劉家星，陳霞，陳健，歐陽萍，陶麗竹，李良玉，魏文燕，楊馬，唐洪，張小麗

(1.成都市農(nóng)林科學(xué)院，四川 成都 611130；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)魚病研究中心，四川 成都 611130)

一、基本情況

1.養(yǎng)殖情況

本次發(fā)病區(qū)域位于成都市新津區(qū)集中連片養(yǎng)殖池塘，發(fā)病池塘主要養(yǎng)殖品種為鯉、鯽，養(yǎng)殖池塘水域面積大小不一，集中連片區(qū)域池塘總面積1 000余畝。本次選取發(fā)病較為嚴(yán)重的1個(gè)養(yǎng)殖戶池塘，兼顧周邊養(yǎng)殖場(chǎng)。該養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖池塘面積為40畝，水源為自然降水、地下水以及濕地沉降水。通過現(xiàn)場(chǎng)觀察，池塘水體較為清澈，無漂浮物，在餌料臺(tái)附近可見少許漂浮油膜，水面散在性漂浮病死魚；增氧機(jī)處于常開狀態(tài)。

2.水質(zhì)檢測(cè)

水質(zhì)檢測(cè)時(shí)間為14時(shí)左右，使用采水器取水面下15厘米水體。池塘水溫10.3℃、溶氧8.8毫克/升、pH 8.04、氨氮1.2毫克/升、亞硝酸鹽0.05毫克/升，氨氮和亞硝酸鹽含量偏高。

3.發(fā)病情況

該養(yǎng)殖區(qū)域從2021年12月起陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)病情況，最初以鯉魚為主，后期擴(kuò)散至鯽魚養(yǎng)殖池塘。根據(jù)部分養(yǎng)殖戶反饋，最早發(fā)現(xiàn)的病例在成都市蒲江縣流水養(yǎng)殖池塘。據(jù)了解，本區(qū)域內(nèi)養(yǎng)殖鯉、鯽苗種均購自蒲江一帶苗種繁育場(chǎng)，草魚購自廣東一帶苗種繁育場(chǎng)。

該養(yǎng)殖戶主要養(yǎng)殖品種為鯉、鯽，搭配鰱、鳙和草魚。鯉、鯽均為當(dāng)年苗種，購自蒲江一帶苗種繁育場(chǎng)，放養(yǎng)大規(guī)格苗種5 000尾/畝。2022年1月底該養(yǎng)殖戶進(jìn)行了1次拉網(wǎng)捕魚，拉網(wǎng)后池塘未進(jìn)行消毒和采取其他措施。2月初池魚開始發(fā)病，初期每天死亡幾尾，后期發(fā)展至10～15千克，發(fā)病最高期日死亡量達(dá)150千克左右。發(fā)病個(gè)體大小不一，死亡個(gè)體鯉均重在600克左右、鯽在400克左右，發(fā)病趨勢(shì)呈現(xiàn)出典型的“急、快、廣、高”。在進(jìn)出水口附近可觀察到病死魚沉在池底，部分淺水區(qū)域可見病魚在池底呆滯不動(dòng)或漂浮于水體中，對(duì)驚嚇不敏感。

二、解剖學(xué)觀察

選取典型發(fā)病鯉、鯽進(jìn)行觀察，鯉體表多見散在充血、出血(圖1a)，鰓蓋前段出現(xiàn)1個(gè)較大創(chuàng)口，邊緣潰瘍發(fā)白，鰓蓋充血、出血(圖1b)，鰭條及基部充血、出血(圖1c)，腹部可見大范圍充血、出血(圖1d)，肛門紅腫，鱗基部充血、出血、松動(dòng)易落，有豎鱗現(xiàn)象(圖1e)，鰓絲嚴(yán)重充血(圖1f)，血液凝固性變差，易溶血；鯽的口部周圍嚴(yán)重充血、出血，并伴有吻部潰爛(圖1g)，鰓蓋周邊可見散在分布潰瘍?cè)睿w表偶見充血、出血點(diǎn)位，鰓絲嚴(yán)重充血(圖1h)，鱗松動(dòng)易落。

現(xiàn)場(chǎng)剖解，鯉未見腹水，精巢發(fā)育約Ⅲ期，未見出血點(diǎn)(圖1i)，腹膜上有散在出血點(diǎn)，腎臟腫大、易碎，脾臟腫大、發(fā)黑、質(zhì)地較脆，膽囊充盈呈墨綠色，肝臟腫大、易碎、有典型的放射形絲狀樣(花斑)，腸道未見食物、黏液較多、內(nèi)壁有散在出血點(diǎn)；鯽卵巢發(fā)育約為Ⅳ期，卵巢膜明顯充血，鰾上可見散在出血點(diǎn)，腎臟腫大、易碎，脾臟腫大、發(fā)黑，質(zhì)地較脆，膽囊充盈呈墨綠色，肝臟腫大、易碎，腸道未見食物、黏液較多，內(nèi)壁有散在充血、出血點(diǎn)。

圖1 患病鯉、鯽典型病變

三、病原學(xué)檢測(cè)及結(jié)果

1.寄生蟲

制作病魚體表黏液涂片、鰓絲壓片、腸黏液涂片、腸黏膜刮片以及血液涂片，在顯微鏡下分別觀察，均未發(fā)現(xiàn)寄生蟲，排除寄生蟲感染的可能性。

2.細(xì)菌

無菌操作下從病魚肝、脾、腎取樣接種BHI平板，培養(yǎng)后觀察發(fā)現(xiàn)，在接種的平板上長(zhǎng)出圓形、邊緣光滑、中央凸起的黃白色優(yōu)勢(shì)菌落；對(duì)優(yōu)勢(shì)菌落進(jìn)行革蘭氏染色觀察，結(jié)果顯示分離所得的優(yōu)勢(shì)菌均為革蘭氏陰性桿菌，且均為散在排列的短桿狀菌體(圖2)；對(duì)細(xì)菌分離純化，共得到3株菌株，分別編號(hào)為1S、2G和L2S。

圖2 分離菌株革蘭氏染色

對(duì)純化后的菌株進(jìn)行16S rRNA檢測(cè)，測(cè)序結(jié)果在GenBank上進(jìn)行Blast比對(duì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1S序列與溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)序列相似性達(dá)97.31%，2G序列和L2S序列與腐希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)序列相似性達(dá)97.91%和98.52%。對(duì)分離到的3個(gè)菌株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 分離菌株藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果

3.病毒

根據(jù)病魚的病變特征，進(jìn)行鯉、鯽常見病毒病的PCR檢測(cè)。電泳結(jié)果顯示，空白對(duì)照無條帶，陽性對(duì)照均有條帶，被檢測(cè)樣品CEV、KHV、SVCV均無條帶出現(xiàn)，判定為CEV、KHV、SVCV陰性。

四、治療建議

1.盡快捕撈死魚

死亡及瀕死魚要統(tǒng)一收集，待相關(guān)保險(xiǎn)定損人員確定后實(shí)施無害化處理，減少進(jìn)一步交叉?zhèn)鞑サ目赡苄浴?/span>

2.減少日常投喂

根據(jù)發(fā)病情況減少日常投喂量，首先降低因過量采食對(duì)患病魚造成的負(fù)擔(dān)，其次降低未被攝入的飼料對(duì)水體造成影響的風(fēng)險(xiǎn)。

3.餌料中適當(dāng)加入植物多糖制劑

拌料投喂黃芪多糖等，以增強(qiáng)魚體的免疫力。不可使用高刺激性殺蟲和消毒藥物，不得隨意使用抗生素等藥物盲目治療。

4.適時(shí)開增氧機(jī)

根據(jù)水體溶氧情況開增氧機(jī)，不需要全天開啟，以開四周增氧機(jī)為宜。

5.內(nèi)服外消

在條件允許的情況下，每天向池塘加注少量新鮮、干凈的活水。外用含氯消毒劑全池潑灑，根據(jù)藥敏試驗(yàn)，用氟苯尼考拌料投喂5～7天，使用劑量按照使用說明書。

五、討論

暴發(fā)性出血病在鯉科魚中較為常見，表現(xiàn)為體表多部位或體內(nèi)多器官充血、出血。引起鯉、鯽出血病的病因有多種，較為常見的為病毒和細(xì)菌以及二者的混合感染。本例分離得到溫和氣單胞菌和腐敗希瓦氏菌兩種細(xì)菌，提示引起本次鯉、鯽暴發(fā)性出血病的病因?yàn)榧?xì)菌感染，而非病毒感染所致。

腐敗希瓦氏菌在水產(chǎn)品加工與貯藏相關(guān)領(lǐng)域報(bào)道較多，少有報(bào)道其作為病原菌感染魚類。但有相關(guān)研究顯示，腐敗希瓦氏菌是一種人畜共患病原菌，可引起人類軟組織感染、心膜炎等。溫和氣單胞菌是一種淡水養(yǎng)殖中的常見致病菌，該菌可引起魚類出血病和潰瘍病等，其危害程度與嗜水氣單胞菌相當(dāng)。

值得注意的是，本次調(diào)查區(qū)域發(fā)病前，在苗種購買地也出現(xiàn)過類似發(fā)病情況，不排除苗種攜帶病原的可能性。由于誘發(fā)水生動(dòng)物疾病的因素由宿主、環(huán)境和病原共同決定，在調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖池塘水體氨氮和亞硝酸鹽含量偏高，加之發(fā)病期間氣溫變動(dòng)頻繁，這可能造成魚處于應(yīng)激狀態(tài)，抵抗疾病能力下降，最終誘發(fā)疾病。