蛭弧菌特點及使用方法

蛭弧菌是一種具有類似噬菌性質(zhì)的細(xì)菌，但它不是噬菌體，更不是細(xì)菌。它對弧菌有較強(qiáng)的裂解作用，是水產(chǎn)養(yǎng)殖中主要病菌“弧菌”的天敵。

近兩年，蛭弧菌產(chǎn)品的使用突然火了起來，市面上也出現(xiàn)了各式各樣的蛭弧菌產(chǎn)品，有液體蛭弧菌，有粉劑蛭弧菌，還有蛭弧菌凍干粉，尤其是蛭弧菌凍干粉成了推廣的新潮流，同樣都是蛭弧菌凍干粉，有的產(chǎn)品用的很好，有的產(chǎn)品用了卻見不到效果，很多養(yǎng)殖戶甚至廠家都對蛭弧菌相關(guān)產(chǎn)品抱有疑問，本文通過對蛭弧菌知識的初步梳理，為養(yǎng)殖戶、經(jīng)銷商、公司更好地理解、使用蛭弧菌產(chǎn)品提供一些思路。

蛭弧菌也叫噬菌蛭弧菌，屬于細(xì)菌界變形細(xì)菌門蛭弧菌科蛭弧菌屬，具有細(xì)菌的一切形態(tài)特征：

單細(xì)胞，弧形或逗點狀，有時呈螺旋狀。0.3-0.6×0.8-1.2微米，或僅為桿菌長度的1/3-1/4，端生鞭毛，比其他細(xì)菌的鞭毛粗3倍~4倍，與鞭毛相對的一端有釘狀纖毛，被稱為“感染錐子”，與菌體的識別和吸附宿主有關(guān)。其運動活躍，革蘭氏染色陰性。

蛭弧菌比通常的細(xì)菌要小，能通過細(xì)菌濾器，所以普通的顯微鏡是看不到它的，至少要用到油鏡，甚至需要染色才行。在相差顯微鏡下，可見蛭弧菌呈跳躍式的運動；電鏡觀察，蛭弧菌以弧、桿狀為主。因為小，低于2萬轉(zhuǎn)的離心機(jī)對蛭弧菌的濃縮是沒有意義的，而2萬轉(zhuǎn)的離心機(jī)一般是實驗室才會配備。

蛭弧菌有寄生型，也有兼性寄生，極少數(shù)營腐生。非寄生型營腐生生活，可在蛋白胨和酵母提取物培養(yǎng)基上生長繁殖。從自然界分離得到的蛭弧菌都是依賴寄生型，迄今為止，還沒有直接從自然界分離得到非寄生型。

寄生型蛭弧菌生長，一般要求pH6.0-8.5；溫度23℃~37℃，低于12℃，高于42℃時均不生長；能穩(wěn)定分解蛋白質(zhì)，一般不利用碳水化合物，而以肽、氨基酸作碳源和能源；能液化明膠；嚴(yán)格好氧。

溫度不在適宜范圍的時候，蛭弧菌是不生長的，所以使用時要充分考慮這一點。比如3月、4月份用它泡苗，效果肯定不好，如果改成拌料投喂，會對腸道控菌產(chǎn)生積極影響。

蛭弧菌的繁殖需要氧氣，使用的時候也建議在早上8點~10點使用，這樣可以獲得較為充足的溶氧。另外，其耗氧不會達(dá)到非常劇烈的程度，因為其繁殖代時一般要4小時~6小時。

蛭弧菌與宿主細(xì)胞之間，常表現(xiàn)出一定的特異性。不過，有的特異性較差，能侵入多種細(xì)菌。例如不同的蛭弧菌菌株，能侵入各類不同的植物病原菌。

從這一點上看，其比噬菌體（病毒）、細(xì)菌素（蛋白質(zhì)）的廣譜性要好。實際上蛭弧菌可感染許多不同科屬的菌，但其總體上有一定偏向性，比如其可感染大多數(shù)革蘭氏陰性細(xì)菌（如志賀氏菌屬、沙門氏菌屬、埃希氏菌屬、歐文氏菌屬、變形桿菌屬、弧菌屬、假單胞菌屬、鉤端螺旋體等微生物），但只對少數(shù)的革蘭氏陽性（如糞鏈球菌、乳酸菌等）細(xì)菌感興趣，比如其不裂解枯草桿菌，同時也有報道指出其對某些真菌和腸道病毒也有一定的裂解活性。

寄生的特異性也對實際使用方法有很大的影響，即蛭弧菌是不是不管好菌壞菌都會攻擊？如果是這樣的話，那么很難被我們所用了，實際上，其有一定傾向性，這就給實際的應(yīng)用提供了更多的可能性。

華南理工大學(xué)郭衍彪郭衍彪（2016年）的研究指出，蛭弧菌BDW03對試驗組大菱鲆腸道沒有控制作用的菌屬為8個（占53.3%），這8個菌屬中多為革蘭氏陽性菌屬（6/8）。另外，其通過乳酸菌拌食餌料和潑灑BALOs喂食大菱鲆60小時后，乳酸菌和BALOs對大菱鲆腸道菌群中革蘭氏陰性菌的控制作用（分別占總菌屬的33.3%和26.7%）優(yōu)于對革蘭氏陽性菌的控制作用（分別占總菌屬的26.7%和20.0%）。這也間接指出了蛭弧菌對細(xì)菌的裂解可能有一定的偏向性。

上海水產(chǎn)大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院徐琴等人（2009）的研究指出，加噬菌蛭弧菌和黏紅酵母組的試驗效果不理想，表明這兩株菌體之間有一定的拮抗作用。而聯(lián)合使用噬菌蛭弧菌和球形紅假單胞菌（是紫色非硫光合細(xì)菌紅假單胞菌屬的一個種）組展示了凈化水質(zhì)，預(yù)防病害的優(yōu)良前景，此組能有效地吸收氨氮、硫化物等有害物質(zhì)。這也指出了蛭弧菌是直接可以和某些光合細(xì)菌直接混合使用的，這一點大大提高了使用的方便性。

再加上其他專家的一些總結(jié)，基本上蛭弧菌更偏向于革蘭氏陰性桿菌，同時從即有的論文得知，其最好不要用酵母混用，但蛭弧菌可以和光合細(xì)菌混用，建議最好分開使用。同時還有一個關(guān)鍵點，即在一個20天的周期內(nèi)，蛭弧菌對水體的調(diào)控作用能達(dá)到近2周時間。

蛭弧菌要用雙層平板而不用單層平板法檢測，主要原因在于培養(yǎng)皿底部并不是十分平整，因此注入少量培養(yǎng)基鋪平底部作為下層，會獲得幾近水平的底部，然后在上面將噬菌體和細(xì)菌混合物的培養(yǎng)基（比較?。┳⑷胱鳛樯蠈樱@樣使得觀察物在同一平面，更利于噬菌斑的觀察及分離純化。

揚州大學(xué)王亞麗（2007年）的研究指出，將蛭弧菌分離株BD5W以107pfu/mL濃度給小鼠灌胃，試驗組和對照組均健康，證明噬菌蛭弧菌對小鼠沒有毒性作用。

江蘇省泰州市海陵區(qū)畜牧獸醫(yī)站徐懿（2011年）在噬菌蛭弧菌BD57的急性毒性試驗研究指出，根據(jù)《獸藥試驗技術(shù)規(guī)范匯編》的要求選用小白鼠進(jìn)行了急性毒性試驗。分別采用灌胃和腹腔注射法進(jìn)行了急性毒性試驗，試驗結(jié)果表明，噬菌蛭弧菌BD57對小鼠沒有毒性作用。

華南理工大學(xué)陳麗蕓（2012年）的研究也指出，至今沒有發(fā)現(xiàn)蛭弧菌對真核細(xì)胞有毒的報道，對小白鼠、豚鼠、家兔等動物無毒性作用，對猴腎、Hela細(xì)胞組織培養(yǎng)也未引起細(xì)胞病變。迄今為止，相關(guān)報道表明蛭弧菌對人和某些動物無毒害作用。

蛭弧菌對于宿主菌的裂解過程一般分為五個步驟：識別、吸附與侵入、定位與合成、復(fù)制、裂解。

識別：在這個過程中，有趣的是蛭弧菌可以通過鞭毛實現(xiàn)跳躍式的運動，而向宿主菌快速移動，其是通過無鞭毛一端粘附于宿主菌表面的。鞭毛在這里起到了非常重要的作用，實際上，在一些發(fā)酵的試驗研究過程中也發(fā)現(xiàn)，如果發(fā)酵罐內(nèi)的漿葉轉(zhuǎn)速過快，對鞭毛有損傷的話，蛭弧菌就無法再攻擊宿主。

吸附與侵入：為了實現(xiàn)吸附與侵入這個目的，蛭弧菌菌體會以100轉(zhuǎn)/秒以上的速度產(chǎn)生一種機(jī)械“鉆孔”效應(yīng)，加上蛭弧菌入侵時的收縮從而進(jìn)入宿主菌的周質(zhì)空間。

定位與合成：一是蛭弧菌會脫掉鞭毛，二是宿主菌會變成蛭質(zhì)體。

復(fù)制：蛭弧菌在這個階段實現(xiàn)了復(fù)制繁殖。裂解：在最后一個過程中，蛭弧菌會合成鞭毛，裂解宿主的細(xì)胞膜，釋放出所有蛭弧菌。

蛭弧菌有五種保存方法，其中以冷凍干燥法保藏效果最好，1個月的復(fù)活率為100%，其次為4℃營養(yǎng)肉湯液保藏法和-20℃甘油保藏法，17個月復(fù)活率均為67%。有一點要明確，其冷凍干燥完成之后，是在4℃環(huán)境中進(jìn)行保存的。

蛭弧菌的使用方法，特別推薦在所有甲殼類養(yǎng)殖動物（小龍蝦、螃蟹、白蝦等）脫殼期之前使用，達(dá)到無刺激生物消毒這個效果。

脫殼期是這些養(yǎng)殖動物特別脆弱的時期，容易感染相關(guān)疾病，尤其是溫度升高的時候更是如此；另外，在脫殼期，甲殼類動物特別敏感，很多消毒劑是不能使用的，而蛭弧菌則可以做到安全無刺激；使用上，建議提前2天左右使用，如果能先使用一些補鈣產(chǎn)品之后再使用蛭弧菌那就更好了，因為一定量的鈣離子可以促進(jìn)蛭弧菌的繁殖。

推廣“配合化學(xué)消毒劑治療疑難雜癥”。到了養(yǎng)殖中后期，在溫度高的時候，有些疾病非常難以治療，主要的特點是止不住、易反復(fù)，這個原因主要在于化學(xué)消毒劑雖然具備了快速殺菌的效果，但其反彈也非常迅速，一般普通的化學(xué)消毒劑或者國標(biāo)抗生素，使用后24小時~48小時，水體的總菌數(shù)甚至弧菌數(shù)可能比用前還要高，這可能是難以治療的主要原因。

為了讓殺菌即迅速又持久，必需結(jié)合使用化學(xué)消毒劑和蛭弧菌。首先使用化學(xué)消毒劑對水底、水面進(jìn)行綜合消毒，同時內(nèi)服國標(biāo)抗生素進(jìn)行體內(nèi)消毒，在見到效果之后，再連續(xù)使用1次~2次蛭弧菌，就可以看到明顯不同的治療效果。因為化學(xué)消毒劑起到了快速壓制的效果，而蛭弧菌則起到了長期壓制有害菌的效果，強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合，能有效抑制有害菌的繁殖。

在使用過硫酸氫鉀底改片后，第二天可以大劑量使用有益菌，此時建議使用蛭弧菌和光合細(xì)菌一起混合使用，這一點已通過試驗證明是可行的。也可以按20天一個周期，先行使用光合細(xì)菌，一周后再使用蛭弧菌原裝凍干粉，也能達(dá)到比較好的使用效果。

蛭弧菌主要針對大腸桿菌引起的相關(guān)腸炎疾病，因為在發(fā)酵蛭弧菌之前，必需先行生產(chǎn)大腸桿菌，再將蛭弧菌接種進(jìn)去，大腸桿菌是蛭弧菌最為喜愛的細(xì)菌之一，因此其治療此類腸炎效果會更好一些。另外，蛭弧菌本身就是一個寶庫，其蛋白質(zhì)含量豐富，可達(dá)細(xì)胞干重的60%~65%，DNA的含量為5%。

(趙海永文/圖)