論文：黃顙魚爛身病病原菌的分離及藥敏實驗

黃顙魚爛身病病原菌的分離及藥敏實驗

孫昌飛 祭仲石 韋 艷 厲成新 王中清

黃顙魚(Pseudobagrus fulvidraco)，屬硬骨魚綱（Osteichthyes）、鲇形目（Siluriformes）、鲿科（Bagridae）、黃顙魚屬（Pelteobagrus），廣泛分布于我國分布長江、黃河、珠江和黑龍江等流域。黃顙魚肉質(zhì)細嫩，無肌間刺，味道鮮美，是消費者較青睞的淡水魚之一。隨著市場需求的不斷擴大，黃顙魚在江浙地區(qū)的養(yǎng)殖區(qū)域不多擴大，黃顙魚病害也逐漸再增加，大大制約了黃顙魚養(yǎng)殖的健康發(fā)展。由擬態(tài)弧菌引起的黃顙魚爛身病，病魚溜邊，表皮有規(guī)則性潰爛，嚴重時全身皮膚潰瘍，肌肉也發(fā)生嚴重潰爛，病魚攝食量減少，是一種高致死性病害，該病不易發(fā)覺，發(fā)病時間長，難以治療，是黃顙魚養(yǎng)殖中常見的病害之一，給江浙地區(qū)黃顙魚養(yǎng)殖造成重大損失。

2019年6月初，江蘇大豐某黃顙魚養(yǎng)殖塘暴發(fā)爛身病，通過取樣分離病原菌，并對分離的病原菌進行藥敏試驗，根據(jù)藥敏結果指導養(yǎng)殖戶進行合理用藥，取得良好的治療效果。通過本文，以期為當?shù)攸S顙魚養(yǎng)殖過程中爛身病的防治提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

發(fā)病黃顙魚于2018年8月取自大豐某黃顙魚養(yǎng)殖場，發(fā)病魚80g左右。實驗用藥敏紙片采購自杭州微生物試劑有限公司；微生物培養(yǎng)基為腦心浸液培養(yǎng)基（BHI），pH7.4±0.2，采購自OXOID。

1.2 致病菌的分離

在超凈工作臺中，從患病魚肝、腎等組織處取樣，用滅菌后的接種環(huán)分別在培養(yǎng)基平皿的邊緣的四個點涂菌，以每個點開始劃線至培養(yǎng)基平皿中的1/2。然后，再以到第二點劃線至培養(yǎng)基平皿中的1/2，依次劃線，直至將致病菌均勻密布于培養(yǎng)基平皿中。30℃培養(yǎng)24小時。挑選優(yōu)勢菌落接種于斜面培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)24 小時，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。從斜面培養(yǎng)基上挑取菌落，接種到BHI液體培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)24小時。

1.3 藥敏試驗

采用紙片瓊脂擴散法（K-B法），在超凈工作臺中，將分離到的致病菌用生理鹽水制備成濃度約107～108cfu/mL細菌懸濁液，然后取100uL涂布于BHI平板，等待15分鐘，將不同的藥敏紙片均勻的貼在BHI平板上，30℃培養(yǎng)24 小時后，觀察結果，量取抑菌圈直徑，確定致病菌對各藥物的敏感性。

2 結果

2.1 黃顙魚爛身病發(fā)病情況

發(fā)病塘口位于江蘇大豐某黃顙魚養(yǎng)殖場，塘口面積15畝，南北朝向，四周土坡，水深1.5～2m，有完善的進排水配套設施。2019年6月8日開始，發(fā)現(xiàn)每天有幾尾死魚，死魚體表有明顯方形潰爛病灶，解剖后發(fā)現(xiàn)腹腔內(nèi)有點狀出血點，內(nèi)臟出血，肝臟腫大，腹腔中有少量腹水。幾天后，死亡量暴發(fā)性增加，突增至每天幾百尾。

2.2 致病菌的藥敏分析

分離出致病菌后，使用水產(chǎn)上常用的恩諾沙星、氟苯尼考、強力霉素、硫酸新霉素、氨芐青霉素、紅霉素、復方新諾明和復方磺胺嘧啶等8種抗生素對分離的致病菌進行藥敏實驗，藥敏實驗結果見表1，結果表明，黃顙魚體內(nèi)分離的擬態(tài)弧菌對恩諾沙星、氟苯尼考最為敏感，對復方新諾明和氨芐青霉素等耐藥。

表1 各抗生素藥敏結果

3 討論

近年來，隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖的規(guī)模越來越大，養(yǎng)殖密度越來越高，細菌性疾病暴發(fā)越來越頻繁，每年給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟損失。同時我國的水產(chǎn)養(yǎng)殖戶及相關技術人員缺乏科學的用藥理念，還是按照傳統(tǒng)經(jīng)驗進行治療魚類的細菌性疾病，有時病急亂投醫(yī)，還有不少養(yǎng)殖戶在使用抗生素進行細菌性疾病的預防，導致各類致病菌產(chǎn)生耐藥性。黃顙魚爛身是危害黃顙魚養(yǎng)殖的主要病害之一，該病由擬態(tài)弧菌引起，由于黃顙魚是底層魚類，感染初期黃顙魚躲藏于水底，養(yǎng)殖戶較難發(fā)現(xiàn)，當死魚浮出水面時，池塘中黃顙魚的病情已經(jīng)相對較重，病魚攝食量減少，病魚難以攝入藥物進行治療。

目前，治療細菌性疾病，主要還是通過投喂抗生素，但如何選擇正確的抗生素成為治療成敗的關鍵因素，而隨著多年的抗生素使用，擬態(tài)弧菌已經(jīng)對多種抗生素產(chǎn)生耐藥性。藥敏結果顯示，該地區(qū)分離的擬態(tài)弧菌對氨芐青霉素和復方新諾明有很強的耐藥性，對紅霉素、強力霉素和硫酸新霉素等也有一定的耐藥性。本文結果表明，擬態(tài)弧菌已對多種抗生素產(chǎn)生不同程度的耐藥性，這是多年來水產(chǎn)養(yǎng)殖中抗生素亂用濫用造成的。

水產(chǎn)養(yǎng)殖戶在治療細菌性疾病時，應當科學地選擇抗生素，通過藥敏實驗，選擇致病菌最為敏感藥物進行治療，避免盲目用藥導致疾病無法有效控制。藥敏實驗后，我們建議發(fā)病塘口選擇恩諾沙星作為治療藥物，同時配合復合碘進行池塘消毒，隔天使用一次。拌服恩諾沙星后，病情得到有效控制，從每天死亡幾百尾逐漸降低到幾尾，8天后該塘口黃顙魚停止死亡，繼續(xù)拌服恩諾沙星2天進行鞏固治療。在發(fā)生細菌性疾病時，不能盲目地使用抗生素，要尊重科學，用科學的理念指導養(yǎng)殖用藥，真正做到科學用藥，減緩致病菌耐藥性的產(chǎn)生。