對一例草魚細(xì)菌性“三爛病”診斷及藥物治療技術(shù)的介紹

對一例草魚細(xì)菌性“三爛病”診斷及藥物治療技術(shù)的介紹

陳昌福 周鑫軍 油九菊 夏楓峰

（1 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 430070；2 武漢科研時代生物技術(shù)有限公司，武漢 430418；3 浙江省舟山市海洋與漁業(yè)局，浙江 舟山 316000）

草 魚（Ctenopharyngodon idella）因?yàn)槠淙馕鄂r美而深受我國水產(chǎn)品消費(fèi)者的歡迎。多年來，在我國的主要的淡水水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)域，草魚的養(yǎng)殖產(chǎn)量幾乎都是最高的。近年來，也許是由于單位面積內(nèi)草魚養(yǎng)殖密度大幅度增加等原因，人工養(yǎng)殖草魚細(xì)菌性“三爛病”（圖1）日趨嚴(yán)重，有效治療還比較困難，已經(jīng)給不少的草魚養(yǎng)殖業(yè)者造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

圖1 處于不同病理發(fā)展時期的草魚細(xì)菌性“三爛病”癥狀

2021年7月14日，湖北省武漢市新洲區(qū)汪集鎮(zhèn)草魚養(yǎng)殖業(yè)者陶華剛先生送來幾尾患病草魚，尋求診治草魚疾病的方法與措施。

為了滿足草魚養(yǎng)殖業(yè)者陶華剛先生的要求，我們對送來的患病草魚在完成疾病診斷的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了從患病魚體內(nèi)的致病菌分離，并且在針分離菌株完成了治病藥物篩選后，最終完成了藥物治療效果試驗(yàn)。取得了良好的藥物治療效果，現(xiàn)將診治過程介紹如下，僅供廣大的草魚養(yǎng)殖業(yè)者參考。

1 材料與方法

1.1 患細(xì)菌性“三爛病”草魚癥狀描述

經(jīng)過對送診者陶華剛先生問診關(guān)于養(yǎng)殖草魚的患病情況，以及對患病草魚的肉眼、顯微鏡檢查，得知這些患病草魚發(fā)病過程及呈現(xiàn)有如下主要疾病癥狀。

根據(jù)陶華剛先生對其飼養(yǎng)草魚患病過程的敘述，在7月初，養(yǎng)殖面積為8.3畝的池塘中出現(xiàn)有個別草魚身體發(fā)黑、遛邊、攝食量出現(xiàn)下降的現(xiàn)象，隨著時間的推移，少數(shù)患病草魚體表還出現(xiàn)了點(diǎn)狀或塊狀紅斑并開始出現(xiàn)每天數(shù)尾乃至數(shù)十尾的死亡。從7月6日開始，養(yǎng)殖業(yè)者開始采用碘制劑、苯扎溴銨等消毒劑全池潑灑消毒，并且先后使用多種抗生素類漁藥制劑拌飼料投喂。結(jié)果是經(jīng)過幾天時間的連續(xù)用藥，沒有出現(xiàn)可見的藥物治療效果，死魚數(shù)量呈現(xiàn)與日俱增的趨勢，至7月11日，死亡數(shù)量高達(dá)每天1250多尾。

對送來實(shí)驗(yàn)室的幾尾患病草魚進(jìn)行肉眼觀察，發(fā)現(xiàn)患病魚體表有潰瘍癥狀（圖1）。取少量鰓絲制作成水浸片，在顯微鏡下檢查時，僅觀察到為數(shù)不多的車輪蟲。對患病草魚體內(nèi)外其他器官與組織進(jìn)行寄生蟲檢查時，也未觀察到其他的寄生蟲。因此，認(rèn)為這些草魚的疾病不是由某種寄生蟲引起的。

解剖患病草魚觀察其內(nèi)部臟器時，可見患病魚體全部腸道呈現(xiàn)明顯出血癥狀（圖2），腸道內(nèi)充氣而沒有食物。其他臟器未觀察到異常癥狀。

圖2 對患細(xì)菌性“三爛病”草魚解剖后的肉眼觀察

1.2 致病菌株的分離

在無菌條件下，用接種環(huán)從患病草魚腎臟中采樣，在腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基（BHIA，Difco）平板上作劃線分離，在28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時后，從培養(yǎng)皿中挑取單個菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。用純化培養(yǎng)獲得的5個分離菌株（菌株編號分別為：CYS01、CYS02、CYS03、CYS04和 CYS05）做藥物敏感性檢測。同時，分別將不同分離菌株轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，低溫保存。

1.3 供試藥物

本次選擇的8種抗菌藥物原料藥分別是，氨芐西林鈉（Ampicillin，湖北威德利化學(xué)科技有限公司，含量99.8%，批號：20210418），恩諾沙星（Enrofloxacin，華北制藥有限公司，含量：98.5%，批號：20210312），鹽酸土霉素（Oxytetracycline，華北制藥有限公司，含量：96.5%，批號：20210205），硫酸新霉素（Neomycin sulphate，華北制藥有限公司，批號：20210324），強(qiáng)力霉素（Hydramycin，華北制藥有限公司，批號：20210105），甲砜霉素（Thiamphenicol，華北制藥有限公司，批號：20210211），氟苯尼考（Florfenicol，華北制藥有限公司 ，批 號 ：20210209），金 霉素（Chlortetracycline，華北制藥有限公司，批號：20210307）等8種抗菌素藥物用于對分離菌的藥物敏感性試驗(yàn)。

1.4 最小抑菌濃度（MIC）的測定

依日本化學(xué)療法學(xué)會制定的標(biāo)準(zhǔn)法進(jìn)行。首先將供試藥物用適宜的容媒預(yù)溶后，在無菌條件下，取定量的藥液，在盛有滅菌腦心浸液（BHI，Difco）培養(yǎng)基試管中，做2倍系列的稀釋。制作成藥物濃度分別為 100.0μg/L、50.0μg/L、25.0μg/L、12.5μg/L、6.25μg/L、3.13μg/L、1.56μg/L、0.78μg/L、0.39μg/L、0.20μg/L 和0.10μg/L的藥物系列培養(yǎng)基試管。最后，定量吸取0.1mL的活菌液加入上述每支試管中，搖勻。置于28℃條件下培養(yǎng)78小時，經(jīng)肉眼觀察證實(shí)無細(xì)菌生長試管中的最低藥物濃度，即為藥物的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）。

1.5 對治療用藥物的選擇建議

根據(jù)對分離菌株進(jìn)行的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果，選擇金霉素作為拌餌口服藥物，以抑制或者殺滅病魚體內(nèi)的致病菌。在投喂口服抗菌素類藥物的同時，采用二氧化氯（ClO2，從武漢市新洲區(qū)黃集鎮(zhèn)漁藥市場上購買某公司生產(chǎn)的產(chǎn)品，生產(chǎn)批號為20210402，含量為6.8%）作為外用藥物，采取全池潑灑法用藥，以控制養(yǎng)殖池水中的致病菌。

根據(jù)養(yǎng)殖池塘內(nèi)養(yǎng)殖草魚及其它吃飼料魚類的數(shù)量，計算出養(yǎng)殖池塘內(nèi)藥物用量后，首先將金霉素采用食用醋預(yù)溶后，在混合于面粉糊中，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝螅贊姙⒃陬w粒飼料上混合均勻，在陰涼處晾干后投喂。按照藥物敏感性檢測結(jié)果，確定金霉素的投喂量為18.0mg/kg魚體重。每天投喂藥物餌料1次，連喂5天為一個療程。

在投喂藥物餌料的當(dāng)天，在試驗(yàn)池塘中潑灑ClO2，臨用前剪開ClO2的包裝袋，并準(zhǔn)確稱取所需量，用適量水將ClO2溶解后，在試驗(yàn)池塘內(nèi)全池潑灑，使飼養(yǎng)池水中的ClO2濃度達(dá)到0.40mg/L，間隔1天后再潑灑1次，連續(xù)潑灑2次。

1.6 療效判定

當(dāng)用藥開始后，每天統(tǒng)計各個飼養(yǎng)池中的死亡草魚的數(shù)量，直到最后1次用藥結(jié)束后的第7天為止。參照用藥后的有效率，對藥物防治細(xì)菌病的效果進(jìn)行評價。

2 結(jié)果

2.1 抗生素對分離菌株的最小抑菌濃度（MIC）

8種抗菌藥物在試管內(nèi)對從患病草魚體內(nèi)分離的5個菌株的MIC測定結(jié)果如表1所示。

由表1所示結(jié)果可以看出，在8種供試藥物中，以金霉素和鹽酸土霉素對幾個分離菌株的抑菌活性最強(qiáng)，其他幾種抗菌藥物對分離菌株的抑菌效果均相對較差。

表1 各種抗抗菌素類藥物對分離菌株的最小抑菌濃度

2.2 藥物治療效果

選擇對分離菌株具有較好抑菌和殺菌效果的金霉素作為本試驗(yàn)的治療藥物。在患病草魚養(yǎng)殖池塘用藥。根據(jù)全池吃飼料魚體的重量，計算用藥量（按照18.0mg/kg魚體重，如何根據(jù)獲得的藥敏試驗(yàn)結(jié)果，計算用藥量的方法，請參照我們以往發(fā)布的多篇文章）后，將每天全部用藥量拌和在草魚飼料中投喂，每天投喂1次藥物餌料，連續(xù)用藥5天。

用金霉素作為治療藥物，對患病草魚的藥物治療效果如表2所示。由表2所示試驗(yàn)結(jié)果可以看出，用藥后的治療效果是很明顯的。

表2 投喂金霉素制備藥物餌料后患病草魚死亡數(shù)量的變化

3 討論

關(guān)于引起草魚細(xì)菌性“三爛病”的致病菌，已經(jīng)在過去的研究中獲得了明確的結(jié)論。我們雖然從患病草魚體內(nèi)分離到了5個菌株，但是，我們尚未對分離菌株完成種類鑒定。不過，根據(jù)對分離菌株完成的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果，選擇對分離菌株具有良好抑制和殺菌效果的抗菌類藥物，拌和在草魚的餌料中連續(xù)投喂5天，能有效地控制住草魚細(xì)菌性“三爛病”的蔓延。所以，藥物治療疾病的結(jié)果間接地證明了引起草魚“三爛病”的病原可能是些致病細(xì)菌。

由細(xì)菌性病原引起的水產(chǎn)動物疾病，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者除了可以采用細(xì)菌性疫苗提前預(yù)防外，一旦疾病發(fā)生后，大都只能依靠采用各種抗菌藥物進(jìn)行治療。但是，如果使用者對抗菌類藥物的選擇或者使用不當(dāng)，如用藥劑量不足或者沒有按照藥物適應(yīng)癥用藥，以及隨意混用各種抗菌素類藥物的話，不僅難以獲得理想的藥物治療效果，還可能會導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生耐藥性。本研究采取從患病魚體中分離致病菌株，在完成藥物敏感性試驗(yàn)后，選擇對分離菌株具有良好抑制和殺滅效果的藥物用于治療疾病，有效地避免了上述現(xiàn)象的發(fā)生。

這次成功地治療草魚細(xì)菌性“三爛病”的實(shí)例，再一次告訴我們，草魚的細(xì)菌性疾病是可以有效地治療的。但是，前提就是要利用實(shí)驗(yàn)結(jié)果，找到適宜的抗生素類藥物并且根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，真正做到精準(zhǔn)用藥。