養(yǎng)殖黃顙魚細(xì)菌性疾病的藥物篩選與療效觀察

最近幾年，因?yàn)榇罅康B(yǎng)殖水產(chǎn)動(dòng)物的市場(chǎng)價(jià)格一直處于非常低迷的狀態(tài)，而在全國(guó)范圍內(nèi)，黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）的市場(chǎng)價(jià)格卻一直是相對(duì)穩(wěn)定的，因此，黃顙魚成為了水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中的新寵。

隨著全國(guó)范圍內(nèi)黃顙魚養(yǎng)殖面積不斷增加，養(yǎng)殖密度和飼料用量不斷攀升，必然導(dǎo)致養(yǎng)殖水體環(huán)境日益惡化，各種危害養(yǎng)殖黃顙魚的疾病也開始逐漸在養(yǎng)殖黃顙魚中蔓延開來(lái)，有些種類的病害還導(dǎo)致養(yǎng)殖黃顙魚的爆發(fā)性死亡（圖1）。

根據(jù)我們對(duì)湖北省宜昌市和枝江市周邊養(yǎng)殖黃顙魚疾病的調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)由致病性細(xì)菌引起的黃顙魚病害問(wèn)題顯得特別突出。國(guó)內(nèi)也已經(jīng)有研究結(jié)果表明，能危害養(yǎng)殖黃顙魚的細(xì)菌性病害種類較多，如由遲緩愛(ài)德華菌（Edwardsiella tarda）、鮰愛(ài)德華菌（E.ictaluri）嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）、溫和氣單胞菌（A.sobria）、柱狀黃桿菌（Flavobacterium cloumnare）、無(wú)乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）等致病性細(xì)菌，均可導(dǎo)致養(yǎng)殖黃顙魚出現(xiàn)細(xì)菌性敗血癥（bacterial septicemia）的相似癥狀。

除這些由病原性細(xì)菌引起的所謂細(xì)菌性疾病外，還有由致病性病毒、各種寄生蟲引起的生物性疾病，以及惡劣養(yǎng)殖環(huán)境因素造成養(yǎng)殖黃顙魚類的非生物性病害。對(duì)患病黃顙魚生物性疾病的研究結(jié)果證明，細(xì)菌性疾病是危害養(yǎng)殖黃顙魚的主要生物性病害。

對(duì)于黃顙魚的細(xì)菌性疾病，國(guó)內(nèi)、外的水產(chǎn)動(dòng)物病害防控研究者以及養(yǎng)殖業(yè)者，大多都是依靠對(duì)致病性細(xì)菌具有良好抑菌效果的抗微生物藥物進(jìn)行治療的。但是，由于長(zhǎng)期以來(lái)我國(guó)的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者在藥物治療養(yǎng)殖黃顙魚疾病時(shí)，并沒(méi)有按照科學(xué)的選擇和使用藥物的方法用藥，直接導(dǎo)致現(xiàn)在發(fā)生養(yǎng)殖黃顙魚細(xì)菌性疾病后，難以找到能有效治療疾病的藥物了。

這是因?yàn)辄S顙魚的致病性細(xì)菌也能對(duì)抗微生物藥物產(chǎn)生耐藥性（drug resistance），如果在治療養(yǎng)殖黃顙魚細(xì)菌性的過(guò)程中，長(zhǎng)期濫用某些抗微生物藥物，就必然會(huì)引起致病性細(xì)菌對(duì)這種藥物耐藥性的快速產(chǎn)生，最終導(dǎo)致面對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的各種細(xì)菌性疾病而無(wú)有效藥物可用的局面。

為了有效控制養(yǎng)殖黃顙魚的各種細(xì)菌性疾病，我們利用在宜昌市和當(dāng)陽(yáng)市建設(shè)的幾個(gè)“陳昌福魚病防控實(shí)驗(yàn)室”（圖2）的條件，從一些當(dāng)?shù)厮a(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者送來(lái)的各種患病黃顙魚養(yǎng)殖區(qū)送來(lái)的患病黃顙魚，通過(guò)觀察患病黃顙魚外觀癥狀、從患病黃顙魚體內(nèi)分離獲致病性菌株，并且完成分離菌株對(duì)多種抗微生物藥物的敏感性檢測(cè)的基礎(chǔ)上，篩選治療患病黃傘與適宜的水產(chǎn)用獸藥。幫助黃顙魚養(yǎng)殖業(yè)者做到科學(xué)選擇、精準(zhǔn)使用水產(chǎn)用獸藥，有效地提高了水產(chǎn)用獸藥對(duì)患病黃顙魚的治療效果與養(yǎng)殖成功率。

1.材料與方法

1.1患病黃顙魚的來(lái)源

患病黃顙魚主要是由湖北省宜昌市、當(dāng)陽(yáng)市和枝江市的水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)域，大多是由黃顙魚養(yǎng)殖業(yè)者送來(lái)實(shí)驗(yàn)室委托我們協(xié)助診治其疾病的魚體。

1.2主要外觀癥狀

從患病黃顙魚體表觀察到的癥狀，主要有以下幾種典型癥狀。

1.2.1腹部膨大

不同規(guī)格的患病黃顙魚均有不同比例的腹水癥狀（圖3）。

1.2.2體表潰瘍

在患病黃顙魚中，出現(xiàn)最多癥狀的還是出現(xiàn)在身體不同部位的體表潰瘍（圖4）。

1.2.3紅頭裂頭

經(jīng)?？梢栽诓煌?guī)格的患病黃顙魚中，觀察到紅頭（俗稱“一點(diǎn)紅”）和裂頭的癥狀（圖5）。

1.2致病性細(xì)菌菌株分離與純化

在無(wú)菌條件下解剖患病黃顙魚，主要從其腎臟和腦等器官和組織中分離細(xì)菌，在腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基（BHIA，Difco）平板上作劃線后，將接種分離細(xì)菌后的培養(yǎng)皿置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)36~48 h后，從生長(zhǎng)出菌落中挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，以獲取純化的分離菌株。先后共分離純化到多個(gè)優(yōu)勢(shì)菌株，將純化后的分離菌株置于4℃冰箱中保存，供作分離菌株對(duì)抗微生物藥物的藥物敏感性檢測(cè)。

1.3供試抗微生物藥物

采用市售16種抗微生物獸藥作為本試驗(yàn)中的供試藥物。供試藥物的名稱與批號(hào)如表所示。

1.45最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

依日本化學(xué)療法學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)法進(jìn)行。即首先將供試抗微生物藥物用適宜的容媒預(yù)溶后，用滅菌生理鹽水按照上述制劑中抗微生物藥物的含量，分別稀釋至1000~0.25mg/L的２倍稀釋的13個(gè)濃度。然后用腦心浸液培養(yǎng)基（BHI，Difco）將各濃度的藥物液稀釋10倍，從而使培養(yǎng)基中的各種藥物的濃度達(dá)到100.0~0.025mg/L的２倍稀釋的13個(gè)濃度。最后向每支盛有2.9 mL培養(yǎng)基的試管中加入0.1 mL濃度為1.2×10 6cfu/mL活菌液，在28℃條件下連續(xù)培養(yǎng)3d，經(jīng)肉眼觀察證實(shí)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)試管中的最低藥物濃度，即為某種抗微生物藥物對(duì)分離菌株的最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）。

2.結(jié)果

2.1分離菌株對(duì)各種抗微生物藥物的MIC

本實(shí)驗(yàn)室先后完成了從各地養(yǎng)殖的患病黃顙魚體內(nèi)分離、純化的20多個(gè)菌株，對(duì)16種供試抗微生物藥物獸藥制劑完成的藥物感受性檢測(cè)結(jié)果如表2所示。從表2所示結(jié)果可以看出，分離菌株對(duì)有些抗微生物藥物的MIC檢測(cè)結(jié)果不夠理想，因?yàn)榉蛛x菌株對(duì)多種抗微生物藥物制劑，已經(jīng)產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。

2.2藥物的投喂與藥物治療效果

根據(jù)對(duì)16種抗微生物藥物制劑對(duì)患病黃顙魚中分離菌株的MIC檢測(cè)結(jié)果，建議黃顙魚養(yǎng)殖者選擇在水產(chǎn)養(yǎng)殖中可以使用的，而且對(duì)分離菌株尚敏感的一些抗微生物藥物，作為患病黃顙魚的治療藥物，分別用于不同地方的患病黃顙魚治療。

在本次選擇的16種供試抗微生物藥物制劑中，從來(lái)自不同養(yǎng)殖區(qū)域的患病黃顙魚中分離的致病性菌株，顯示出對(duì)同種抗微生物藥物不同的敏感性，部分分離菌株對(duì)許多供試抗微生物藥物制劑均已經(jīng)產(chǎn)生了比較嚴(yán)重的抗藥性。

本試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，在黃顙魚養(yǎng)殖過(guò)程中濫用抗微生物藥物的問(wèn)題，還是比較普遍和嚴(yán)重的。我們要提醒廣大的黃顙魚養(yǎng)殖業(yè)者，科學(xué)、精準(zhǔn)地使用抗微生物藥物，不僅可以確保水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康、綠色和可持續(xù)發(fā)展，而且對(duì)于養(yǎng)殖黃顙魚疾病的有效控制，確保養(yǎng)殖成功，也是非常重要的。

根據(jù)對(duì)分離菌株藥物敏感性檢測(cè)結(jié)果，選擇合適在不同養(yǎng)殖區(qū)域用藥的抗微生物藥物，根據(jù)黃顙魚總體重計(jì)算用藥量拌和在飼料中投喂給藥。將全天的用藥量拌和在1次投喂的餌料中，每天投喂1次藥物餌料，連續(xù)投喂5天為一個(gè)給藥療程。在投喂藥物餌料期間，采用質(zhì)量較好的二氧化氯作全池潑灑用消毒劑，隔天消毒池水1次，連續(xù)消毒池水2次，消毒的目的在于消滅養(yǎng)殖水體中部分致病菌。

對(duì)多家養(yǎng)殖業(yè)者飼養(yǎng)黃顙魚疾病的藥物治療結(jié)果證明，這種從患病黃顙魚體內(nèi)分離致病菌株，在完成分離菌株對(duì)藥物敏感性測(cè)定的基礎(chǔ)上，選擇對(duì)分離菌株具有良好抑菌效果的抗生素類藥物，并且按照分離菌株對(duì)抗生素藥物的敏感性確定用藥量后，實(shí)施精準(zhǔn)給藥的方法，黃顙魚的細(xì)菌性疾病是可以獲得有效地治療的。

如果是不完成患病黃顙魚體內(nèi)致病細(xì)菌的分離、不進(jìn)行致病菌對(duì)抗生素類獸藥的藥物敏感性檢測(cè)，而是盲目地使用一些水產(chǎn)用抗生素類獸藥的話，就可能因?yàn)椴荒茏龅綔?zhǔn)確選擇藥物，無(wú)法做到在治療黃顙魚疾病的過(guò)程中實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)用藥，這可能就是有些養(yǎng)殖業(yè)者多次使用藥物治療黃顙魚疾病，均難以獲得有效結(jié)果的原因所在。