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論文:2種消毒液對副溶血弧菌殺菌及抑菌效果試驗
2種消毒液對副溶血弧菌殺菌及抑菌效果試驗
支建道,王鑫磊,吳凌晨,薛暉,趙彥華*
(1.南通閃水生物科技有限公司,江蘇 南通 226000;2.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所,江蘇 南京 210017)
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)屬于弧菌科,弧菌屬,為既嗜鹽又嗜溫的革蘭陰性短桿菌,在海產(chǎn)品中大量存在,能夠感染多種水生動物,引起水生動物疾病,對水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)造成危害。副溶血弧菌也作為海產(chǎn)品相關(guān)食源性致病菌引起廣泛關(guān)注。研究表明,副溶血弧菌是一種人與水產(chǎn)養(yǎng)殖動物共染的病原菌,尤其是在南美白對蝦養(yǎng)殖過程中廣泛存在。攜帶特異性質(zhì)粒的副溶血弧菌是引起南美白對蝦急性肝胰腺壞死病暴發(fā)的主要原因。
近年來,針對蝦源副溶血弧菌開展了較多研究。有研究發(fā)現(xiàn),感染副溶血弧菌的南美白對蝦臨床上呈現(xiàn)食欲減退、大量伏于岸邊、體色由青轉(zhuǎn)微紅的癥狀,解剖可見肝胰臟腫大,胃腸無內(nèi)容物,且傳播及死亡率較高,一旦發(fā)病,2~3 d可全部死亡。為了解副溶血弧菌對南美白對蝦養(yǎng)殖的危害,選取2種殺菌消毒液,開展了其對副溶血弧菌的殺菌效果及對南美白對蝦養(yǎng)殖池塘的抑菌效果的試驗。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 菌株
從南美白對蝦中分離的菌株于實驗室-80℃冰箱內(nèi)保存。
1.1.2 消毒液
選取2種消毒液,分別為1和2。消毒液1主要成分為次氯酸,由南通閃水生物科技有限公司提供;消毒液2主要成分為過氧化氫,由瑞士SANOSIL公司提供。
1.1.3 培養(yǎng)基及試劑
LB營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、TCBS瓊脂培養(yǎng)基平板、TCBS液體培養(yǎng)基及無菌生理鹽水均由廣州環(huán)凱生物技術(shù)有限公司提供。
1.1.4 試驗設(shè)備
超凈工作臺SW-CJ-1F(蘇凈安泰),37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱DHP-9162(上海一恒),恒溫?fù)u床Innova 42R(艾本德)。
1.2 方法
1.2.1 菌株復(fù)蘇及純化
將含有菌液的凍存管在室溫下解凍,加入LB營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,37℃恒溫培養(yǎng)24 h;接種環(huán)劃線接種于TCBS培養(yǎng)基,37℃恒溫培養(yǎng)24 h;再次挑取藍(lán)綠色單菌落劃線接種于TCBS培養(yǎng)基;重復(fù)試驗3次后,挑選藍(lán)綠色單菌落接種于TCBS液體培養(yǎng)基,37℃恒溫培養(yǎng)24 h,備用。
1.2.2 菌懸液制備
將含菌TCBS培養(yǎng)液,4℃離心,棄上清液,加入無菌生理鹽水,混勻離心,棄上清液,反復(fù)3次后,加入無菌生理鹽水制成菌懸液并計數(shù),于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
1.2.3 消毒液試驗濃度
消毒液試驗濃度設(shè)置見表1。
表1 消毒液配制濃度
1.2.4 殺菌試驗
吸取1 mL菌懸液,加入1號無菌管中,2—8號無菌管中各加入900μL無菌生理鹽水,從1號管中吸取100μL菌懸液加入2號管中,依次倍比稀釋,至第7管后棄去,第8管不加入;隨后每管中加入100μL的0.050 mg/L消毒液1,混勻后靜止24 h后,吸取500μL加入TCBS培養(yǎng)基內(nèi),37℃恒溫培養(yǎng)24 h,觀察有無細(xì)菌生長。同樣的試驗方法對消毒液1其余濃度及消毒液2所有濃度進(jìn)行試驗,記錄試驗結(jié)果。
1.2.5 抑菌試驗
試驗在南通某南美白對蝦養(yǎng)殖場3個南美白對蝦養(yǎng)殖池塘內(nèi)開展,使用無菌器具取池塘水并編號(1號—3號)。每個塘口設(shè)試驗組2組和對照組1組,其中試驗組分別加入消毒液1和消毒液2,使得最終濃度分別為0.005和1.000 mg/L;對照組不添加。37℃恒溫放置24 h,測細(xì)菌總數(shù)并記錄。
2 結(jié)果與分析
2.1 菌懸液計數(shù)
副溶血弧菌菌懸液計數(shù)為2.81×10CFU/L。
2.2 殺菌效果
消毒液1和消毒液2對副溶血弧菌的殺菌結(jié)果分別見表2和表3。當(dāng)副溶血弧菌濃度為2.81×10CFU/L時,消毒液1最低殺菌濃度為0.005 mg/L,消毒液2最低殺菌濃度為1.000 mg/L。
表2 消毒液1#殺菌結(jié)果①
表3 消毒液2#殺菌結(jié)果①
2.3 抑菌效果
消毒液對南美白對蝦養(yǎng)殖池塘的抑菌結(jié)果見表4。消毒液1和消毒液2在最低濃度殺滅副溶血弧菌的同時,對池塘水的細(xì)菌總數(shù)有明顯的抑制作用。
表4 消毒液抑菌效果
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