稚蚌培育中搖蚊殺滅實(shí)驗(yàn)

搖蚊幼蟲俗稱 “紅蟲”，是一種水生昆蟲，是昆蟲綱( Insecta) 雙翅目( Diptera) 搖蚊科( Chirono-midae) 幼蟲的總稱［1］。搖蚊的生長發(fā)育屬完全變態(tài)發(fā)育，蟲體自卵孵出后，經(jīng)幼蟲、蛹發(fā)育為成蟲。三角帆蚌( Hyriopsis cumingii) 稚蚌培育方式一般為小水池流水培育［2］，由于培育季節(jié)及方式極適合搖蚊幼蟲的生長［3］，往往導(dǎo)致稚蚌培育池內(nèi)搖蚊幼蟲大量孳生。搖蚊幼蟲有筑巢習(xí)性，一般用細(xì)沙、淤泥、腐屑等筑巢，雜食性幼蟲攝食細(xì)菌、藻類、有機(jī)碎屑等［1］，與三角帆蚌稚蚌在空間、氧氣和食物等方面產(chǎn)生競爭。某些搖蚊幼蟲還能咬破稚蚌殼，引發(fā)稚蚌死亡。人工育苗實(shí)踐表明，搖蚊幼蟲大量孳生會(huì)嚴(yán)重危害稚蚌的存活和生長［4］。因此，防治搖蚊幼蟲已成為稚蚌培育過程中的難點(diǎn)。由于防治藥物研發(fā)落后，目前生產(chǎn)上一般采用呋喃丹殺除搖蚊幼蟲。呋喃丹是氨基甲酸酯殺蟲劑，屬高毒農(nóng)藥，對環(huán)境生物毒性高，在土壤中殘留時(shí)間長，已被禁止作為漁藥使用［5 －6］。關(guān)于三角帆蚌稚蚌培育池內(nèi)搖蚊幼蟲殺滅技術(shù)的系統(tǒng)研究國內(nèi)外尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)旨在通過對常用水產(chǎn)殺蟲藥進(jìn)行初選，再根據(jù)篩選出的藥物進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，以期找出適用于稚蚌培育池內(nèi)搖蚊幼蟲防治的藥物種類及合理濃度。

1 材料與方法

1. 1 材料

1. 1. 1 試驗(yàn)動(dòng)物

三角帆蚌稚蚌及搖蚊幼蟲均采自浙江省金華市威旺公司養(yǎng)殖基地稚蚌培育池內(nèi)。三角帆蚌稚蚌殼長( 0. 82 ± 0. 11) cm。搖蚊幼蟲為 4 齡個(gè)體［1］，體色紅色，體長( 0. 92 ± 0. 08) cm。試驗(yàn)前 1 d 挑選活力好、大小基本一致的稚蚌和搖蚊幼蟲，暫養(yǎng)于充分曝氣 72 h 的自來水中，使其消化道排空。

1. 1. 2 試驗(yàn)藥物

參試藥物為 8 種水產(chǎn)常用殺蟲劑: 吡喹酮 2%可濕性粉劑( 山西運(yùn)城春蕾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)) ;伊維菌素 1%液體( 湖北武漢農(nóng)大生物科技有限公司生產(chǎn)) ; 阿維菌素 0. 5%液體( 山西永濟(jì)市瑞普動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)) ; 敵百蟲 90% 粉劑( 江蘇南通江山農(nóng)藥化工股份有限公司生產(chǎn)) ; 氰戊菊酯8% 液體和溴氰菊酯 1% 液體( 武漢九州神農(nóng)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)) ; 甲苯咪唑10%液體和苯扎溴銨20%液體( 山西太原神龍應(yīng)用技術(shù)有限公司生產(chǎn)) 。

1. 2 急性毒性試驗(yàn)

1. 2. 1 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)容器采用 26 cm × 17 cm × 7 cm 冰盆，放置于空調(diào)室中控制水溫，試驗(yàn)使用容積 1 000 mL。試驗(yàn)用水為充分曝氣 72 h 的自來水，pH7. 5 ±0. 2，水溫( 27 ± 1) ℃，總氨氮含量為 0. 1 mg/L，其它指標(biāo)符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)［7］。

1. 2. 2 藥物篩選試驗(yàn)

按照藥物推薦使用量設(shè)置試驗(yàn)液濃度，每一試驗(yàn)液放入 10 只稚蚌和 10 只搖蚊幼蟲，組內(nèi)設(shè) 3 個(gè)平行，30 min 后觀察記錄各實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的死亡率。稚蚌以顯微觀察心臟停止搏動(dòng) 1 min 以上，貝殼張開，用解剖針多次刺激后無閉殼反應(yīng)為死亡標(biāo)準(zhǔn)［8］，搖蚊幼蟲以玻璃棒輕壓尾部3 次后不動(dòng)為死亡標(biāo)準(zhǔn)［9］。

1. 2. 3 急性毒性試驗(yàn)

在藥物篩選試驗(yàn)基礎(chǔ)上，對初選藥物進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。按照急性毒性試驗(yàn)方法［8，10］，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定試驗(yàn)濃度區(qū)間，按等對數(shù)間距設(shè)置 6 個(gè)梯度濃度組和 1 個(gè)空白對照組，每一試驗(yàn)液放入20 只稚蚌或 20 只搖蚊幼蟲，組內(nèi)設(shè) 3 個(gè)平行，各試驗(yàn)藥物的具體濃度見表 2。試驗(yàn)期間連續(xù)觀察受試對象的活動(dòng)狀況，及時(shí)取出死亡個(gè)體，每 24 h更換試驗(yàn)液并記錄 1 次總體死亡量。試驗(yàn)期間不投餌、不充氣。

1. 2. 4 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)采用 Microsoft Excel XP 軟件處理。根據(jù)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果將劑量換算成對數(shù)劑量( x) ，平均死亡率轉(zhuǎn)換成概率單位( y) ，建立死亡概率單位 － 質(zhì)量濃度對數(shù)直線回歸方程，求出半致死濃度( LC50) 及各自的 95% 置信區(qū)間，試驗(yàn)藥物的安全濃度計(jì)算公式［10］:SC = 0. 1 × 96 h LC50式中，SC 為安全濃度，96 h LC50為試驗(yàn) 96 h時(shí)的半致死濃度。

1. 3 生產(chǎn)應(yīng)用試驗(yàn)

1. 3. 1 稚蚌培育池條件

三角帆蚌稚蚌培育池為 63 cm × 41. 5 cm ×12 cm塑料箱，放置于育苗室中，底鋪 1. 5 cm 厚的新鮮塘泥，試驗(yàn)使用容積 20 L。稚蚌采取流水培育，培育用水引自池塘蓄水池，透明度 35 cm，pH6. 5 ～ 7. 5，水溫 26 ～ 28 ℃ ，池水流速 2 L / min。

1. 3. 2 藥物應(yīng)用試驗(yàn)

以室內(nèi)藥物試驗(yàn)結(jié)果所選的參試藥物及其濃度為依據(jù)，根據(jù) 96 h 后三角帆蚌稚蚌最高全存活濃度及搖蚊幼蟲最低全死亡濃度為試驗(yàn)濃度區(qū)間，按等對數(shù)間距設(shè)置 6 個(gè)梯度濃度組和 1 個(gè)空白對照組，每組放入 100 只稚蚌和 100 只搖蚊幼蟲，組內(nèi)設(shè) 3 個(gè)平行，試驗(yàn)藥物的具體濃度見表 4。藥物放入時(shí)停止流水，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?0 min 后恢復(fù)流水。24 h 及 48 h 后觀察搖蚊幼蟲的存活情況和稚蚌腸道空腸情況。

2 結(jié)果

2. 1 8 種藥物的初篩結(jié)果

藥物殺滅效果試驗(yàn)結(jié)果見表 1。由表 1 可見，吡喹酮在6 mg/L 濃度下對三角帆蚌稚蚌毒性較強(qiáng)，而對搖蚊幼蟲無殺滅作用; 伊維菌素、阿維菌素和氰戊菊酯 3 種藥物在常規(guī)劑量下對三角帆蚌稚蚌和搖蚊幼蟲的殺滅效果較好但差異不顯著。敵百蟲、苯扎溴銨和甲苯咪唑 3 種藥物在高劑量下對三角帆蚌稚蚌和搖蚊幼蟲均無殺滅作用，表明以上 7 種藥物均不適合用于殺滅稚蚌培育池中的搖蚊幼蟲。溴氰菊酯在 2 mg/L 濃度下，對搖蚊幼蟲具有較強(qiáng)的殺滅效果，而對稚蚌無明顯毒性作用。

2. 2 溴氰菊酯對三角帆蚌稚蚌和搖蚊幼蟲的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

由表 2 可見，對照組三角帆蚌稚蚌和搖蚊幼蟲死亡率均為 0，試驗(yàn)組稚蚌和搖蚊幼蟲的死亡率均隨著試驗(yàn)濃度的升高和時(shí)間的延長而升高。對于稚蚌的試驗(yàn)，24 h 時(shí)各濃度組均未出現(xiàn)死亡; 48 h 時(shí)2. 14 mg / L 濃度組未出現(xiàn)死亡，其余各試驗(yàn)濃度組死亡率均低于41%; 72 h 時(shí)2. 62 mg/L 及以上濃度組死亡率等于或超過 50%，3. 00 mg/L 濃度組全部死亡; 96 h 時(shí) 2. 14 mg/L 濃 度 組 出 現(xiàn) 死 亡，2. 62 mg / L以上濃度組死亡率均超過 50% 。搖蚊幼蟲的 試 驗(yàn)，24 h 時(shí) 各 濃 度 組 均 出 現(xiàn) 死 亡，0. 200 mg / L濃度組死亡率最大，為 50% ; 48 h 時(shí)0. 0928 mg / L 及以上濃度組死亡率等于或超過50% ; 72 h 時(shí) 0. 0200 mg / L 及以上濃度組死亡率等于或超過 50%; 96 h 時(shí) 0. 020 0 mg/L 及以上濃度組死亡率均超過 54%，0. 200 0 mg/L 濃度組全部死亡。對表 2 數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，得出不同試驗(yàn)時(shí)間下稚蚌和搖蚊幼蟲濃度對數(shù) － 死亡率概率單位回歸方程，估算 LC50和 SC，結(jié)果見表 3。由表 3 可見，稚蚌和搖蚊幼蟲的 LC50均隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長而降低，稚蚌的 48 h LC50和 96 h LC50分別為3. 150 mg / L、2. 471 mg / L，搖蚊幼蟲的 48 h LC50和96 h LC50分別為0. 1044 mg/L、0. 0185 mg/L。稚蚌和 搖 蚊 幼 蟲 的 SC 分 別 為 0. 247 mg/L、0. 00185 mg / L，表明溴氰菊酯對搖蚊幼蟲的毒性是三角帆蚌稚蚌的 133. 5 倍。

2. 3 溴氰菊酯殺滅搖蚊幼蟲應(yīng)用試驗(yàn)結(jié)果

由表 4 可見，對照組搖蚊幼蟲未出現(xiàn)死亡，稚蚌腸道食物充塞飽滿。試驗(yàn)組搖蚊幼蟲平均死亡率隨著藥物使用濃度的增加和試驗(yàn)時(shí)間的延長而升高。當(dāng)溴氰菊酯使用濃度為 0. 928 mg/L 以上時(shí)，24 h 時(shí)搖蚊幼蟲全部死亡，溴氰菊酯使用濃度0. 431 ～ 0. 632 mg / L 時(shí)，24 h 時(shí)搖蚊幼蟲平均死亡率為 80% 以上，48 h 時(shí)搖蚊幼蟲平均死亡率為95% 以上。試驗(yàn)組 48 h 時(shí)稚蚌腸道食物充塞飽滿，表明溴氰菊酯使用濃度 0. 2 ～2 mg/L 范圍內(nèi)，稚蚌在 48 時(shí)恢復(fù)正常的生理功能。24 h 時(shí)稚蚌平均空腸率隨著藥物使用濃度的增加而增加，尤其當(dāng)藥物使用濃度為 0. 928 mg/L 以上時(shí)，稚蚌平均空腸率為 85%以上。綜合藥物使用濃度對搖蚊幼蟲殺滅效果及稚蚌攝食的影響，認(rèn)為在稚蚌培育生產(chǎn)中，溴氰菊酯使用濃度為 0. 431 mg/L ～0. 632 mg/L 時(shí)，停水 30 min 后恢復(fù)供水，既能較好殺滅搖蚊幼蟲，又能減小對稚蚌生理功能的影響。

3 討論

三角帆蚌稚蚌培育為流水培育，通過不斷的流水，使得稚蚌培育池保持良好的水質(zhì)及餌料［2］。由于稚蚌耗氧率較高［11］，在應(yīng)用藥物殺滅搖蚊幼蟲時(shí)停水時(shí)間不宜過長，以免缺氧。本試驗(yàn)根據(jù)稚蚌流水培育特征，采用 30 min 的靜水急性毒性試驗(yàn)方法，以期篩選出短時(shí)間內(nèi)殺滅搖蚊幼蟲，而對稚蚌影響較小的藥物及濃度。在藥物篩選過程中，所選藥物必須滿足以下幾個(gè)原則［12］: 符合國家規(guī)定準(zhǔn)許使用的漁藥; 對搖蚊幼蟲殺滅效果顯著，專一性強(qiáng); 對三角帆蚌稚蚌毒性低，影響小。吡喹酮是一種廣譜驅(qū)蟲藥，對三角帆蚌稚蚌毒性強(qiáng)于搖蚊幼蟲，不宜用于殺滅搖蚊幼蟲。伊維菌素與阿維菌素均為新型廣譜、高效、低毒抗生素類抗寄生蟲藥，對體內(nèi)外寄生蟲特別是線蟲和節(jié)肢動(dòng)物均有良好驅(qū)殺作用［13］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明伊維菌素與阿維菌素在低濃度下對搖蚊幼蟲具有較好的殺滅效果，同時(shí)對三角帆蚌稚蚌毒性也很強(qiáng)，不適于殺滅搖蚊幼蟲。敵百蟲、苯扎溴銨和甲苯咪唑即使在高濃度下，短時(shí)間內(nèi)對搖蚊幼蟲無殺滅效果，故不宜在稚蚌培育池內(nèi)用于殺滅搖蚊幼蟲。溴氰菊酯和氰戊菊酯均為擬除蟲菊酯類殺蟲劑，主要用于防治中華鳋( Sinergasilus) 、錨頭鳋( Lernaea) 等寄生蟲疾病［13］。試驗(yàn)結(jié)果表明 2 種菊酯類藥物對搖蚊幼蟲殺滅效果均較好，但氰戊菊酯對三角帆蚌稚蚌毒性較強(qiáng)，不宜用于稚蚌培育池內(nèi)殺滅搖蚊幼蟲。姜輝等［14］研究表明溴氰菊酯對鰱( Hyphophthalmichthys molitrix ) 、 鯉 ( Carassiuscarpio) 、鯽 ( Carassiu sauratus) 的 96 h LC50范圍為0. 34 ～ 0. 83 μg / L，耿雪冰等［15］研究結(jié)果表明溴氰菊酯對中華絨螯蟹( Eriocheir sinensis) 成蟹、幼蟹、扣蟹的 96 h LC50范圍為 0. 31 ～0. 65 μg/L。本研究得到溴氰 菊 酯 對 搖 蚊 幼 蟲 和 三 角 帆 蚌 稚 蚌 的96 h LC50值分別為 18. 51、2471 μg/L，由此可見，溴氰菊酯對搖蚊幼蟲、魚類、河蟹均為劇毒，對三角帆蚌稚蚌為中毒［16］，對搖蚊幼蟲的毒性是三角帆蚌稚蚌的 133. 5 倍，表明溴氰菊酯對搖蚊幼蟲殺滅效果顯著，而對三角帆蚌稚蚌毒性較低，可作為殺滅稚蚌培育池中搖蚊幼蟲的理想藥物。

溴氰菊酯是一種殺寄生甲殼動(dòng)物藥，該產(chǎn)品殺蟲范圍廣、殺蟲效力強(qiáng)、速效、低毒、低殘留。本試驗(yàn)認(rèn)為，在三角帆蚌稚蚌培育池內(nèi)，停水后按有效濃度 0. 431 ～0. 632 mg/L 潑灑溴氰菊酯，30 min后恢復(fù)供水，能有效殺滅搖蚊幼蟲。目前稚蚌培育池規(guī)格一般為120 cm ×110 cm，水位7. 5 cm，若溴氰菊酯有效使用濃度為0. 5 mg/L，則1 個(gè)培育池所需1%的液體藥品為5 mL，1 瓶100 mL 的藥品可使用于 20 個(gè)池子，每池的費(fèi)用為 0. 5 元左右。為防止藥物不均勻，造成局部濃度過高，引發(fā)稚蚌中毒現(xiàn)象，藥物使用過程中應(yīng)注意以下幾個(gè)問題: 嚴(yán)格計(jì)算藥品使用量，將藥品稀釋 2 000 倍后，裝入塑料噴霧器中噴灑，藥品現(xiàn)配現(xiàn)用; 結(jié)合日常育苗管理進(jìn)行施藥，藥品噴灑前停水，噴灑后立即操池( 即用手不接觸到池底，輕輕攪動(dòng)池水，激起沉淀在池底的淤泥，俗稱 “操池”) ，靜置 30 min 后恢復(fù)流水。搖蚊幼蟲通常需經(jīng)歷 3 次蛻皮 4 個(gè)齡期［1］，一般研究認(rèn)為搖蚊幼蟲對藥物的耐受性隨著齡期增加而增加［17 －19］。孫興濱等［17］研究表明二氧化氯對搖蚊幼蟲的毒力隨幼蟲齡期的增長而降低。Willians等［18］認(rèn)為河岸搖蚊幼蟲( Chironomus riparius) 對鎘的耐受性隨生長迅速增加，第 4 齡幼蟲的耐受性最大。Powlesand 等［19］也認(rèn)為搖蚊幼蟲的第 1 齡是最敏感階段，第 2 齡的耐受性高于第 1 齡。本試驗(yàn)在搖蚊幼蟲第 4 齡期、稚蚌平均殼長 0. 82 cm、試驗(yàn)平均水溫 27 ℃的條件下進(jìn)行，在實(shí)際生產(chǎn)中，應(yīng)注意搖蚊幼蟲齡期、稚蚌大小及不同水溫等條件變化，適當(dāng)掌握溴氰菊酯的實(shí)際使用濃度。

（作者不詳）