虹鱒魚細菌性腎病風險分析

虹鱒魚細菌性腎病風險分析

文/王靜波 徐立蒲 王小亮 張文 王姝 曹歡 呂曉楠

2018年6月中旬，甘肅省某鮭鱒魚養(yǎng)殖場進口虹鱒三倍體發(fā)眼卵孵化出的魚苗出現(xiàn)連續(xù)發(fā)病死亡情況，累計死亡率達到50%，發(fā)病期間養(yǎng)殖水溫11℃～12℃。發(fā)病魚體色發(fā)黑，均有腹水，解剖后可見腎、肝腫大。腎臟普遍可見直徑2mm～4mm的顆粒狀肉芽腫（圖1）。病魚腎組織印片經(jīng)革蘭氏染色后在高倍視野下（1000×）可見大量革蘭氏陽性短桿菌，長約1μm（圖2）。

取患病魚的腎組織，樣品編號分別為180705（簡寫：05）、180712（簡寫：12），分別經(jīng)研磨、抽提核酸、PCR及套式PCR擴增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，均未見383 bp片段，而均可見320 bp片段特異性擴增條帶，陰性對照和空白對照無擴增條帶（圖3）。套式PCR產(chǎn)物經(jīng)純化測序及BLAST同源性檢索，結(jié)果顯示其與鮭腎桿菌的同源性最高。序列分析結(jié)果表明其與鮭腎桿菌ATCC 33209（GenBank登陸號：CP000910）同源性達99.67%。

上述結(jié)果提示患病魚腎組織中存在的大量革蘭氏陽性短桿菌是鮭腎桿菌。結(jié)合發(fā)病魚癥狀，判斷該場發(fā)病虹鱒患細菌性腎病。

細菌性腎?。╞acterial kidney disease，BKD）是由鮭腎桿菌（Renibacterium salmoninarum）引起的鮭科魚類病害，是一種典型的慢性傳染病。目前尚無有效的治療藥物，因其危害性大曾被列為OIE必須申報疫病。

鮭腎桿菌（Renibacterium salmoninarum）是革蘭氏陽性桿菌中腎桿菌屬的唯一種，屬細胞內(nèi)寄生菌。腎桿菌為形狀規(guī)則的短桿菌，菌體大小在（0.3～1.5）μm×（0.1～1）μm之間，棒狀、常成對或短鏈狀，呈多形性；無莢膜；不產(chǎn)生孢子，不能運動，不產(chǎn)酸，是鮭科魚的專性病原菌。鮭腎桿菌在體外培養(yǎng)時對生長條件要求苛刻，培養(yǎng)基要求含有半胱氨酸和血清，或血清的成分，且需要較長時間培養(yǎng)（15℃培養(yǎng)2周～3周或更長）才能形成可見菌落。易感種類有鮭鱒，尤其是大馬哈魚（太平洋鮭）。

圖1 病魚腎臟可見顆粒狀肉芽腫（箭頭示）

圖2 腎組織印片中可見革蘭氏陽性短桿菌（1000×）

圖3 病魚組織的鮭腎桿菌P 57表面蛋白基因 PCR和套式PCR擴增電泳圖

上世紀三十年代，美國首次報道棕鮭、虹鱒和溪鱒發(fā)生BKD。此后，加拿大、智利、英國、法國、德國、冰島、意大利、西班牙、南斯拉夫等地養(yǎng)殖的14種鮭科魚類報道發(fā)生BKD，均給當?shù)氐孽q科魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成巨大的損失。我國2015年首次報道在養(yǎng)殖大鱗大麻哈魚體內(nèi)檢測到鮭腎桿菌。

這種細菌廣泛存在于淡水和海水環(huán)境，當感染魚群出現(xiàn)漸進性消瘦或其他明顯的癥狀時，已無治療價值。該細菌能通過精、卵垂直傳播，而且沒有有效的治療藥物。該病多呈較長的潛伏期（慢性經(jīng)過），從感染后到死亡需要較長的時間。發(fā)病較適宜的水溫范圍在4℃～20℃，但7℃以下一般多不易發(fā)病，18℃以上時的死亡率明顯降低，所以一般發(fā)病期水溫多在7℃～18℃。

風險分析與評估：我國2015年首次報道在流水養(yǎng)殖大鱗大麻哈魚體內(nèi)檢測到鮭腎桿菌，累計死亡率可達50%以上。2018年甘肅省某養(yǎng)殖場養(yǎng)殖6cm～8cm的進口虹鱒三倍體發(fā)病，并在病魚體內(nèi)檢測到鮭腎桿菌，這也是我國首次報道在虹鱒魚體內(nèi)檢到鮭腎桿菌，累計死亡率可達50%。鑒于此，我國虹鱒魚養(yǎng)殖業(yè)疫病防控形勢嚴峻。據(jù)2017年中國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒，我國鮭鱒魚總產(chǎn)量4.1萬噸，其中鱒魚總產(chǎn)量3.7萬噸（主要是虹鱒產(chǎn)量），約占鮭鱒魚總產(chǎn)量的90%，且虹鱒魚產(chǎn)量有逐年增長趨勢，虹鱒魚已是我國重要的魚類養(yǎng)殖對象之一。由于缺少有效的敏感藥物治療細菌性腎病，因此只能采取預防措施，做好疫病監(jiān)測、苗種檢疫工作是未來控制細菌性腎病傳播的有效途徑。同時養(yǎng)殖者也應高度關(guān)注引種工作，避免引入帶病苗種。根據(jù)OIE法典第1.2章《（疫?。┝腥朊浀臉藴省罚涸摬〔≡鞔_，且有成熟可靠的檢測方法；該病對鮭鱒魚危害極大，在我國已有點狀發(fā)生，該病是制約鮭鱒魚養(yǎng)殖健康發(fā)展的重要因素。我國尚有大部分養(yǎng)殖鮭鱒魚的地區(qū)沒有被感染，需要采取嚴格控制、撲滅等措施，防止擴散。

防控措施：一是加強監(jiān)測和檢疫，由于鮭腎桿菌可以隨苗種的流通而擴散，因此加強對疫病的監(jiān)測與檢疫顯得尤為重要；二是魚卵消毒，該菌能通過精、卵垂直傳播，故在孵化期間也需要對魚卵進行消毒處理，可以參考虹鱒魚傳染性造血器官壞死病防控中魚卵消毒方法進行處理；三是對感染的場池、用具應徹底消毒，以切斷傳染源。