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鯉魚浮腫病的防控技術(shù)要點(diǎn)
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一、概述
鯉魚浮腫病毒病，又稱錦鯉睡眠病，是鯉魚和觀賞錦鯉的一種重要急性傳染病，發(fā)病的魚死亡率可達(dá)80-100%。自1970年日本首次報道以來，該病已蔓延到英國、法國、荷蘭、德國、意大利、捷克、奧地利、波蘭和印度等國，該病的病原為鯉魚浮腫病毒（CEV），目前已進(jìn)入中國。有文獻(xiàn)報道目前養(yǎng)殖鯉、錦鯉的病毒陽性率較高，亟需加強(qiáng)該病原的監(jiān)測、防控。
二、病原及檢測方法
鯉魚浮腫病毒（CEV）又名鯉痘病毒，隸屬痘病毒科，病毒大小約200nm×400nm，有囊膜，基因組為雙鏈DNA。對普通去污劑、氯仿、氧化劑等敏感，感染的靶器官為鰓、眼球、腎臟和皮膚等。CEV一般感染鯉、錦鯉，偶爾可感染金魚，不同規(guī)格的魚均對CEV敏感，可通過直接接觸、攝食、水、餌料、鳥類等傳播，其病程一般為7-10天。由于其造成的危害，2016年亞太水產(chǎn)養(yǎng)殖網(wǎng)絡(luò)中心在AGM會議上，正式提出將該病列入亞太區(qū)域水生動物疫病監(jiān)測名錄。
檢測該病原取病魚腮或腎組織抽提DNA做nested-PCR擴(kuò)增。第一次PCR擴(kuò)增：正向引物F1：5'-ATGGAGTATCCAAAGTACTTAG-3';反向引物R1：5'-CTCTTCACTATTGTGACTTTG-3’,擴(kuò)增528bp的片段；第二次擴(kuò)增：正向引物F2：5’-GTTATCAATGAAATTTGTGTATTG-3’，反向引物R2：5’-TAGCAAAGTACTACCTCATCC-3’，擴(kuò)增478bp的片段。反應(yīng)體系（50 mL）為2×預(yù)混合液（2×master mix）25 mL，引物F1、R1各2 mL，模板5 mL，DEPC水補(bǔ)至50 mL。第一次和第二次擴(kuò)增的反應(yīng)條件均為95 ℃預(yù)變性4 min，95 ℃變性1 min，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)后72 ℃再延伸10 min。
三、臨床癥狀及發(fā)病溫度
患病魚表現(xiàn)為呈昏睡狀或聚集在水面下或躺在魚池底部，并在隨后的2周內(nèi)死亡，主要癥狀為身體浮腫、眼球內(nèi)陷、鰓腫脹增生、尾鰭充血和肛門紅腫，此外，魚體分泌的粘液很容易被擦掉，從而露出粗糙的鱗片，解剖可見腎臟糜爛、腸道質(zhì)地變脆等，文獻(xiàn)報道的發(fā)病溫度一般為7-27°C。人工感染實(shí)驗(yàn)表明，24℃條件下感染鯉魚在第三天出現(xiàn)嗜睡癥狀，第5天大多數(shù)鯉魚即出現(xiàn)典型的臨床癥狀。第6天開始出現(xiàn)死亡，第8-10天出現(xiàn)死亡高峰，12天內(nèi)死亡率達(dá)100%。
四、防控技術(shù)要點(diǎn)
1、加強(qiáng)引進(jìn)魚種的CEV檢測。目前對于CEV的感染沒有有效的治療方法，因此使用分子生物學(xué)手段對魚種進(jìn)行CEV檢測，對及時發(fā)現(xiàn)CEV攜帶并切斷其傳播至關(guān)重要。目前已經(jīng)建立的快速檢測方法包括nested-PCR檢測法、環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增（LAMP）檢測法、RAA-LFD檢測法和熒光定量PCR檢測法等。其中nested-PCR檢測法是目前較為穩(wěn)定，且適用于大批量檢測的方法。
2、避免鯉魚、錦鯉和金魚混養(yǎng)。目前的研究表明CEV的易感宿主包括鯉、錦鯉和金魚，因此在這些魚的養(yǎng)殖池中再引入易感魚種，會有帶入病原的風(fēng)險，由于CEV對環(huán)境的耐受性較高，在水中擴(kuò)散能力較強(qiáng)，稍有不慎，即可對養(yǎng)殖池及周邊水域造成發(fā)病風(fēng)險。
3、換池操作盡量保持水溫一致。已有發(fā)病案例表明，將魚種從溫度較高的水體放入溫度較低的水體時，容易造成該病的急性暴發(fā)，可能與魚體應(yīng)激導(dǎo)致免疫力降低有關(guān)。
4、有條件的養(yǎng)殖池可用升高水溫的方法進(jìn)行應(yīng)急治療。人工感染實(shí)驗(yàn)表明，在28℃條件下，感染鯉魚5天后出現(xiàn)輕微的癥狀，14天內(nèi)死亡率為27%，表明溫度是影響CEV感染發(fā)病和死亡率的重要因素，水溫的升高可有效降低患病魚的死亡率。
5、做好發(fā)病池的隔離。一旦發(fā)生病害，要將病死魚作無害化處理。對發(fā)病魚池使用的器械等進(jìn)行徹底消毒，禁止將池水排放入公共水域，防止病原向周邊傳播蔓延。
鯉魚浮腫病毒病，又稱錦鯉睡眠病，是鯉魚和觀賞錦鯉的一種重要急性傳染病，發(fā)病的魚死亡率可達(dá)80-100%。自1970年日本首次報道以來，該病已蔓延到英國、法國、荷蘭、德國、意大利、捷克、奧地利、波蘭和印度等國，該病的病原為鯉魚浮腫病毒（CEV），目前已進(jìn)入中國。有文獻(xiàn)報道目前養(yǎng)殖鯉、錦鯉的病毒陽性率較高，亟需加強(qiáng)該病原的監(jiān)測、防控。
二、病原及檢測方法
鯉魚浮腫病毒（CEV）又名鯉痘病毒，隸屬痘病毒科，病毒大小約200nm×400nm，有囊膜，基因組為雙鏈DNA。對普通去污劑、氯仿、氧化劑等敏感，感染的靶器官為鰓、眼球、腎臟和皮膚等。CEV一般感染鯉、錦鯉，偶爾可感染金魚，不同規(guī)格的魚均對CEV敏感，可通過直接接觸、攝食、水、餌料、鳥類等傳播，其病程一般為7-10天。由于其造成的危害，2016年亞太水產(chǎn)養(yǎng)殖網(wǎng)絡(luò)中心在AGM會議上，正式提出將該病列入亞太區(qū)域水生動物疫病監(jiān)測名錄。
檢測該病原取病魚腮或腎組織抽提DNA做nested-PCR擴(kuò)增。第一次PCR擴(kuò)增：正向引物F1：5'-ATGGAGTATCCAAAGTACTTAG-3';反向引物R1：5'-CTCTTCACTATTGTGACTTTG-3’,擴(kuò)增528bp的片段；第二次擴(kuò)增：正向引物F2：5’-GTTATCAATGAAATTTGTGTATTG-3’，反向引物R2：5’-TAGCAAAGTACTACCTCATCC-3’，擴(kuò)增478bp的片段。反應(yīng)體系（50 mL）為2×預(yù)混合液（2×master mix）25 mL，引物F1、R1各2 mL，模板5 mL，DEPC水補(bǔ)至50 mL。第一次和第二次擴(kuò)增的反應(yīng)條件均為95 ℃預(yù)變性4 min，95 ℃變性1 min，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)后72 ℃再延伸10 min。
三、臨床癥狀及發(fā)病溫度
患病魚表現(xiàn)為呈昏睡狀或聚集在水面下或躺在魚池底部，并在隨后的2周內(nèi)死亡，主要癥狀為身體浮腫、眼球內(nèi)陷、鰓腫脹增生、尾鰭充血和肛門紅腫，此外，魚體分泌的粘液很容易被擦掉，從而露出粗糙的鱗片，解剖可見腎臟糜爛、腸道質(zhì)地變脆等，文獻(xiàn)報道的發(fā)病溫度一般為7-27°C。人工感染實(shí)驗(yàn)表明，24℃條件下感染鯉魚在第三天出現(xiàn)嗜睡癥狀，第5天大多數(shù)鯉魚即出現(xiàn)典型的臨床癥狀。第6天開始出現(xiàn)死亡，第8-10天出現(xiàn)死亡高峰，12天內(nèi)死亡率達(dá)100%。
四、防控技術(shù)要點(diǎn)
1、加強(qiáng)引進(jìn)魚種的CEV檢測。目前對于CEV的感染沒有有效的治療方法，因此使用分子生物學(xué)手段對魚種進(jìn)行CEV檢測，對及時發(fā)現(xiàn)CEV攜帶并切斷其傳播至關(guān)重要。目前已經(jīng)建立的快速檢測方法包括nested-PCR檢測法、環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增（LAMP）檢測法、RAA-LFD檢測法和熒光定量PCR檢測法等。其中nested-PCR檢測法是目前較為穩(wěn)定，且適用于大批量檢測的方法。
2、避免鯉魚、錦鯉和金魚混養(yǎng)。目前的研究表明CEV的易感宿主包括鯉、錦鯉和金魚，因此在這些魚的養(yǎng)殖池中再引入易感魚種，會有帶入病原的風(fēng)險，由于CEV對環(huán)境的耐受性較高，在水中擴(kuò)散能力較強(qiáng)，稍有不慎，即可對養(yǎng)殖池及周邊水域造成發(fā)病風(fēng)險。
3、換池操作盡量保持水溫一致。已有發(fā)病案例表明，將魚種從溫度較高的水體放入溫度較低的水體時，容易造成該病的急性暴發(fā)，可能與魚體應(yīng)激導(dǎo)致免疫力降低有關(guān)。
4、有條件的養(yǎng)殖池可用升高水溫的方法進(jìn)行應(yīng)急治療。人工感染實(shí)驗(yàn)表明，在28℃條件下，感染鯉魚5天后出現(xiàn)輕微的癥狀，14天內(nèi)死亡率為27%，表明溫度是影響CEV感染發(fā)病和死亡率的重要因素，水溫的升高可有效降低患病魚的死亡率。
5、做好發(fā)病池的隔離。一旦發(fā)生病害，要將病死魚作無害化處理。對發(fā)病魚池使用的器械等進(jìn)行徹底消毒，禁止將池水排放入公共水域，防止病原向周邊傳播蔓延。
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