指環(huán)蟲復(fù)配殺蟲劑效果分析

指環(huán)蟲病是魚類養(yǎng)殖中最常見的病害之一，主要寄生在魚類鰓部，大量寄生易引起魚類苗種死亡，給養(yǎng)殖戶造成很大的經(jīng)濟損失。目前，國內(nèi)外對于此病的防治主要是移植人藥、獸藥和部分農(nóng)藥等化 學(xué) 藥 物，如 福 爾 馬 林［１］、甲 苯 咪 唑［２］、敵 敵畏［３］、吡喹酮［４］等。然而這些藥物長期應(yīng)用，導(dǎo)致指環(huán)蟲耐藥性不斷加強，防治難度加大。銀杏（Ｇｉｎｋｇｏ?。猓椋欤铮猓幔┑墓麑嵧馄?，俗稱白果衣胞，是銀杏種子外面的皮層部分。其主要成分有銀杏酚酸、銀杏黃酮、銀杏內(nèi)酯、多糖等，其中銀杏酚酸對小菜蛾幼蟲、褐飛虱、桃蚜及菜粉蝶幼蟲等農(nóng)業(yè)害蟲具有殺滅作用［５－６］，水產(chǎn)上對魚類指環(huán)蟲最高殺滅率可達(dá)１００％［７］，最佳殺蟲質(zhì)量濃度為１．７０ｍｇ／Ｌ［８］。然而，由于銀杏果皮等中草藥有效成分含量較低，導(dǎo)致提取成本過高，限制了生產(chǎn)上大規(guī)模推廣。為解決化學(xué)殺蟲劑易產(chǎn)生耐藥性及中草藥殺蟲劑成本過高等問題，筆者采用中西醫(yī)結(jié)合思路，將４種化學(xué)殺蟲劑與銀杏果皮提取物進行復(fù)配，比較復(fù)配前后的殺蟲效果及對養(yǎng)殖魚類的毒性，以期為殺滅魚類頑固性寄生蟲提供新的思路。

１　材料與方法

１．１　試驗材料

１．１．１　試劑藥物

甲苯咪唑（９９．８％）由陜西漢江藥業(yè)集團股份有限公司生產(chǎn)；吡喹酮（９９．０％）由石家莊峰華醫(yī)藥化工科技有限公司生產(chǎn)。托曲珠利（９９．４６％）由南京制藥廠提供；敵百蟲（９６％）由福州聯(lián)豐生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。銀杏果皮采自江蘇省泰興市。

１．１．２　試驗魚

金魚（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ?。幔酰颍幔簦酰螅┵徸躁兾魑靼材辰痿~養(yǎng)殖場，體長（３．０±１．０）ｃｍ，體質(zhì)量（４．０±１．０）ｇ。指環(huán)蟲保蟲金魚由西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院水產(chǎn)系實驗室提供。

１．２　試驗方法

１．２．１　銀杏果皮提取物的制備

將銀杏果皮在６０℃下干燥、粉碎，細(xì)度為４０～６０目。取銀杏果皮粉５００ｇ，用１０倍體積的無水乙醇在７５℃熱回流提?。炒?，每次２ｈ，合并提取液，減壓濃縮，６０℃烘干獲得浸膏。將浸膏用甲醇溶解，定容至０．５０ｇ／ｍＬ，冰箱４℃保存?zhèn)溆谩＃保玻病≈行椭腑h(huán)蟲人工感染按照文獻(xiàn)［９］方法，將處理過的無蟲金魚與保蟲金魚混養(yǎng)，無蟲金魚的比例為７０％～８０％，保種金魚采用尾鰭打孔法標(biāo)記。定期抽檢，當(dāng)金魚全鰓指環(huán)蟲數(shù)約３０個，感染率達(dá)到１００％時，便可進行藥物殺蟲活性測定。

１．２．３　藥物殺蟲活性測定

殺蟲藥效測定方法按照文獻(xiàn)［９］進行。試驗于容積１０Ｌ的塑料盆中進行，加入５Ｌ充分曝氣的地下水，水溫（２５±１）℃，ｐＨ值７．０～７．３，每個塑料盆放入１０尾上述感染中型指環(huán)蟲的金魚。設(shè)置３個處理組，第一個處理組分別單獨加入甲苯咪唑（Ｍ）、吡喹酮（Ｐ）、托曲珠利（Ｔｏ）和敵百蟲（Ｔｒ），每個殺蟲劑設(shè)置質(zhì)量濃度為：Ⅰ：０．２５ｍｇ／Ｌ；Ⅱ：０．５０ｍｇ／Ｌ；Ⅲ：１．００ｍｇ／Ｌ；Ⅳ：２．００ｍｇ／Ｌ；第２個處理組為上述４種殺蟲劑在４個質(zhì)量濃度下分別與１．５ｍｇ／Ｌ銀杏果皮提取物復(fù)配；第３個處理組為單獨加入銀杏果皮提取物，使水體質(zhì)量濃度為１．５ｍｇ／Ｌ。設(shè)置一個對照組，不加任何藥品。加藥４８ｈ后進行觀察，將所有試驗金魚全鰓制片于顯微鏡下（１０×４倍）觀察計數(shù)。計算各個藥物的平均殺蟲率和魚平均死亡率：平均殺蟲率／％＝（對照組指環(huán)蟲的平均存活數(shù)量－試驗組指環(huán)蟲的平均存活數(shù)量）／對照組指環(huán)蟲的平均存活數(shù)量×１００％，魚平均死亡率／％＝（對照組魚的平均存活數(shù)量－試驗組魚的平均存活數(shù)量）／對照組魚的平均存活數(shù)量×１００％。

１．３　數(shù)據(jù)處理

殺蟲率及死亡率應(yīng)用ＳＰＳＳ１６．０軟件進行單因素方差分析，對不同處理組間數(shù)據(jù)采用最小顯著差法進行多重比較。

２　結(jié)果與分析

２．１　甲苯咪唑與銀杏果皮提取物復(fù)配殺蟲效果

０．２５ｍｇ／Ｌ甲苯咪唑單獨使用時，殺蟲率為７８．０８％，略高于銀杏果皮提取物（７０．５５％）（Ｐ＞０．０５）（表１），與銀杏果皮提取物復(fù)配后，殺蟲率提高至９３．８４％，且兩者差異顯著（Ｐ＜０．０５）。說明該質(zhì)量濃度下銀杏果皮與甲苯咪唑復(fù)配使用具有提高藥效的作用。當(dāng)質(zhì)量濃度為０．５０ ｍｇ／Ｌ和１．００ｍｇ／Ｌ時，甲苯咪唑單獨使用殺蟲率分別為９８．６３％、１００．００％，與銀杏果皮提取物復(fù)配后殺蟲效果均為１００％（圖１），差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。當(dāng)甲苯咪唑的質(zhì)量濃度為２．００ｍｇ／Ｌ時，甲苯咪唑及復(fù)配組４８ｈ內(nèi)金魚全部死亡，無法測定殺蟲率。

２．２　吡喹酮與銀杏果皮提取物復(fù)配殺蟲效果

０．２５ｍｇ／Ｌ吡喹酮單獨使用時殺蟲效果較弱（５１．３７％），低于銀杏果皮提取物（Ｐ＜０．０５），與銀杏果皮復(fù)配后殺蟲效果提高至９０．４１％，遠(yuǎn)高于吡喹酮和銀杏果皮提取物單獨使用的殺蟲效果（Ｐ＜０．０５）（表１，圖１）。０．５０ｍｇ／Ｌ的吡喹酮單獨使用，殺蟲效果與銀杏果皮相近，該質(zhì)量濃度下與銀杏果皮復(fù)配使用后，殺蟲率提高至９９．２４％，遠(yuǎn)高于吡喹酮和銀杏果皮提取物單獨使用的殺蟲率（Ｐ＜０．０５）。１．００ｍｇ／Ｌ的吡喹酮與銀杏果皮復(fù)配后，殺蟲率 由８１．５１％提 高 至９９．０２％（Ｐ＜０．０５）。２．００ｍｇ／Ｌ的吡喹酮與銀杏外種皮復(fù)配后，殺蟲效果略有下降，但差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。

２．３　托曲珠利與銀杏果皮提取物復(fù)配殺蟲效果

０．２５、０．５０ｍｇ／Ｌ的托曲珠利單獨使用時，殺蟲率分別為４７．２６％、６０．９６％，均低于銀杏果皮的殺蟲效果，與銀杏果皮 復(fù)配 后，殺蟲率 分別 達(dá)到８７．８２％、９５．７２％，均高于銀杏果皮和這兩個質(zhì)量濃度托曲珠利單獨使用時的效果（Ｐ＜０．０５）（表１）。當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到１、２ｍｇ／Ｌ時，其單獨殺蟲率和復(fù)配后殺蟲率均超過９０％（圖１），復(fù)配前后差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。

２．４　敵百蟲與銀杏果皮提取物復(fù)配殺蟲效果

敵百蟲４個質(zhì)量濃度下與銀杏果皮復(fù)配后，殺蟲效果較復(fù)配前均有提高（圖１），且前３個質(zhì)量濃度復(fù)配后殺蟲效果與復(fù)配前差異顯著（Ｐ＜０．０５）。２．００ｍｇ／Ｌ的敵百蟲與銀杏果皮復(fù)配前后差異不顯著（Ｐ＞０．０５）（表１）。

２．５?。捶N殺蟲劑復(fù)配前后對金魚的毒性

４８ｈ后，對照組死亡率為０，其余各組死亡率見表２。由表２可知，在４種低質(zhì)量濃度下，０．２５、０．５０ｍｇ／Ｌ的甲苯咪唑和吡喹酮，０．２５ｍｇ／Ｌ托曲珠利，０．２５、０．５０、１．００ｍｇ／Ｌ敵百蟲復(fù)配前后金魚死亡率為０，其余質(zhì)量濃度，除１．００ｍｇ／Ｌ托曲珠利組外，幾乎各個組藥物復(fù)配后對金魚的毒性均比復(fù)配前有所增強。１．００ｍｇ／Ｌ的甲苯咪唑復(fù)配前金魚死亡率 為２０．０％，復(fù) 配 后 為３０％；１．００、２．００ｍｇ／Ｌ的吡喹酮復(fù)配前金魚死亡率為０和２０．０％，復(fù)配后為１０．０％和３０．０％；０．５０、２．００ｍｇ／Ｌ的托曲珠利復(fù)配前金魚死亡率分別為０和２０．０％，復(fù)配后分別為１０．０％和３０．０％；２．００ｍｇ／Ｌ的敵百蟲復(fù)配前金魚死亡率為０，復(fù)配后為１０．０％。２．００ｍｇ／Ｌ甲苯咪唑復(fù)配前后死亡率均為１００％。

３　討　論

甲苯咪唑［２，１０］、吡喹酮［１，４］、托曲珠利［１１－１２］及敵百蟲［１３］對指環(huán)蟲均有較好的殺滅效果，尤其是甲苯咪唑，以往作為殺滅指環(huán)蟲的特效藥。然而，由于多年使用，寄生蟲抗藥性不斷增強，最初只需０．１０～０．２０ ｍｇ／Ｌ即可殺滅指環(huán) 蟲，而 今 施 用２．００ｍｇ／Ｌ仍有蟲體存活，抗藥性增加了十余倍。為了探索降低指環(huán)蟲對化學(xué)藥物的抗藥性，本研究將４種殺蟲劑與銀杏果皮提取物復(fù)配進行殺蟲試驗。目前中西藥聯(lián)用在魚類上殺蟲研究的很少，在獸醫(yī)上白喜婷等［１４］用中藥常山、苦參等與西藥地克珠利聯(lián)合使用防治雞球蟲病，要比西藥組治療指數(shù)高３１．９２（Ｐ＜０．０１）。寧夏某養(yǎng)雞場薩索雞爆發(fā)大腸埃希菌與球蟲混合感染，發(fā)病初期用硫酸慶大霉素、諾氟沙星及鹽酸氯苯胍治療，效果不佳，采用中西結(jié)合治療并采取綜合性防治措施，使疫情迅速得到了控制［１５］，體現(xiàn)了中西藥聯(lián)用的優(yōu)勢。在本研究中，４種殺蟲劑與銀杏果皮提取物復(fù)配后，在較低質(zhì)量濃度（０．２５、０．５ｍｇ／Ｌ）時，均起到了提高藥效的作用，如０．２５、０．５０ｍｇ／Ｌ敵百蟲在復(fù)配前殺蟲率分別為１９．８６％、７５．３４％，復(fù)配后殺蟲率分別提高至６７．８１％、９４．５３％；０．２５ｍｇ／Ｌ甲苯咪唑復(fù)配前殺蟲率為７８．０８％，復(fù)配后提高到９３．８４％。對魚類的毒性，復(fù)配后有增強的趨勢。但在藥物質(zhì)量濃度較低時，毒性不明顯。０．２５ｍｇ／Ｌ的甲苯咪唑和吡喹酮、０．５０ｍｇ／Ｌ托曲珠利及０．５０ｍｇ／Ｌ的敵百蟲與銀杏果皮復(fù)配后殺蟲率均逾９０％，也達(dá)到了殺蟲的效果，且該質(zhì)量濃度下對金魚的毒性非常低，可用于生產(chǎn)上殺蟲。因此，殺蟲劑與銀杏果皮復(fù)配，既提高了藥效，又降低了成本，在生產(chǎn)上應(yīng)用是可行的。