)格與成分Tab.1 The specification and composition of four test drugs

表2 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對錦鯉幼魚急性毒性試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Toxicity of copper sulfate and ferrous sulfate mixture to koi carp fingerlings

依據(jù)相關(guān)要求與標(biāo)準(zhǔn)配置試驗(yàn)液母液，逐步稀釋獲得設(shè)定藥液濃度，不同濃度藥液中放入試驗(yàn)魚。每24h更換試驗(yàn)藥液一次。試驗(yàn)開始后進(jìn)行連續(xù)觀察，記錄24h、48h、96h時(shí)錦鯉幼魚的存活情況，及時(shí)撈出死亡個(gè)體。以試驗(yàn)魚失去活力、對外界刺激無反應(yīng)為死亡標(biāo)準(zhǔn)[6]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

不同時(shí)間段錦鯉幼魚的半致死濃度（median lethal concentration，LC50）按以下公式計(jì)算 ：lgLC50=XK-a∑（Pi+Pi+1），SC=B×0.3/（C/B）2。其中，LC50為半致死濃度，XK為最大劑量的對數(shù)，a為相鄰劑量比值的對數(shù)，Pi、Pi+1為各劑量組的死亡率，SC為安全濃度，B和C分別為48h和24h的LC50。數(shù)據(jù)分析使用R 3.0.2軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對錦鯉幼魚的急性毒性

由表2可知，當(dāng)硫酸銅與硫酸亞鐵合劑濃度為12.59mg·L-1（最高濃度）時(shí)，1h后錦鯉幼魚即開始急躁不安，4h后出現(xiàn)明顯中毒癥狀并開始大量死亡，24h的死亡率達(dá)98%；濃度為1.58mg·L-1（最低濃度）時(shí)，96h死亡率為0；濃度為2.40mg·L-（1較低濃度）時(shí)，約56h才出現(xiàn)死亡，96h死亡率為15.2%；濃度為8.32mg·L-（1較高濃度）時(shí)死亡率顯著上升。硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對錦鯉幼魚24h和48h的半致死濃度為6.75mg·L-1和5.12mg·L-1，安全濃度為0.88mg·L-1，這與斑點(diǎn)叉尾Ictalurus punctatus的安全濃度 0.854mg·L-1、常用濃度 0.7mg·L-1[7]相差不大。因此，硫酸銅與硫酸亞鐵合劑可作為防治錦鯉苗種病害的藥物使用。結(jié)果顯示，重金屬離子主要通過富集作用對生物產(chǎn)生毒害效應(yīng)，當(dāng)重金屬離子在生物體內(nèi)累積到一定濃度后會抑制生命體的正常生理生化過程。

2.2 甲醛對錦鯉幼魚的急性毒性

由表3可知，甲醛濃度為100.0mg·L-1（最高濃度）時(shí)，24h的死亡率達(dá)100%；濃度為10.00mg·L-1和15.85mg·L-1（較低濃度）時(shí)，96h的死亡率為0；濃度為25.12mg·L-1（中等濃度）時(shí)，32h出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。甲醛對錦鯉幼魚的24h和48h半致死濃度分別為 78.77mg·L-1和 49.52mg·L-1，安全濃度為 5.87mg·L-1，這比小口脂鯉Prochilodus scrofa的安全濃度18.20mg·L-1[8]和黃顙魚 Pelteobagrus fulvidraco 苗種的安全濃度 15.48mg·L-1、現(xiàn)常用濃度 15～20mg·L-1[7]要低，其原因可能是試驗(yàn)魚規(guī)格偏小，耐受力較低。

2.3 敵百蟲對錦鯉幼魚的急性毒性

由表4可知，敵百蟲濃度為10.00mg·L-1（最高濃度）時(shí)，24h的死亡率達(dá)100%；濃度為1.0mg·L-1（最低濃度）時(shí)，96h死亡率為0；濃度為2.51mg·L-1（較低濃度）時(shí)，12h才出現(xiàn)死亡，96h的死亡率仍較低。當(dāng)敵百蟲濃度為6.31mg·L-1（較高濃度）時(shí)，死亡率顯著上升。敵百蟲對錦鯉幼魚的24h半致死濃度為 5.95mg·L-1，48h 半致死濃度為 4.28mg·L-1，安全濃度為 0.67mg·L-1，低于黃琪琰[9]和王武等[10]推薦的治療甲殼綱寄生蟲和吸蟲的潑灑濃度，其原因可能為試驗(yàn)魚規(guī)格、品種有所差異，或水溫、計(jì)算方法、鹽度等存在差異。

2.4 聚維酮碘對錦鯉幼魚的急性毒性

由表5可知，聚維酮碘濃度為281.84mg·L-1（最高濃度）時(shí)，24h的死亡率達(dá)100%；濃度為15.85mg·L-1（最低濃度）時(shí)，96h死亡率為0；濃度為28.18mg·L-1（較低濃度）時(shí)，42h才出現(xiàn)死亡，96h的死亡率仍較低。當(dāng)聚維酮碘濃度為158.49mg·L-1（較高濃度）時(shí)死亡率顯著上升。聚維酮碘對錦鯉幼魚24h和 48h的半致死濃度為 96.39mg·L-1和70.88mg·L-1，安全濃度為 11.49mg·L-1。

表3 甲醛對錦鯉幼魚急性毒性試驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Toxicity of formaldehyde to koi carp fingerlings

表4 敵百蟲對錦鯉幼魚急性毒性試驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Toxicity of trichlorfon to koi carp fingerlings

表5 聚維酮碘對錦鯉幼魚急性毒性試驗(yàn)結(jié)果Tab.5 Toxicity of povidone iodine to koi carp fingerlings

3 討論

3.1 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對錦鯉幼魚的毒性影響

在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，多選用硫酸銅與硫酸亞鐵合劑治療一些寄生蟲疾病。該合劑對刺激隱核蟲Cryptocaryon irritans、小瓜蟲Ichthyophthirius multifiliis等原蟲動物引起的疾病有很好的治療效果。其滅殺寄生蟲的作用機(jī)理上主要是寄生蟲內(nèi)蛋白質(zhì)與銅離子相結(jié)合，生成蛋白鹽，活性蛋白質(zhì)逐漸變性、最后喪失活性，寄生蟲繼而死亡。而硫酸亞鐵主要起輔助藥物的作用，通常用來輔助硫酸銅滅殺一些比較難以滅殺的寄生蟲[11]。錦鯉幼魚的硫酸銅與硫酸亞鐵合劑急性中毒的癥狀為魚體加深變黑，粘液增多，瀕死之前，部分魚不斷躍出水面，藥物濃度越高，其外部癥狀越突出，中毒魚在短時(shí)間內(nèi)死亡。在潑灑硫酸銅時(shí)，需特別關(guān)注水質(zhì)條件，依據(jù)實(shí)際需要與條件來適當(dāng)增減用藥量。如水質(zhì)較肥，可適當(dāng)增加用量，反之，則需要適度降低用藥量。隨著水溫的升高，硫酸銅的毒性增加明顯，因此在夏季水溫較高時(shí)，禁止在錦鯉幼魚養(yǎng)殖池塘中潑灑硫酸銅，以防錦鯉幼魚中毒死亡。

3.2 甲醛對錦鯉幼魚毒性影響

甲醛具明顯的滅殺病毒、芽孢、寄生蟲和細(xì)菌等效果，廣泛應(yīng)用在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，常規(guī)用量多在10～30mg·L-1范圍內(nèi)[12]。錦鯉幼魚甲醛急性中毒表現(xiàn)為：不安亂竄，浮頭，身體側(cè)翻失去平衡，最后死亡。

3.3 敵百蟲對錦鯉幼魚的毒性影響

敵百蟲屬于膽堿酯酶抑制劑，通過對膽堿酯酶活性點(diǎn)磷酸化，降低膽堿酯酶活性，使甲殼類、昆蟲類等神經(jīng)機(jī)能停止而死亡[13]。敵百蟲多用于治療養(yǎng)殖魚類體外寄生甲殼類與體內(nèi)寄生蠕蟲，具低毒、殘留少、殘留時(shí)間長等優(yōu)勢[9]。敵百蟲中毒后錦鯉幼魚的癥狀是：對外界刺激反應(yīng)明顯減弱，在水中游動時(shí)無序翻滾，尾部高頻率擺動。錦鯉幼魚身體出現(xiàn)明顯彎曲，死前基本喪失了平衡力，最后慢慢沉于水底。用藥時(shí)，需綜合關(guān)注實(shí)際條件，分析養(yǎng)殖魚類品種、水溫、溶氧等因素，合理界定藥物濃度；需要觀察養(yǎng)殖魚類的活動狀況。在弱堿性條件下（pH8～10），敵百蟲僅需半小時(shí)就可形成殘毒性更大的敵敵畏，因此配藥時(shí)不僅需要考慮劑量，還需要在潑灑前測定水體pH，以防人為失誤引起養(yǎng)殖魚類中毒。

3.4 聚維酮碘對錦鯉幼魚的毒性影響

聚維酮碘為廣譜、高效消毒殺菌劑，對病毒、細(xì)菌、真菌及霉菌孢子都有較強(qiáng)的滅殺作用，防治水產(chǎn)動物爛鰓、癤瘡、腐皮等細(xì)菌性疾病的效果很好[14,15]，可直接使菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)變性、沉淀，致使病原微生物死亡。有研究報(bào)道，水中有機(jī)物含量明顯影響碘的效應(yīng)，有機(jī)物濃度增加，碘的殺菌效果呈下降趨勢[16-18]。當(dāng)前市售的聚維酮碘大多沒有詳細(xì)的使用說明。水產(chǎn)養(yǎng)殖作業(yè)中通常是憑經(jīng)驗(yàn)使用聚維酮碘，沒有明確的水產(chǎn)用安全濃度，有著相當(dāng)高的不確定性。綜合相關(guān)實(shí)踐分析，在水產(chǎn)苗種繁育過程中聚維酮碘用量一般控制在2～5mg·L-1范圍內(nèi)。本試驗(yàn)得出的錦鯉幼魚的安全濃度大于這一范圍，因此在實(shí)際生產(chǎn)中，需綜合考慮水溫、水質(zhì)、錦鯉幼魚狀態(tài)等來界定其用量。聚維酮碘在弱酸性環(huán)境中低濃度時(shí)穩(wěn)定性好，所釋放的有效碘濃度增加，殺菌效果更優(yōu)。溫度是影響聚維酮碘殺菌效果最關(guān)鍵的因素之一，當(dāng)溫度為30～40℃時(shí)，聚維酮碘殺菌效果明顯增加。聚維酮碘與金屬離子發(fā)生化合反應(yīng)的概率較大，會影響其正常效用。

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