王曉英，王家軍，朱根軍

(1.寶應(yīng)縣水產(chǎn)技術(shù)指導(dǎo)站，江蘇 寶應(yīng) 225800；2.寶應(yīng)縣氾水鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，江蘇 寶應(yīng) 225819)

近幾年寶應(yīng)縣不少養(yǎng)殖戶引進(jìn)加州鱸進(jìn)行池塘養(yǎng)殖，雖然引進(jìn)加州鱸養(yǎng)殖時(shí)間不長，但因放養(yǎng)密度較高等多種原因，加州鱸養(yǎng)殖過程中病害的種類越來越多，而病毒造成的危害更加不容忽視。筆者分享一例加州鱸虹彩病毒病害的診治與防控過程，希望加州鱸養(yǎng)殖戶能夠借鑒。

一、養(yǎng)殖塘口及管理

加州鱸養(yǎng)殖發(fā)病塘口位于寶應(yīng)縣氾水鎮(zhèn)，面積38 畝，平均水深1.9 米，水源良好。池內(nèi)配備葉輪式增氧機(jī) 6 臺(tái)(3 千瓦 2 臺(tái)、1.5 千瓦 4 臺(tái))。2021 年4 月17 日由浙江省購進(jìn)12 萬尾加州鱸苗種，平均規(guī)格11.9 克/尾，在池塘邊用網(wǎng)圍出約2.5 畝水面進(jìn)行馴養(yǎng)，每天投喂4 次2#加州鱸專用飼料(蛋白質(zhì)水平50%)，28天后放入大池中，投放量3 000 尾/畝(剩余魚種放入面積為5 畝的另外1 只池塘)；套放異育銀鯽200 尾/畝、白鰱20 尾/畝、花鰱45 尾/畝。隨著加州鱸生長，適時(shí)改投3#、4#加州鱸專用顆粒飼料(蛋白質(zhì)水平48%～49%)，每天投喂調(diào)整為3 次。每間隔3～5 天加注新水1次；晴好天氣下，每天凌晨及中午各開增氧機(jī)1次、累計(jì)時(shí)間在6小時(shí)以上，陰雨天根據(jù)情況適時(shí)開機(jī)；每7～10 天交替潑灑復(fù)合微生態(tài)制劑、復(fù)合有機(jī)酸，拋撒10%過硫酸氫鉀復(fù)合鹽片劑；7月下旬以后，每4～5天使用“復(fù)合芽孢桿菌”等微生態(tài)制劑改良水質(zhì)，養(yǎng)殖過程中水質(zhì)良好。

二、加州鱸發(fā)病及診斷

6 月下旬至7 月初，養(yǎng)殖戶發(fā)現(xiàn)少量魚體表潰瘍，鏡檢鰓絲有車輪蟲、指環(huán)蟲寄生，使用2%復(fù)合碘250 毫升＋硫酸銅70 克＋中草藥“出血爛鰓康”300 毫升/(畝·米)，化水全池潑灑1 次，“爛身”癥狀有所改善。7月10日發(fā)現(xiàn)部分鱸魚沿池邊緩慢游動(dòng)，次日有少量死亡，每天死亡30～40 尾，隨后死亡量逐漸增加，1 周后每天死亡量500～600 尾。7 月20 日筆者到塘口檢查，水體溶氧在5 毫克/升以上，水質(zhì)快速檢測儀現(xiàn)場測定，NH4＋-N 為 1.25 毫克/升，NO2--N 為 0.1 毫克/升；現(xiàn)場檢查發(fā)病魚體表潰瘍面、鰓絲病變，有爛鰓癥狀(圖1、圖2)；解剖發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟脂肪塊堆積、腸道表面被脂肪覆蓋、腸內(nèi)空無食物(圖3)；肝臟有點(diǎn)狀出血、花肝，部分有腹水(圖4)。實(shí)驗(yàn)室檢測虹彩病毒及腫大細(xì)胞病毒，并進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。參考夏理海等(2016)的方法，設(shè)計(jì)并合成用于鑒定虹彩病毒科蛙病毒和腫大細(xì)胞病毒的特異性PCR引物，在無菌條件下解剖發(fā)病加州鱸，取其肝、脾、腎、鰓組織，各加入200 微升5%Chelex-100懸濁液和20微升蛋白酶K，混勻10秒、56℃水浴20 分鐘、99℃水浴 8 分鐘、4℃環(huán)境下12 000 轉(zhuǎn)/分離心4 分鐘，上清液即為待測樣品DNA。其擴(kuò)增程序?yàn)?5℃預(yù)變性3 分鐘、95℃變性30 秒、55℃退火 30 秒、72℃延伸 30 秒，共進(jìn)行35 個(gè)循環(huán)，最后在72℃繼續(xù)延伸10 分鐘，4℃保存。PCR 擴(kuò)增完成后，取6 微升PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物使用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。凝膠電泳發(fā)現(xiàn)蛙病毒目標(biāo)條帶，未見腫大細(xì)胞病毒目標(biāo)條帶；同時(shí)參考柯文杰等(2020)方法進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)，結(jié)果表明感染細(xì)菌主要是嗜水氣單胞菌。

圖1 病魚外觀

圖2 鰓絲病變

圖3 腸道脂肪覆蓋，無食物

圖4 腹部腫大

三、藥物使用及效果

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果判斷，加州鱸感染虹彩病毒兼有嗜水氣單胞菌引起的細(xì)菌性病害。據(jù)此情況，在確保養(yǎng)殖水體環(huán)境穩(wěn)定、魚體免疫力增強(qiáng)的前提下，重點(diǎn)用藥物治療細(xì)菌病害。具體用藥方案如下：7 月21 日上午，使用“免疫多糖”110 克＋7%VC粉 250 克/(畝·米)化水全池潑灑；23 日上午，使用8%一元二氧化氯片劑120～200 克/(畝·米)全池拋撒，傍晚使用2%復(fù)合碘250 毫升/(畝·米)化水全池潑灑，當(dāng)晚全池拋撒“顆粒氧”片劑220克/(畝·米)，24日上述制劑及用量重復(fù)使用1 次；7 月26 日，使用“免疫多糖”110 克＋7%VC粉 250 克/(畝·米)化水全池潑灑1次，外用的同時(shí)，拌餌內(nèi)服10%氟苯尼考粉＋10%鹽酸多西環(huán)素糖粉＋膽汁酸＋多維＋維生素K3(用量參照商品包裝使用說明)，每天傍晚投喂1 次，連喂7 天。7 月26 日魚的死亡數(shù)量下降到300 尾左右，隨著25－29 日寶應(yīng)地區(qū)降雨及降溫過程，每天死亡量逐漸下降到30～40 尾；至8 月中下旬，每天雖仍有10 尾左右死亡量，但總體上病情得到了有效控制。

四、討論與分析

加州鱸自引進(jìn)以來，隨著養(yǎng)殖密度增加、水體環(huán)境惡化以及病原微生物的傳播擴(kuò)散，病害越來越多，而病毒病的發(fā)生越來越頻繁且造成的損失越來越大。據(jù)文獻(xiàn)資料，能夠自然感染引發(fā)加州鱸成魚死亡的病毒病多為虹彩病毒科蛙病毒、細(xì)胞腫大病毒等種類，偶有加州鱸感染彈狀病毒及神經(jīng)壞死病毒的情況發(fā)生。由于養(yǎng)殖塘口發(fā)病大量死魚時(shí)的環(huán)境溫度(30℃左右)是該病發(fā)生的理想溫度，且病死魚(體表有斑塊狀出血性潰瘍，爛鰓，肝臟點(diǎn)狀出血、花肝等)疑是加州鱸虹彩病毒病癥，因此對(duì)發(fā)病加州鱸進(jìn)行了蛙病毒及細(xì)胞腫大病毒的檢測。

虹彩病毒科蛙病毒屬引發(fā)病害時(shí)，可以導(dǎo)致加州鱸大面積發(fā)病死亡，也可以是不表現(xiàn)癥狀的隱性帶毒，對(duì)該病的診斷必須綜合流行情況、癥狀、剖檢、病毒分離鑒定等進(jìn)行判定(王慶等，201l)。9月1日，筆者從病害基本得到控制的養(yǎng)殖塘口，隨機(jī)抽取2尾活動(dòng)正常、未表現(xiàn)發(fā)病癥狀的加州鱸，采用PCR方法進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)蛙病毒屬的虹彩病毒仍然是陽性，與發(fā)病大量死亡時(shí)相比，僅僅病毒檢出的部位有差異。因此飼養(yǎng)密度過大、溶氧降低或水體環(huán)境的劇烈變化等可能是導(dǎo)致該病暴發(fā)死亡的誘因，合理的養(yǎng)殖模式以及科學(xué)的管理方式才是預(yù)防該病最好的措施。

魚類病毒病防治過程中忌亂用藥，用藥不當(dāng)極易引起魚體應(yīng)激反應(yīng)而增加死亡。此次防控過程中養(yǎng)殖戶甘愿冒險(xiǎn)用藥并取得較好的效果，主要是使用了針對(duì)細(xì)菌性疾病的藥物品種，對(duì)水體消毒、殺滅病原起到了很好的作用，而池塘水體潑灑免疫多糖及VC粉、顆粒氧片劑等，降低了魚的應(yīng)激反應(yīng)，增加了水體溶氧；內(nèi)服藥物的同時(shí)添加膽汁酸、多維等品種起到了調(diào)理魚體的作用。當(dāng)然，此次藥物使用后剛好有一次降雨降溫過程，效果是否偶然，有待進(jìn)一步分析研究。