小龍蝦真菌病害：灼斑病

小龍蝦灼斑病(burn spot disease)，又被稱為真菌甲殼潰瘍病(fungal shell canker disease)，在世界各地是最常見、分布最廣和危害較重的甲殼動(dòng)物病害之一[1]。灼斑病的發(fā)生通常與小龍蝦養(yǎng)殖密度較大和養(yǎng)殖水質(zhì)條件差有密切關(guān)系。甲殼表面的微生物是一個(gè)復(fù)合體[2]，多種有益和有害生物群體存在，如是病原微生物群體數(shù)量多，占有絕對優(yōu)勢，就會(huì)引起病害；小龍蝦代謝失調(diào)或蝦體受傷也是引發(fā)病害的重要因素。當(dāng)小龍蝦營養(yǎng)缺乏，體質(zhì)下降時(shí)的發(fā)病率較高；但在小龍蝦退殼時(shí)罕見灼斑病癥狀。

1 分布

廣泛分布于整個(gè)歐洲、澳洲，及亞洲部分國家，但是，一些病原菌被限制在一定的區(qū)域內(nèi)，這是病原菌生態(tài)學(xué)特性所決定的。我國雖有少量發(fā)生，但未見報(bào)道。

2 癥狀與危害

灼斑病可發(fā)生在小龍蝦和其他相關(guān)蝦類甲殼表面的任何一個(gè)位置(胸、背、腹、尾)，病斑圓形或近圓形，褐色至黑色，中心顏色較四周更深，似用火燙傷形狀，故被稱為灼斑病(圖1)，常伴隨著甲殼潰爛，也被稱為真菌甲殼潰瘍病；外殼上的癥狀是有一個(gè)下陷、中心壞死的病褐色斑，出現(xiàn)在外骨骼的鈣化部分；這種癥狀特點(diǎn)在淡水和海水的甲殼類動(dòng)物上均有報(bào)道[3-4]。在種群密度大，或養(yǎng)殖設(shè)施差的養(yǎng)殖池中，病原菌對小龍蝦的感染率可達(dá)50%[4]；在愛沙尼亞，灼斑病的感染率高達(dá)70～80%[5]。螯蝦柱隔孢菌(Ramulariaastaci)侵染率可達(dá)85%，并伴有嚴(yán)重死亡，黑化病斑直徑可達(dá)10 mm，具紅色邊緣、中間呈缺刻狀。螯蝦鈣皮菌(Didymariacambari)通常引起直徑約5 mm的病斑，也侵染尾足(uropods)。當(dāng)外骨骼被侵蝕時(shí)，可致死小龍蝦[5]。在小龍蝦退殼時(shí)病斑消失，在新甲殼上會(huì)有缺損。小龍蝦的死亡與灼斑病有關(guān)，特別是在退殼的時(shí)候更是如此，這種情況已在淡水小龍蝦病害中進(jìn)行了報(bào)道[2]。

圖1 小龍蝦灼斑病癥狀(引自Makkonen 等，2013)

3 病原菌

真菌和細(xì)菌都能引起小龍蝦灼斑病，但以真菌病原為主。

3.1 真菌

小龍蝦灼斑病的病原真菌有5種，全部屬于半知菌亞門的不同種類，分別是燕麥鐮刀菌(Fusariumavenaceum)、茄鐮刀菌(F.solani)[5-6]、螯蝦柱隔孢菌(Ramulariaastaci)、螯蝦鈣皮菌(Didymariacambari)和細(xì)長頭孢菌(Cephalosporiumleptodectyli)[5]；但在早期的研究中將螯蝦柱隔孢菌鑒定為煙鐮刀菌(F.tabacinum)，后來作為異名[7]。

3.1.1 鐮刀菌 引起灼斑病的鐮刀菌種類比較復(fù)雜，即便是相同的癥狀，在不同的地區(qū)，其病原種類也存在差異，如在愛沙尼亞的歐洲高貴小龍蝦灼斑病和薩雷馬螯蝦(Saaremaa crayfish)灼斑病組織上各分離到了1株鐮刀菌(Fusariumspp.)，通過ITS序列分析比對，根據(jù)Genbank數(shù)據(jù)庫搜索，高貴小龍蝦上菌株被鑒定為燕麥鐮孢(F.avenaceum)，而薩雷馬螯蝦(Saaremaa crayfish)上的菌株被鑒定為茄鐮孢(F.solani)[5]。

在歐洲，茄鐮刀菌侵染土耳其小龍蝦(A.leptodactylus)和信號(hào)小龍蝦(Pacifastacusleniusculus)[8-10]；土耳其小龍蝦是最易被茄鐮刀菌感染的種類。但是，Maestracci & Vey (1987)[11]研究歐洲小龍蝦[土耳其小龍蝦和白爪小龍蝦(Austropotamobiuspallipes)]病害由尖孢鐮刀菌(F.oxysporum)引起的。而煙鐮刀菌(F.tabacinum)會(huì)引起白爪小龍蝦的死亡[7]。藨草鐮刀菌變種(Fusariumroseumvar.Culmorum)已在小龍蝦鰓上被發(fā)現(xiàn)[12]。在北美小龍蝦(Procambarussimulanssimulans)上也報(bào)道了鐮刀菌病害，但缺乏組織病理學(xué)研究資料[13]。鐮刀菌是一類機(jī)會(huì)主義病原菌，小龍蝦受傷后或在污染水中的侵染率高，水環(huán)境條件是決定小龍蝦健康生長的主要因素[11]。

3.1.2 螯蝦鈣皮菌 鈣皮菌屬(DidymariaCorda 1842)共有60個(gè)種2個(gè)類型。分布于整個(gè)歐洲、澳洲，及亞洲部分國家，我國雖有少量發(fā)生，但未見文獻(xiàn)報(bào)道。

螯蝦鈣皮菌危害小龍蝦、歐洲高貴小龍蝦(Astacusastacus)[5，14]、叉肢螯蝦(Orconecteslimnosus)和白爪小龍蝦(Austropotamobiuspallipes)。

3.1.3 螯蝦柱隔孢菌 有性世代為草莓蛇眼小球殼菌[Mycosphaerellafragariae(Tul) Lindau]，屬于球腔菌科(Mycosphaerellaceae)、球殼菌屬(MycosphaerellaJohanson 1884)的一個(gè)種。

目前，柱隔孢屬(RamulariaUnger 1833)共有1 178個(gè)種、變種和類型。由螯蝦柱隔孢菌(D.cambari)引起的病害也叫紅點(diǎn)病，病菌侵入小龍蝦的體表，受感染處有似火燒的斑點(diǎn)，中間呈棕黑色，具鮮紅色的邊緣，可造成高貴小龍蝦(A.astacus)和叉肢螯蝦(Orconecteslimosus)的大量死亡。

3.2 細(xì)菌

氣單胞菌屬(Aeromonas)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、黏細(xì)菌(Myxobacteria)和枸櫞酸桿菌屬(Citrobacter)的細(xì)菌都能引起小龍蝦病害[15-16]。

Amborskietal.(1975)[17]電鏡觀察認(rèn)為，幾丁質(zhì)溶質(zhì)革蘭氏陰性細(xì)菌的作用至今尚未得到充分證明。這些細(xì)菌的侵染，必須先通過外皮層、表皮或傷口進(jìn)入小龍蝦體內(nèi)，并能夠進(jìn)行繁殖，與小龍蝦建立真正的侵染關(guān)系，使其引發(fā)病害。假單胞桿菌不僅是幾丁質(zhì)溶質(zhì)細(xì)菌，也是小龍蝦灼斑病病斑上分離到的一個(gè)種具有強(qiáng)致病性的細(xì)菌，但許多其他的細(xì)菌種類，如弗羅因德氏枸櫞酸桿菌(Citrobacterfreundii)、嗜水氣單孢菌(Aeromonasliquefaciens)、產(chǎn)堿假單胞菌(Pseudomonasalkaligenes)、腸桿菌(Enterobactersp.)、無色桿菌(Achromobactersp.)和芽孢桿菌(Bacillussp.)也存在于小龍蝦體內(nèi)外，它們都是次生入侵者[17]，這些細(xì)菌也在佛羅里達(dá)藍(lán)鰲蝦(Cheraxtenuimanus)灼斑病中被分離到。

4 傳播與流行

灼斑病的傳播途徑有病蝦帶菌傳播和水體傳播2種形式。

4.1 病蝦帶菌傳播

主要是種苗調(diào)運(yùn)、交換期間的傳播，集貿(mào)市場交易也是重要的傳播途徑。

4.2 水體傳播

水體是一類多因素的復(fù)合體，不論是自然水體，還是池塘養(yǎng)殖水體都是如此。引起灼斑病的真菌都是半知菌類，均以分生孢子和菌絲進(jìn)行繁殖，產(chǎn)生大量的個(gè)體分散于水中，因個(gè)體微小，肉眼看不見；并且在同一個(gè)水體中，由于小龍蝦或魚類的活動(dòng)，使得分生孢子的分布相對較均勻，只要小龍蝦進(jìn)入這種水體，病菌孢子就會(huì)附著在蝦體上，并產(chǎn)生菌絲，尋找蝦體表面的受傷處(含輕微傷口)侵入蝦體，菌絲在侵染處生長、繁殖，產(chǎn)生毒素，致死細(xì)胞組織，形成壞死斑。

甲殼動(dòng)物的灼斑病能相互傳染，在一些分生孢子密度相對較小的水體中，短期內(nèi)不影響小龍蝦的生存，但被感染的個(gè)體會(huì)得病。此外，健康小龍蝦在與感病小龍蝦接觸時(shí)，相互感染的幾率較低[18]。許多研究證明，外殼損傷、群體密度大和不良環(huán)境條件是小龍蝦發(fā)病的因素[2]。

5 病理學(xué)

在小龍蝦中，泌尿系統(tǒng)的腹緣通常是病原菌的第一個(gè)攻擊點(diǎn)，但在頭胸部、腹部和鰓上也常出現(xiàn)斑[2，17]。發(fā)病初期，在外殼上為小的、褐色病斑[18]。在發(fā)病中期，病斑被限制在甲殼組織內(nèi)，也可在軟組織下面，有時(shí)在尾部也會(huì)出現(xiàn)壞死斑[17]。光學(xué)顯微鏡觀察和組織病理學(xué)測定顯示，在小龍蝦表面能看到真菌和細(xì)菌，PDA培養(yǎng)基可用于分離和分生孢子的產(chǎn)生[2]。

小龍蝦灼斑病防治，目前尚無有效方法，只能通過飼喂中草藥飼料，提高小龍蝦的免疫力，降低病害的發(fā)生。