養(yǎng)殖花鱸病毒和寄生蟲性疾病鑒別與控制

養(yǎng)殖花鱸病毒和寄生蟲性疾病鑒別與控制

蘇友祿 ，李勇 ，王寶屯 ，李望東 ，羅志平 ，古群紅

（1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院健康養(yǎng)殖創(chuàng)新研究院，廣東 廣州 510225；2.珠海市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心，廣東 珠海 519000）

花鱸（Lateolabraxmaculatus），俗稱海鱸，又稱七星鱸。近年來，花鱸池塘養(yǎng)殖在廣東省珠海市大力推廣，據(jù)不完全統(tǒng)計，花鱸在珠海的養(yǎng)殖面積超過2 000 hm2，每667 m2產(chǎn)量一般可達5 000 kg，最高達10 000 kg，產(chǎn)量約占廣東省花鱸養(yǎng)殖產(chǎn)量的70%，占全國花鱸產(chǎn)量的50%以上[1]。珠海市的花鱸產(chǎn)值約21億元，繼2009年獲得珠海首個“國家地理標(biāo)志”保護產(chǎn)品，2011年珠海市斗門區(qū)白蕉鎮(zhèn)獲得了“中國海鱸之鄉(xiāng)”稱號，2019年珠海市又獲得“中國海鱸之都”的榮譽稱號。養(yǎng)殖花鱸成為了當(dāng)?shù)剞r(nóng)民增收最為重要的生產(chǎn)方式之一，已發(fā)展成為廣東省特色水產(chǎn)品之一。隨著養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大，養(yǎng)殖密度逐步提高，再加上養(yǎng)殖模式主要以個體戶和合作社形式養(yǎng)殖，科學(xué)養(yǎng)殖意識薄弱，整體養(yǎng)殖技術(shù)相對傳統(tǒng)，養(yǎng)殖水質(zhì)環(huán)境變差等原因，導(dǎo)致花鱸病害頻發(fā)。該研究團隊對花鱸病害調(diào)查發(fā)現(xiàn)，其病毒病主要為苗期階段易爆發(fā)的病毒性神經(jīng)壞死病和養(yǎng)殖各階段的虹彩病毒??；感染花鱸的主要寄生蟲為指環(huán)蟲和車輪蟲。筆者針對上述病害的病原、流行情況、發(fā)病癥狀、診斷和防控方法進行總結(jié)，以期為生產(chǎn)一線的花鱸養(yǎng)殖企業(yè)（戶）提供參考。

1 病毒性神經(jīng)壞死病

1.1 病原

赤點石斑魚神經(jīng)壞死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)，屬于野田村病毒科，乙型野田村病毒屬（Betanodavirus），為無囊膜、二十面體的RNA病毒，直徑為25～30 nm。

1.2 流行情況

主要感染仔魚和幼魚，魚苗的死亡率一般可達40～100%，該病的流行水溫25～32℃，病毒可附著在魚卵表面，通過水平和垂直傳播。

1.3 發(fā)病癥狀

發(fā)病仔魚厭食，身體瘦弱，體色發(fā)黑，活力差，游動異常，或腹部朝上，浮于水面做盤旋游動[2]，或在水中打轉(zhuǎn)，有時橫臥在池塘底部，部分病魚頭部充血、腦、眼、口部潰爛（圖1）。病魚最后浮上水面或狂奔而死亡，組織病理學(xué)可見腦組織和視網(wǎng)膜中心出現(xiàn)空泡化。

1.4 診斷方法

一是根據(jù)病癥特點及流行情況作出初步診斷。二是通過細胞培養(yǎng)分離病毒，作進一步的鑒定。三是取可疑病魚腦組織或視網(wǎng)膜進行組織病理學(xué)觀察，若出現(xiàn)神經(jīng)組織壞死和腦、視網(wǎng)膜組織的空泡化可作為確診的重要依據(jù)。四是用ELISA和熒光抗體等免疫學(xué)方法進行檢測。五是參照《SCT 7216—2012魚類病毒性神經(jīng)壞死病》的RT-PCR方法進行檢測判定。

1.5 防控方法

（1）受精卵卵膜攜帶病毒時，可用20 mg/L的有效碘浸浴受精卵15 min，或在水溫20℃時，用50 mg/L濃度的次氯酸鈉浸泡受精卵10 min。（2）用臭氧處理過的海水洗卵3～5 min，或用10%聚維酮碘溶液浸浴魚苗，30 min/次，連用 2～3 次。（3）在購買魚苗和魚卵時，使用神經(jīng)壞死病毒檢測試劑條或其他現(xiàn)場檢測試劑，選擇病毒檢測呈陰性苗種。（4）若自然海水本身已攜帶病毒，可建立蓄水池，用鹵素類、乙醇類和堿溶液進行消毒；可用臭氧可減少因水源攜帶病原的傳染。（5）對發(fā)病魚池實施隔離，撈出病魚并銷毀，及時撈出死魚深埋；對育苗室、育苗池、養(yǎng)殖池和器具進行消毒處理，由于病毒對干燥和直射光有很強的耐受力，所以推薦使用消毒劑進行消毒處理。（6）盡量減少過塘等刺激性操作，運輸過程要有充足溶氧，魚苗下塘要保證水體環(huán)境穩(wěn)定。

圖1 感染神經(jīng)壞死病毒的花鱸苗游泳異常（A，箭頭示）和頭部充血、腦部潰爛（B，箭頭示）

2 虹彩病毒病

2.1 病原

真鯛虹彩病毒（Red sea bream iridobirus virus,RSIV），屬于虹彩病毒科（Iridoviridae）、細胞腫大病毒屬（Megalocytivirus），為雙鏈線狀DNA病毒，有囊膜，核衣殼為二十面體，直徑120～200 nm[3]。

2.2 流行情況

該病有明顯的季節(jié)性，流行季節(jié)為4—10月，水溫在25℃左右開始出現(xiàn)流行，28～30℃最易流行，20℃以下則一般不發(fā)病，主要發(fā)生在成魚養(yǎng)殖階段，也危害仔魚和幼魚。

2.3 發(fā)病癥狀

體表無明顯損傷，嗜睡，黑身，部分魚鰭基出血，游泳異常，漂浮于水面，解剖發(fā)現(xiàn)，脾臟腫大，嚴重時肝臟、腎臟腫大，有點狀出血（圖2）。脾、腎等病毒靶器官內(nèi)會出現(xiàn)大量嗜堿性的、細胞質(zhì)勻質(zhì)化的、直徑約 15～20 μm 的腫大細胞[3]。

2.4 診斷方法

（1）從病魚體表和脾臟腫大，可作出初步診斷。（2）取病魚脾臟、肝臟、心臟、腎臟或鰓組織，切片，Giemsa染色，在光鏡下觀察到異常肥大的細胞。（3）做腎臟超薄切片，通過電鏡觀察到病毒粒子。（4）可參照《GB/T36191-2018真鯛虹彩病毒病診斷規(guī)程》進行診斷。

2.5 防控方法

（1）購不帶毒或抗病力強的苗種。進行虹彩病毒檢測，避免購買攜帶病毒的苗。沒有檢測條件的，要挑活力好、健康的苗，雖然有魚體內(nèi)存在病毒，但由于抵抗力強而并不發(fā)病。（2）徹底清塘，使用無污染水源。放養(yǎng)苗種前應(yīng)清除塘底過多的淤泥，并使用生石灰和漂白粉消毒。有條件的養(yǎng)殖場可建立蓄水池，將養(yǎng)殖用水引入蓄水池自行凈化一段時間或消毒處理后再引入養(yǎng)殖塘。（3）調(diào)控好池塘水質(zhì)，適當(dāng)降低放養(yǎng)密度。單養(yǎng)池塘的透明度最好保持在30 cm左右，透明度過高或過低對養(yǎng)殖均不利，養(yǎng)殖密度不宜過高。（4）減少投料。發(fā)病后減少飼料投喂可減少患病魚對溶解氧的需求，減輕池塘中的環(huán)境壓力，減少病魚死亡，利于病魚的恢復(fù)。（5）內(nèi)服保健。在飼料中添加有益菌或免疫調(diào)節(jié)劑，補充營養(yǎng)，提高機體抗應(yīng)激能力。（6）免疫接種?；|虹彩病毒疫苗目前正在研制中，免疫接種可能是控制虹彩病毒病的最有效方法，可通過注射疫苗來提高魚體對該病的特異性免疫。

圖2 感染虹彩病毒的花鱸脾臟腫大（箭頭示）

3 車輪蟲病

3.1 病原

目前車輪蟲被廣泛地認定為一個科，即車輪蟲科（Trichodinidae Claus,1874），感染花鱸的車輪蟲大小在40～100 μm，體呈碟形或鐘形。背面凸出，中間具開口形成胞咽，有兩排平行呈螺旋狀的長纖毛，腹面內(nèi)凹形成附著器，由3層呈同心圓排列的環(huán)狀物構(gòu)成。蟲體側(cè)面觀如氈帽狀，反面觀圓碟形，運動時如車輪轉(zhuǎn)動樣。隆起的一面為口面，相對而凹入的一面為反口面，反口面最顯著的構(gòu)造是齒輪狀的齒環(huán)，反口面的邊緣有一圈較長的纖毛[4]。

3.2 流行情況

主要寄生在花鱸的鰓、皮膚和鰭條上，四季可見，以初夏到秋末為流行期，適宜水溫為20～28℃，在池塘面積小、水淺、有機質(zhì)豐富及放養(yǎng)密度高的環(huán)境中更易暴發(fā)，可引起苗種培育階段仔魚和體長15 cm以下規(guī)格魚大量死亡。

3.3 發(fā)病癥狀

少量車輪蟲寄生時無明顯癥狀，大量寄生時（尤其是在苗種階段）體色暗淡，魚體失去光澤，離群獨游，攝食率下降甚至停止進食。肉眼觀察體表或鰓部黏液增多，上皮組織受損，呼吸困難，魚苗可出現(xiàn)“白頭白嘴”或成群圍繞池邊狂游不止，即“跑馬”等癥狀，常引起魚苗、魚種的大批死亡。

3.4 診斷方法

通過從鰓或體表取少許黏液，制成水浸片，在低倍鏡下，觀察到較多蟲體時，方可確診（圖3）；蟲體數(shù)量較少時，尚不能認為是車輪蟲病。

3.5 防控方法

（1）放苗前徹底清塘消毒，曬塘底，保持良好環(huán)境。（2）用0.7 mg/L的硫酸銅或硫酸銅0.5 mg/L和硫酸亞鐵0.2 mg/L全池潑灑1次（水肥池塘要注意適時增氧）。（3）每 m3水體用苦楝葉 40～50 mg，水煎取汁，全池潑灑?；蝌?qū)蟲散（青蒿末），每kg魚體重用0.2 g；或每kg飼料用4 g，拌料投喂，每天投喂1次，連用5～7 d。注意：硫酸銅隨溫度升高而毒性變大，且有效濃度和有害濃度差異小，加量需謹慎。

圖3 顯微鏡下觀察花鱸鰓絲上大量的車輪蟲（箭頭示）

4 指環(huán)蟲病

4.1 病原

逆轉(zhuǎn)指環(huán)蟲（Dactylogyrus inversus），蟲體扁平，有4個眼點，2對頭器，蟲體后端有一圓盤狀固著器，邊緣有7對小鉤，中央有1對錨狀大鉤，蟲體一般小于2 mm。蟲體常聚集在一起，輕微感染時，蟲接近初級鰓絲的游離端，重度感染時，在鰓絲的中部、基部和鰓弓上都可觀察到蟲體[5]。

4.2 流行情況

流行水溫為20～25℃，可導(dǎo)致不同規(guī)格的花鱸發(fā)病，嚴重時可引起病魚大批死亡，魚越小受害越嚴重，全長1～2 cm的小魚，當(dāng)有每尾魚鰓上感染20～40枚蟲體后，死亡只需1周左右。

4.3 發(fā)病癥狀

輕度感染時，多為機械性損傷，還會導(dǎo)致鰓絲組織增生和融合。大量寄生時，可造成鰓組織嚴重受損，鰓絲腫脹、貧血、出血、呈花鰓，鰓上分泌大量黏液。病魚極度不安，上下躥動，狂游，用吻部拱土，后期游動緩慢，上浮水面，呼吸困難而死。魚苗或小魚種患病嚴重時，由于鰓絲腫脹，可引起鰓蓋張開，還常伴有魚體消瘦，體表無光澤等現(xiàn)象[6]。

4.4 診斷方法

根據(jù)發(fā)病癥狀及流行情況初步診斷，取鰓絲置于顯微鏡低倍鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)有大量指環(huán)蟲寄生即可確診（圖4）。

圖4 顯微鏡下觀察花鱸鰓絲上大量的指環(huán)蟲（箭頭示）

4.5 防控方法

（1）放苗前徹底清塘消毒，清除塘底過多淤泥。（2）加強池塘水質(zhì)、底質(zhì)管理，保持良好環(huán)境，增強魚體抵抗力。（3）90%晶體敵百蟲，一次量為每立方米水體0.2～0.3 g，全池遍灑；或2.5%敵百蟲粉劑，一次量為每m3水體1～2 g，全池遍灑。（4）10%甲苯咪唑溶液，一次量每m3水體0.10～0.15 g，加2 000倍水稀釋均勻后，全池潑灑，病情嚴重第2天再用1次。