異育銀鯽潰瘍病病原菌藥物敏感性及池塘用藥療效

異育銀鯽潰瘍病病原菌藥物敏感性及池塘用藥療效

孟思妤1 孟長(zhǎng)明1 陳昌福2

（1.河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 430070）

異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）在養(yǎng)殖的過程中，可能有多種疾病發(fā)生。體表出現(xiàn)潰瘍（見圖1）癥狀是養(yǎng)殖魚類比較常見的疾病之一。為了有效地治療這種疾病，我們從具有典型癥狀的患病異育銀鯽腎臟中分離一種優(yōu)勢(shì)菌，經(jīng)初步鑒定屬于弧菌（Vibrio sp.）。

為了控制由這種細(xì)菌性疾病對(duì)養(yǎng)殖

1.1 供試菌株

2015年4 月從江蘇省射陽縣某養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖的患潰瘍病異育銀鯽體內(nèi)分離SYY0503061、SYY0503083、SYY0503092和SYY0503094等4個(gè)菌株，作為檢測(cè)藥物敏感性的供試致病菌株。

1.2 供試藥物

本研究中用于對(duì)分離菌株進(jìn)行藥異育銀鯽的危害，能在藥物治療這種疾病的過程中做到對(duì)癥用藥，利用分離菌株進(jìn)行了對(duì)各種抗生素類藥物的敏感性測(cè)定，并且在此基礎(chǔ)上選擇對(duì)分離菌株敏感的藥物，在疾病發(fā)生的養(yǎng)殖池塘中進(jìn)行了藥物治療疾病的試驗(yàn)，獲得了比較理想的藥物治療效果，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

圖1 患“潰瘍病”異育銀鯽的外觀癥狀

1 材料與方法

物敏感性側(cè)定的抗生素有如下6種。硫酸新霉素（Neomycin Sulfate，華北制藥股份有限公司，批號(hào)：150513）、鹽酸多西環(huán)素（Doxycycline Hyclate，浙江國(guó)邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)：150323）、甲砜霉素（Thiamphenicol，浙江國(guó)邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)：150415）、氟苯尼考（Florfenicol，華北制藥股份有限公司，批號(hào)：150416）、乳酸諾氟沙星（Norfloxacin Lactat，浙江國(guó)邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)：150305），煙酸諾氟沙星（Norfloxacin，浙江國(guó)邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)：150218）等6種抗生素類藥物，分別對(duì)分離菌株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。

1.3 最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

依日本化學(xué)療法學(xué)會(huì)的方法進(jìn)行[2]。即將各種供試藥物分別用適宜溶酶溶解后，經(jīng)過慮菌膜過濾，然后用滅菌后的MHA（Difco）培養(yǎng)基，將藥物進(jìn)行倍比稀釋，最終每個(gè)試管中培養(yǎng)基中藥物濃度達(dá)到100.0～0.025μg/mL的2倍稀釋的13個(gè)濃度。于每管盛有2.9mL培養(yǎng)基的試管中分別加入100.0μL供試菌液，28℃的條件下培養(yǎng)5d后，肉眼觀察證實(shí)無菌生長(zhǎng)試管中的最低藥物濃度，即判為該藥物對(duì)分離菌株的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentrations，MIC）。

1.4 野外藥物治療試驗(yàn)

將經(jīng)過在試管內(nèi)抑、殺菌試驗(yàn)證明有較好的抑、殺菌效果的鹽酸多西環(huán)素和氟苯尼考，依據(jù)MIC值的8.1倍計(jì)算出的用藥量，作為每公斤魚體的用藥量。

2015年5月20 日開始，藥物治療試驗(yàn)在江蘇省射陽縣黃沙港鎮(zhèn)某養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行，選擇發(fā)生了異育銀鯽潰瘍病的單個(gè)池塘面積為186.0～200.0畝的6口池塘（編號(hào)為Ⅰ-Ⅶ號(hào)）。根據(jù)藥物敏感試驗(yàn)的結(jié)果，決定選擇鹽酸多西環(huán)素和氟苯尼考進(jìn)行藥物治療試驗(yàn)。在Ⅰ-Ⅲ號(hào)池塘中按照13.0mg/ kg魚體重的用藥量，采用鹽酸多西環(huán)素作為治療藥物；在Ⅳ-Ⅵ號(hào)池塘中按照13.0mg/kg魚體重的用藥量，采用氟苯尼考作為治療藥物；而在Ⅶ號(hào)池塘中不適用任何藥物，作為對(duì)照池塘。

將藥物首先分別定量添加在經(jīng)過加熱熟化的面粉糊中，攪拌均勻后再拌合在異育銀鯽用顆粒飼料上制作成藥餌，陰涼處經(jīng)過1.0小時(shí)左右的晾干。投喂已顯示出潰瘍病癥狀的異育銀鯽飼養(yǎng)池，每天投喂1次藥餌，連續(xù)投喂5次為一個(gè)療程。自投喂藥餌開始后連續(xù)觀察魚群活動(dòng)狀況，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)池塘在試驗(yàn)期間魚體的死亡魚數(shù)量。并對(duì)死亡魚體進(jìn)行檢查，判斷是否因潰瘍病引起的死亡。

2 結(jié)果

2.1 各種抗生素對(duì)分離菌株的MIC

6種供試抗生素對(duì)4個(gè)分離菌株的MIC測(cè)定結(jié)果如表1所示。由表1可以看出，供試藥物對(duì)4個(gè)分離菌株顯示出了不同的抑菌效力。所有菌株顯示出對(duì)鹽酸多西環(huán)素和氟苯尼考比較敏感。

2.2 池塘中藥物治療異育銀鯽潰瘍病的效果

藥物治療效果如表2所示。從表2所示結(jié)果可以看出，在開始投喂藥物餌料后，采用2種藥物進(jìn)行治療的池塘中的異育銀鯽死亡數(shù)量呈現(xiàn)逐漸下降，而作為對(duì)照的Ⅶ號(hào)池塘中異育銀鯽的死亡率則持續(xù)到試驗(yàn)結(jié)束也未見明顯下降。用藥池塘魚體的死亡數(shù)量從用藥后的第3d開始大幅度下降。至投喂藥物餌料第9d時(shí)，投喂2種藥物的6個(gè)池塘中魚體的死亡數(shù)量均下降到30尾或者以下，在連續(xù)投喂9d藥物餌料后，第10d的死亡數(shù)量已經(jīng)每個(gè)池塘下降到10尾魚以下，而未用藥的對(duì)照池塘中魚體的死亡數(shù)量至第10d仍然維持在比較高的水平。

3 討論

利用抗生素類藥物治療養(yǎng)殖魚類的傳染性疾病，是國(guó)內(nèi)外魚病防治工作者常用的方法。不過，抗生素類藥物隨著使用的次數(shù)增加，致病菌對(duì)抗生素類藥物可以產(chǎn)生不同程度的抗藥性。已經(jīng)有不少的研究結(jié)果證明，養(yǎng)殖魚類病原菌已經(jīng)對(duì)不少抗生素產(chǎn)生了不同程度的耐藥性，同時(shí)，養(yǎng)殖魚類體內(nèi)的抗生素類藥物殘留問題，也已經(jīng)成為關(guān)系到消費(fèi)者健康與安全的公共衛(wèi)生問題被國(guó)內(nèi)外消費(fèi)者廣為關(guān)注。

為了使抗生素類藥物在治療養(yǎng)殖魚類傳染性疾病的過程中獲得理想的療效，就應(yīng)該獲得對(duì)養(yǎng)殖魚類致病菌的藥物敏感性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，只有根據(jù)致病菌的藥物敏感性數(shù)據(jù)才能正確地決定使用某種抗生素類藥物。即只有在獲得對(duì)致病菌對(duì)擬選用抗生素類藥物敏感程度的基礎(chǔ)上，才有可能在疾病的治療過程中選擇適當(dāng)?shù)乃幬锖蜎Q定其適宜的用藥量。不然，就只能因?yàn)槊つ康剡x用藥物，可能造成藥物對(duì)養(yǎng)殖魚類機(jī)體和養(yǎng)殖水環(huán)境的污染，而更容易造成治療效果不佳的后果。

表1 6種抗生素對(duì)4個(gè)分離菌株的最小抑菌濃度

在本試驗(yàn)中，通過從具有典型癥狀的異育銀鯽體內(nèi)分離病原菌，完成對(duì)致病菌的藥物敏感性測(cè)定后，根據(jù)其菌株對(duì)藥物的敏感性，篩選到了兩種抗生素類藥物，在野外養(yǎng)殖池塘中對(duì)患病異育銀鯽進(jìn)行了藥物治療試驗(yàn)。顯示出的明顯療效證明了通過藥物篩選，根據(jù)致病菌對(duì)藥物的敏感性用藥，異育銀鯽的細(xì)菌性潰瘍病是可以有效地治療的。

表2 2種抗生素藥物對(duì)患潰瘍病異育銀鯽的藥物治療結(jié)果

關(guān)于如何利用抗生素對(duì)致病菌的MIC測(cè)定結(jié)果，知道實(shí)際治療疾病過程中確定用藥量的問題，本試驗(yàn)中是采照日本國(guó)的簡(jiǎn)易計(jì)算方法進(jìn)行的，即針對(duì)鯉科魚類選擇用藥劑量時(shí)，可以在使用8.1倍MIC的劑量。本試驗(yàn)參照這個(gè)方法，因?yàn)辂}酸多西環(huán)素和氟苯尼考對(duì)4個(gè)分離菌株的MIC均為1.56μg/mL，所以最終采用了13.0mg/kg魚體重的用藥量，試驗(yàn)結(jié)果證明了以這樣的方法確定用藥量是有效的。

最后，還需要說明的一點(diǎn)是，因?yàn)椴≡鷮?duì)各種抗菌藥物的敏感程度是會(huì)隨著藥物的使用頻度，以及時(shí)間的變化而不斷發(fā)生變化的。我們需要對(duì)致病菌對(duì)各種藥物的敏感性進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，只有掌握了致病菌對(duì)藥物感受性的變化，才是正確選擇藥物和決定用藥量的基礎(chǔ)。