卵形鯧鲹刺激隱核蟲病組織病理學(xué)研究

卵形鯧鲹刺激隱核蟲病組織病理學(xué)研究

陳福艷，梁萬文，陳 明，黃 婷，李莉萍，雷愛瑩，王 瑞，楊學(xué)明，羅洪林，歐陽賢華*

(廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院，廣西水產(chǎn)遺傳育種與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530021)

利用組織切片、HE染色和顯微觀察的方法，研究了卵形鯧鲹患刺激隱核蟲病組織病理變化。組織切片結(jié)果可見，感染魚的鰓和體表受到直接機(jī)械損傷；魚體在缺氧狀態(tài)下，入侵的刺激隱核蟲有可能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生某種毒素，也可能因刺激隱核蟲感染而引發(fā)細(xì)菌或病毒繼發(fā)性感染，造成肝、脾和腎臟不同程度的間接性損傷。表現(xiàn)為鰓部機(jī)能嚴(yán)重受阻，肝臟脂肪肝變性嚴(yán)重，肝索紊亂，血竇縮小或消失；脾臟組織結(jié)構(gòu)不清晰，有充血、出血和壞死等癥狀；腎臟結(jié)構(gòu)不清晰，腎小管及腎小體縮小，腎小管細(xì)胞融合(黏連)，組織間隙松散擴(kuò)大，局部細(xì)胞壞死，存在脂肪粒。

卵形鯧鯵(Trachinotusovatus)；刺激隱核蟲(Cryptocaryonirritans)；組織病理學(xué)

卵形鯧鲹(Trachinotusovatus)是我國新興名特優(yōu)海水養(yǎng)殖品種之一。近年來，卵形鯧鲹養(yǎng)殖業(yè)在福建、廣東、海南、廣西等沿海地區(qū)迅猛發(fā)展，而且隨著深海網(wǎng)箱養(yǎng)殖技術(shù)的進(jìn)步，該養(yǎng)殖業(yè)得到進(jìn)一步發(fā)展。但隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，各種病害暴發(fā)日益頻繁，尤其是刺激隱核蟲(Cryptocaryonirritans)病，嚴(yán)重威脅卵形鯧鲹養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前由于該病尚無有效的治療方案，因此造成每年秋季快上市的大規(guī)格成品魚大批量死亡，且死亡率高達(dá)100%，這給養(yǎng)殖戶造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1-4]。國內(nèi)外關(guān)于卵形鯧鲹刺激隱核蟲病的報(bào)道諸多，如但學(xué)明[5]、黃瑋[6]、陳添錚[7]等對(duì)卵形鯧鲹和刺激隱核蟲進(jìn)行了研究，滿其蒙[8]、趙典惠[9]對(duì)細(xì)菌感染卵形鯧鲹組織病理學(xué)進(jìn)行報(bào)道，但有關(guān)刺激隱核蟲感染卵形鯧鲹組織病理學(xué)研究未見報(bào)道，因此筆者對(duì)其進(jìn)行研究，旨在為該病的病理及防治研究提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料及儀器

魚安定MS222，福爾馬林，無水酒精、二甲苯、石蠟，Leica RM2235切片機(jī)，Nikon ECLIPSE 80i顯微鏡，立體顯微鏡YYL-440。

1.2 采樣

試驗(yàn)魚來源于欽州龍門港海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖魚，規(guī)格為(400±25)g。對(duì)健康魚和患病魚進(jìn)行常規(guī)檢查和流行病學(xué)調(diào)查，依據(jù)資料[10]對(duì)寄生蟲進(jìn)行診斷。

1.3 組織切片的制備及觀察

選取健康魚和感染魚各6尾，經(jīng)MS222麻醉后，用剪刀剪取魚鰓組織，解剖刀切取皮膚、肝、脾和腎臟組織適量(3 mm×3 mm)，將各組織塊置于10%的中性福爾馬溶液浸泡24 h以上，然后用梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，HE染色，中性樹膠封片[11]。Nikon ECLIPSE 80i顯微鏡觀察拍照[12]。

2 結(jié)果

2.1 感染魚的癥狀

感染魚活動(dòng)緩慢，食欲下降或不進(jìn)食，呼吸困難，常用身體摩擦網(wǎng)片或用尾鰭拍打水面。體表黏液增多，宛如身披輕紗，局部出現(xiàn)紅腫、充血和出血現(xiàn)象；部分鰭條充血、潰爛；鰓部暗紅、腫脹、充血和出血，黏液增多而將鰓絲粘連成片(圖1-2)。體表、鰭條和鰓部附著大量“小白點(diǎn)”(圖1-1，圖1-2)，鏡檢確診為刺激隱核蟲(圖1-3，圖1-4)。

注：1～2為感染魚；3為刺激隱核蟲附著鰓絲(×100)；4為包囊(×100)。
Notes：1～2 indicated infected fish；3 indicated parasitic gill filaments(×100)；4 indicated packaging(×100).

2.2 組織病理學(xué)觀察

1)鰓組織：健康魚的鰓部鮮紅、黏液正常；鰓絲切片可見，鰓小片整齊且梳形排列，呼吸上皮細(xì)胞、柱細(xì)胞、血竇等結(jié)構(gòu)清晰(圖2-1)。感染魚鰓部切片可見，由于刺激隱核蟲感染，局部組織腫脹、組織增生，使鰓絲和鰓小片呈波浪狀彎曲變形，局部細(xì)胞壞死和脫落，結(jié)構(gòu)不完整(圖2-2，圖2-3)。鰓絲上附著大小不等的刺激隱核蟲，局部組織被刺激隱核蟲擠壓或誘導(dǎo)組織細(xì)胞增生，阻礙血細(xì)胞流通(圖2-2～圖2-6)。

注：1.健康魚切片HE×400(a.鰓絲軟骨；b.鰓小片)；2.感染魚鰓切片HE×200(a.鰓絲軟骨；b.鰓小片局部腫脹、彎曲，細(xì)胞脫落)；3.感染魚鰓切片HE×400(a.紅腫/彎曲變形；b.細(xì)胞脫落)；4.感染魚鰓切片HE×400(刺激隱核蟲)；5.感染魚鰓切片HE×400(刺激隱核蟲)；6.感染魚鰓切片HE×400(刺激隱核蟲)。
Notes：1.The historigal section of healthy fish’s gill HE×400(a.gill filament，b.gill lamella)；2.The historigal section of infected fish’s gill HE×200(a.gill filament，b.local swelling and bending of gill lamella，cell shedding)；3.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(a.redness/bending and deformation，b.cell shedding)；4.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans)；5.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans)；6.The historigal section of infected fish’s gill HE×400(Cryptocaryonirritans).

2)皮?。航】德研析K鲹體表光滑、黏液較少。感染魚皮肌組織切片可見，表皮層增厚，黏液細(xì)胞數(shù)量增多，分泌黏液亢奮，中間層增厚；小滋養(yǎng)體已進(jìn)入中間層與生發(fā)層，真皮層和肌肉層沒有發(fā)現(xiàn)刺激隱核蟲(圖3-1，圖3-2)。

注：1.感染魚皮膚組織切片HE×100(a.刺激隱核蟲；b.表皮層)2.感染魚皮膚組織切片HE×200(a.刺激隱核蟲)。
Notes：1.The transverse of infected fish’s back skin HE×100(a.Cryptocaryonirritans，b.surface layer)；2.The transverse of infected fish’s back skin HE×200(a.Cryptocaryonirritans).

3)鰭條：健康魚鰭條完整，無附著物。感染魚的鰭條局部充血、潰爛，黏液增加，常附著臟物，肉眼可見附著刺激隱核蟲(圖4-1，圖4-2)。

注：1.刺激隱核蟲；2.充血。
Notes：1.Cryptocaryonirritans；2.Congestion.

4)肝臟：健康魚與感染魚肝臟脂肪變性，肝細(xì)胞腫脹，結(jié)構(gòu)不清晰，胞漿內(nèi)充滿大小不等的空泡(脂肪滴)，有的細(xì)胞核被擠到一側(cè)(圖5-1)；感染魚脂肪肝變性更明顯，肝索結(jié)構(gòu)紊亂，有的變小或消失；部分胰腺內(nèi)有較大空泡，血管內(nèi)有大量紅細(xì)胞、白細(xì)胞，局部充血、淤血和水腫(圖5-2)。

注：1.健康魚肝臟切片HE×200；2.感染魚的肝胰腺切片HE×400(a.肝腫脹；b.血竇變大；c.胰腺內(nèi)瘀血、各種白細(xì)胞增多；d.大脂肪粒)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s liver HE×200；2.The transverse of infected fish’s hepatopancreas HE×400(a.liver swelling，b.sinusoid bigger，c.blood stasis in the pancreas and various leukocytes increasing，d.large fat granule).

5)脾臟：健康魚的脾臟結(jié)構(gòu)清晰，脾膜、紅髓、白髓等排列整齊致密，脾小體結(jié)構(gòu)清晰(圖6-1)。感染魚脾臟紅髓與白髓的界限模糊不清，小梁、脾小體組織清晰，白髓內(nèi)細(xì)胞減少，許多淋巴細(xì)胞壞死，脾血竇、間質(zhì)散布紅細(xì)胞，大靜脈內(nèi)出現(xiàn)大量紅細(xì)胞，脾臟淤血(圖6-2)。

注：1.健康魚脾臟切片HE×400；2.感染魚脾臟切片HE×200(a.小梁；b.脾索；c.脾血竇；d.淤積)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s spleen HE×400；2.The transverse of infected fish’s spleen HE×200(a. trabecula，b.splenic cord，c.splenic sinus，d.blood stasis).

6)腎臟：健康魚腎臟組織結(jié)構(gòu)完整清晰，腎小管、腎小球、腎單位等排列整齊(圖7-1)。感染魚腎臟結(jié)構(gòu)模糊，局部充血，間質(zhì)腫脹出血；有的腎小管、腎小球萎縮；腎小管內(nèi)部輪廓不清晰，兩邊上皮細(xì)胞相互溶合粘連，有些壞死崩解；腎小管和腎小體存在少許空泡(脂肪滴)(圖7-2)。

注：l健康魚中腎切片HE×400(a.腎小體；b.近端小管；c.遠(yuǎn)端小管)； 2感染魚中腎切片HE×400(a.間隙擴(kuò)大；b.腎間質(zhì)腫脹、出血；c.腎小管壞死；d.腎小管細(xì)胞溶合)。
Notes：1.The transverse of healthy fish’s mesonephros HE×400(a.renal corpuscle，b.proximal convoluted tubule，c.distal convoluted tubule)；2.The transverse of infected fish’s mesonephros HE×400(a.gap expansion，b.renal interstitium swelling and bleeding，c.uriniferous tubules necrosis，d.uriniferous tubules cell fusion).

3 討論

從組織切片觀察可知，刺激隱核蟲對(duì)魚鰓部的損傷是致命性的。一方面，由于刺激隱核蟲的入侵，鰓部組織受刺激產(chǎn)生大量黏液，黏液覆蓋整個(gè)鰓部，鰓絲粘連甚至溶合在一起，不利于鰓小片伸張，阻礙水體流通和氣體的有效交換，也減少了有害物質(zhì)的排泄，這是造成魚窒息性死亡的外因之一；另一方面，鰓絲受損嚴(yán)重，引起局部腫脹、上皮組織增生，表現(xiàn)出鰓絲及鰓小片嚴(yán)重扭曲，局部細(xì)胞壞死和脫落，且有出血和充血現(xiàn)象，因此在鰓組織內(nèi)部的血液循環(huán)不通暢，使作為主要呼吸器官的鰓組織難于進(jìn)行氣體交換，這是造成魚缺氧的重要內(nèi)因之一。此結(jié)果與雷曼紅研究的多子小瓜蟲感染金魚的組織病理學(xué)結(jié)果相似[13]。臨床觀察到瀕死的刺激隱核蟲感染魚表現(xiàn)出活動(dòng)緩慢、呼吸困難的癥狀，表明魚機(jī)體處于嚴(yán)重缺氧狀態(tài)，最終窒息而亡[1-4，14]。

刺激隱核蟲雖然沒有寄生于卵形鯧鲹的各內(nèi)臟器官，沒有對(duì)其造成直接性機(jī)械損傷，但魚體在缺氧狀態(tài)下，入侵機(jī)體的刺激隱核蟲有可能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生某種毒素，也可能因刺激隱核蟲感染而引發(fā)細(xì)菌或病毒繼發(fā)性感染，使魚體的鰓、肝、脾和腎臟受到不同程度損傷，生理機(jī)能出現(xiàn)紊亂，對(duì)機(jī)體造成傷害。研究[15-16]表明刺激隱核蟲重度感染后，魚體免疫因子的釋放受到抑制或出現(xiàn)紊亂，使其免疫能力下降。組織切片結(jié)果表明感染卵形鯧鲹的肝、脾和腎臟組織的血管內(nèi)紅細(xì)胞局部增多，表現(xiàn)為不同程度淤血，血液循環(huán)不暢，局部組織腫脹，細(xì)胞增大或壞死，可見各組織器官發(fā)生不同程度的生理機(jī)能障礙、調(diào)節(jié)能力降低，可能進(jìn)一步加速感染魚死亡。

[1]呂華當(dāng).金鯧魚病暴發(fā)10月底或再現(xiàn)死亡小高峰[J].海洋與漁業(yè)，2011，(10)：16-17.

[2]劉賢敏，劉晉，劉康，等.2010年華南地區(qū)金鯧魚養(yǎng)殖報(bào)告[J].當(dāng)代水產(chǎn)，2011，33(2)：27-28.

[3]莫景文.粵西出現(xiàn)金鯧魚大面積死亡[J]，海洋與漁業(yè)，2016，(9)：38-39.

[4]龐濤.鐵山港金鯧死亡事故小瓜蟲或非主因，幕后兇手可能是它！[J].當(dāng)代水產(chǎn)，2016，41(10)：40.

[5]但學(xué)明.刺激隱核蟲(Cryptocaryonirritans)的傳代、保存及刺激隱核蟲病的防治研究[D].廣州：暨南大學(xué)，2006.

[6]黃瑋，李安興.刺激隱核蟲及其防治措施的研究[J].中國水產(chǎn)，2005，(3)：78-80.

[7]陳添錚.福建羅源灣海區(qū)刺激隱核蟲發(fā)生周年變化以及與水質(zhì)因子的相關(guān)性研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，39(13)：174-176.

[8]滿其蒙，徐力文，區(qū)又君，等.鰤?mèng)~諾卡氏菌感染卵形鯧鲹的組織病理學(xué)研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，39(21)：132-135.

[9]趙典惠，劉麗波，孫際佳，等.用美人魚弧茵與創(chuàng)傷弧菌人工感染卵形鯧鲹的組織病理學(xué)研究[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，22(6)：455-459.

[10]黃瑋，馬躍，李安興.人工感染的刺激隱核蟲各期蟲體的超微結(jié)構(gòu)[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2005，29(5)：635-642.

[11]魯義善，簡(jiǎn)紀(jì)常，吳灶和.鯽圓形碘泡蟲病組織病理學(xué)研究[J].南方水產(chǎn)科學(xué)，2011，7(3)：68-71.

[12]汪開毓，肖丹.草魚組織學(xué)彩色圖譜[M].北京：科學(xué)出版社，2015：104.

[13]雷曼紅.多子小瓜蟲形態(tài)發(fā)育及其感染金魚的動(dòng)態(tài)組織病理研究[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[14]樊海平.海水養(yǎng)殖魚類刺激隱核蟲病的流行危害與防控[J].科學(xué)養(yǎng)魚，2015，(8)：16-17.

[15]區(qū)又君，范春燕，李加兒，等.急性低氧脅迫對(duì)卵形鯧鲹選育群體血液生化指標(biāo)的影響[J].海洋學(xué)報(bào)，2014，36(4)：126-131.

[16]尹飛，龔頎楊，施兆鴻，等.刺隱核蟲感染對(duì)褐菖鲉的脅迫及魚體的免疫應(yīng)答[J].水生生物學(xué)報(bào)，2014，38(4)：681-688.