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水霉菌的培養(yǎng)與治療對比
基于水霉在分類地位上的分歧,本文將對比OIE中羅列的水霉相關(guān)疫病的生物學(xué)、鑒定、預(yù)防與治療,以及傳統(tǒng)水霉病和藻類的相關(guān)說法,以期為今后水霉的培養(yǎng)、鑒定以及預(yù)防工作打下基礎(chǔ)。
以O(shè)IE對侵襲絲囊霉菌的描述為例,水霉具有無隔膜類真菌菌絲結(jié)構(gòu)。水霉具有兩種典型的游走孢子結(jié)構(gòu),初級游走孢子由孢子囊中的圓細(xì)胞組成,在孢子囊頂部釋放并形成孢子群,然后迅速轉(zhuǎn)化為腎型的次級游走孢子。次級游走孢子的橫向雙鞭毛結(jié)構(gòu),使其能在水中自由游動,它的活性時(shí)期取決于環(huán)境和宿主的狀態(tài)。通常來說,游走孢子形成包囊、出芽并產(chǎn)生新的菌絲,但是游走孢子的第三代孢子可能會從包囊中釋放(多游現(xiàn)象)。
水霉菌感染范圍較為廣泛,可感染魚體皮膚使鱗片脫落,也可感染咽部、食道、肝臟、腎臟、脾臟等實(shí)質(zhì)性器官。當(dāng)魚體表現(xiàn)出明顯癥狀時(shí),說明菌絲已侵入魚體肌肉深處,并向外延伸長出大量菌絲。
在水產(chǎn)養(yǎng)殖中,被感染的魚體在頭部、皮膚及鰭表面可見灰白色菌絲。在嚴(yán)重感染情況下,50%皮膚表面被覆蓋。當(dāng)水霉菌侵入機(jī)體內(nèi)并分泌蛋白質(zhì)分解酶時(shí),可促使魚體出現(xiàn)焦躁不安癥狀并與固體物質(zhì)不斷摩擦,嚴(yán)重時(shí)魚體衰弱,游動無力,食欲減退,最后衰弱而死。當(dāng)魚體體表受傷時(shí),造成水霉的游走孢子黏附于傷口,吸取魚體體內(nèi)營養(yǎng)而迅速生長,被感染的魚多數(shù)呈上躥下跳不安狀游動。
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水霉(傳統(tǒng)說法) |
藻類 |
最適生長溫度 |
13-25℃(游走孢子20℃;萌發(fā)25℃) |
15-33℃ |
培養(yǎng) |
保種介質(zhì):油菜籽、PDA、GPY、CMA、沙氏培養(yǎng)基(最適氮源:蛋白胨、硫酸銨、牛肉膏) pH7-8 |
20mg/L (NH4)2SO4,2mg/L KH2PO4,0.2mg/L 檸檬酸鐵(FeC6H5O7) |
鑒定用基因片段 |
ITS1- ITS4: TCCGTAGGTGAACCTGCGG, TCCTCCGCTTATTGATATGC (~750bp) |
16S rRNA、ITS: AGGTGAACCTGCGGAAGGATC, CCTGCAGTCGACAKATGCTTAARTTCAGCRGG; GTCGCACCTACCGATTGA, CGGGTAGCCTTGCTTGAT (1046bp); TCCGTAGGTGAACCTGCGG, TTGATATGCTTAAGTTCAGCG 18S rDNA: CAAGTTTCTGCCCTATCAGCT, GCTTTCGCAGTAGTTCGTCTT (650bp); ACCTGGTTGATCCTGCCAGT, TCACCTACGGAAACCTTGT (1680bp) rbcL: GATGCAAACTACACAATTAAAGATACTG, ATTTTGTTCGTTTGTTAAATCCG (1486bp) |
人工感染 |
20℃,體表人工劃傷1cm,浸泡攻毒;15±1℃,去除背鰭下方兩側(cè)鱗片,在肌肉處刮開2-5mm的傷口,并用紗布擦拭掉傷口表面的粘液,孢子濃度1×103 |
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預(yù)防 |
消毒:鹽度>2‰;聚維酮碘、抗生素、光合細(xì)菌、芽孢桿菌、殼聚糖、水霉靈、水霉凈、菌毒消、美婷 中藥:厚樸、苦參、五倍子、丁香、魚藤粉、苦楝素、土槿皮、石榴皮和山蒼子 |
消毒:生石灰、草木灰 |
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侵襲絲囊霉菌 |
變型絲囊霉菌 |
最適生長溫度 |
20-30℃ |
4-29.5℃ |
培養(yǎng) |
葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基(GP): 3g/L葡萄糖,3g/L蛋白胨,0.128g/L MgSO4·7H2O,0.014g/L KH2PO4,0.029g/L CaCl2·2H2O,2.4mg/L FeCl3·6H2O,1.8mg/L MnCl2·4H2O,3.9mg/L CuSO4·5H2O,0.4mg/L ZnSO4·7H2O GPY:GP+0.5g/L酵母提取物 |
IM培養(yǎng)基: 1g/L酵母提取物,5g/L葡萄糖,10mg/L噁喹酸 |
鑒定用基因片段 |
ITS1: TCATTGTGAGTGAAACGGTG, GGCTAAGGTTTCAGTATGTAG (234bp) ITS1-ITS2: GCCGAAGTTTCGCAAGAAAC, CGTATAGACACAAGCACACCA (550bp); CTTGTGCTGAGCTCACACTC, ACACCAGATTACACTATCTC (564bp) |
ITS1-ITS2: GCTTGTGCTGAGGATGTTCF, CTATCCGACTCCGCATTCTG (569bp) ITS1-ITS4: TCCGTAGGTGAACCTGCGG, TCCTCCGCTTATTGATATGC (757bp) |
人工感染 |
20℃,肌肉注射0.1mL |
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預(yù)防 |
消毒:曬池;鹽度>2‰;石灰、沸石粉;化學(xué)消毒 中藥:苦楝子(印楝素)、香樟素、姜黃素、魚腥草、四葉蘿芙木(Rauvolfia tetraphylla)1%甲殼素或殼聚糖免疫刺激:Salar-bec[包含300g/kg維生素C,150g/kg維生素B和痕量維生素B1、B2、B6和B12]生物制劑:抗菌肽合成物QP13和干擾素IRF-1 |
次氯酸鈉、有機(jī)碘 |
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