用穩(wěn)定性粉狀二氧化氯防治魚類水霉病的實(shí)驗(yàn)研究

對魚類受精卵附著菌的清除作用

文/陳超然1陳昌福1孟長明2

在魚類的人工孵化孵化過程中，對其受精卵進(jìn)行消毒處理，清除附著在受精卵表面的細(xì)菌、真菌等各種有害微生物，對于提高魚類受精卵的孵化率是很重要的。此外，對魚類受精卵進(jìn)行消毒處理，也是預(yù)防由于病原體的垂直傳播所致魚類疾病的有效方法之一。過去對魚類受精卵的消毒大多采用甲醛和孔雀石綠等藥物進(jìn)行，現(xiàn)已證明這兩種藥物有致畸變作用。二氧化氯（ClO2）已經(jīng)被公認(rèn)為是新一代消毒劑，不僅具有良好的消毒效果，而且作用后無有害物質(zhì)生成，對高等動物屬于實(shí)際無毒物質(zhì)。本試驗(yàn)采用浸泡的方式檢測了ClO2對幾種魚類受精卵上附著菌的清除作用，旨在為將ClO2用作魚類受精卵消毒劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

一、材料與方法

1.供試魚類受精卵

用于本試驗(yàn)的全部供試魚類受精卵由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)站提供。將產(chǎn)出后4h以內(nèi)已吸水的草魚（Ctenopharyngodon idellus），鰱（Hypophthalmichthys molitrix）和鳙（Aristichthys nobilis）等3種魚類的受精卵取回后，在每個盛有100.0mL去氯自來水的燒杯中放入100粒卵，將燒杯置于（22±1）℃的恒溫水浴中，備用。

2.藥物及其配制

用于本試驗(yàn)的穩(wěn)定性粉狀ClO2由河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司生產(chǎn)。生產(chǎn)批號為010307。ClO2含量為6.6%?？兹甘G由上海試劑二廠生產(chǎn)。生產(chǎn)批號為990615。臨用前開包將兩種藥物各稱取10.0g，分別溶解于100.0mL蒸餾水中，即為供試藥物原液。

3.受精卵的消毒處理

在無菌條件下，將ClO2的原液定量加入放有魚卵的燒杯中，使燒杯中藥物的終濃度分別達(dá)到1.0mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L、5.0mg/L、6.0mg/L、7.0mg/L、8.0mg/L、9.0mg/L和10.0mg/ L；而對于孔雀石綠則是將藥物的終濃度調(diào)整到1.0mg/L的濃度，分別作為兩種藥物的試驗(yàn)組；另設(shè)不添加藥物的對照組。浸泡20分鐘后撈取受精卵并用滅菌濾紙吸干其表面水分，稱重后勻漿，作為檢測細(xì)菌數(shù)量的魚類受精卵勻漿液之用。

4.除菌效果的測定

將魚類受精卵的勻漿液用滅菌生理鹽水作倍比稀釋后，從每個稀釋濃度的勻漿液中吸取0.30mL,分別涂布在3個用腦心浸液瓊脂（BHIA, Difco）培養(yǎng)基制作的平皿中，25℃條件下，培養(yǎng)48h后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)量。

二、結(jié)果

1.對草魚受精卵上附著菌的清除效果

經(jīng)過用孔雀石綠和不同濃度的ClO2溶液浸泡后，對草魚受精卵上附著菌數(shù)量的測定結(jié)果如表1所示。由表1可以看出，與對照組相比，經(jīng)過用孔雀石綠和不同濃度的ClO2溶液

浸泡后，草魚受精卵上附著菌的數(shù)量均有明顯下降，并且隨著ClO2溶液濃度的升高，受精卵上殘存的細(xì)菌數(shù)量越少。

2.ClO2的對鰱受精卵上附著菌的清除效果

經(jīng)過用孔雀石綠和不同濃度的ClO2溶液浸泡后，對鰱受精卵上附著菌數(shù)量的測定結(jié)果如表2所示。由表2可以看出，與對照組相比，經(jīng)過用孔雀石綠和不同濃度的ClO2溶液浸泡后，附著菌的數(shù)量均有明顯下降。

3.ClO2的對鳙受精卵上附著菌的清除效果

經(jīng)過用孔雀石綠和不同濃度的ClO2溶液浸泡后，對鳙受精卵上附著菌數(shù)量的測定結(jié)果

如表3所示。由表3可以看出，與對照組相比，經(jīng)過用孔雀石綠和不同濃度的ClO2溶液浸

泡后，鳙的受精卵上附著菌的數(shù)量均有明顯下降，而且ClO2溶液濃度越高，受精卵上殘存的細(xì)菌數(shù)量就越少。

三、討論

本試驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)證明采用ClO2溶液浸泡魚類受精卵，對受精卵上附著菌具有明顯地清除作用。然而，雖然隨著用于浸泡于魚類受精卵的ClO2溶液濃度的上升，3種魚類的受精卵上附著菌的數(shù)量均不斷地下降，但是，即使經(jīng)過濃度為10.0mg/L的ClO2溶液浸泡魚類受精卵20分鐘，也未能徹底清除3種魚類受精卵上的附著菌。這可能是由于ClO2溶液的濃度偏低或者是由于浸泡的時間太短的緣故。

當(dāng)ClO2溶液的濃度達(dá)到2.0mg/L以上時，對3種魚類受精卵上附著菌的清除作用就優(yōu)于1.0mg/L的孔雀石綠溶液。因此，本研究結(jié)果表明，以穩(wěn)定性粉狀ClO2取代孔雀石綠作為魚類受精卵的消毒劑，可以達(dá)到更好的消毒效果。至于用ClO2消毒對魚類受精卵上細(xì)菌群落的構(gòu)成以及對受精卵的孵化率和魚苗的畸形率有無影響，尚需要進(jìn)一步研究。

表1 .孔雀石綠和不同濃度的ClO2溶液浸泡后草魚受精卵上附著菌數(shù)量的變化

表2 .孔雀石綠和不同濃度的ClO2溶液浸泡后鰱受精卵上附著菌數(shù)量的變化

表3 .孔雀石綠和不同濃度的ClO2溶液浸泡后鳙受精卵上附著菌數(shù)量的變化

作者單位：1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)教育部農(nóng)業(yè)微生物重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室 2.河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司